全 文 ：湖 北 农 业 科 学 2011 年
收稿日期：2010－11－30
作者简介：黄国霞（1981－），女，广西贺州人， 实验师，硕士，主要从事药物小分子的研发及药用机理研究，（电话）13978237019（电子信箱）
guoxiahuang2007＠yahoo．com．cn。
火炭母（Polygonum chinense L．）为蓼科（Polyg-
onaceae）植物，生长于水沟边、山谷、湿地上，具有清
热利湿、凉血解毒等功效，可用于湿热泄泻、痢疾、
黄疸、咽喉肿痛、湿热疮疹、霉菌性阴道炎等病症的
治疗［1］，是广东地区常用的中草药。已有人用 10％的
火炭母滴眼液治疗角膜薄翳、角膜斑翳等眼疾［2］。火
炭母中的药用成分主要为黄酮、生物碱、芳香杂环
类化合物等 ［3］，朱华等发现，火炭母中含有丰富的槲
皮素［4］。
自由基具有强氧化性， 可损坏机体组织和细
胞，过量自由基的产生是人体衰老及各种疾病产生
的诱导因素之一 ［5，6］，因此，加速清除体内过多的自
由基显得尤为重要［7］。 本文采用超声波辅助手段提
取了火炭母中的有效成分，并对提取工艺进行了优
化， 采用 H2O2/Fe2＋体系法和邻苯三酚体系法对提取
物的抗氧化活性进行了研究，旨在为进一步研究火
炭母的理化作用提供依据，以便人们对火炭母这一
传统药材有更充分的认识，从而使其开发利用更加
科学合理。
1 材料与方法
1．1 仪器与试剂
火炭母全草采集于柳州市郊，清洗去泥，晾晒 2
d后置入烘箱中烘干，用粉碎机粉碎，待用。甲醇、石
油醚（60－90）、乙酸乙酯、PBS 缓冲溶液、0．75 mmol ／
mL 邻二氮菲溶液、0．75 mmol ／ mL 硫酸亚铁溶液 、
0．01％ H2O2、 维生素 C 标准溶液、0．05 mol ／ L Tris－
HCl、0．2 mmol ／ L 邻苯三酚、10 mmol ／ L HCl 等试剂
火炭母有效成分的提取及抗氧化活性研究
黄国霞 1，刘 柳 1，汪 青 1，黄姿梅 2
（1．广西工学院生物与化学工程系，广西 柳州 545006； 2．柳州职业技术学院汽车与环境工程系，广西 柳州 545006）
摘要：为了探讨火炭母（Polygonum chinense L．）有效成分的抗氧化作用，采用超声波辅助手段对火炭母
中的有效成分进行了提取，并用 H2O2/Fe2＋体系法和邻苯三酚体系法对其抗氧化活性进行了研究。 结果表
明，当采用甲醇与水体积比为 1∶1 混合液为提取溶剂时，火炭母提取液具有较高的抗氧化活性，40 g 原材
料的提取液对羟自由基的清除效果与 6．29 g 维生素 C 的作用相当，而对超氧阴离子的清除效果与 9．82 g
维生素 C 的作用相当。
关键词：火炭母；抗氧化；羟自由基
中图分类号：Q949．744；R284．2 文献标识码：A 文章编号：0439－8114（2011）12－2490-03
Effective Component Extracting and Its Antioxidant Activity in Polygonum chinense
HUANG Guo－xia1，LIU Liu1，WANG Qing1，HUANG Zi－mei2
（1． Department of Biological and Chemical Engineering， Guangxi University of Technology，Liuzhou 545006，Guangxi，China；
2．Department of Automotive and Environmental Engineering， Liuzhou Vocational and Technical College，Liuzhou 545006，Guangxi，China）
Abstract： In order to study the antioxidant activity，the effective components in Polygonum chinense L． were extracted by
ultrasonic auxiliary method， and the antioxidant activity was detecminated by H2O2/Fe2＋ system and adjacent pyrogallol system．
The results showed that the extracted liquid had higher antioxidant activity when the volume ratio of methanol and water was
1∶1． The effect of 40g raw materials was almost equal to 6．29 g vitamine C for the removal of hydroxyl radicals， and equal to
9．82 g vitamin C for the removal of superoxide anion．
Key words： Polygonum chinense L．； antioxidant； hydroxyl radical
第 50卷第 12期
2011年 6 月
湖北农业科学
Hubei Agricultural Sciences
Vol． 50 No.12
Jun．，2011
DOI:10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2011.12.038
第 12 期
均为分析纯，所用水为去离子水。 仪器主要有 ZN－
500A 中草药粉碎机 （长沙市中南制药机械厂 ）、
JY88－1超声波细胞破碎机（宁波新芝科器研究所）、
RE－520 旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）、微波
炉（广东格兰仕集团有限公司）。
1．2 方法
1．2．1 维生素 C对·OH清除率标准曲线的绘制 在
10 mL 具塞比色管中， 依次加入 1 mL 0．75 mmol ／ L
邻二氮菲溶液 ，2 mL pH 值 7．4 的 PBS 缓冲液 ，1
mL 不同浓度的样品液或维生素 C 标准溶液， 充分
混匀后， 再加入 1 mL 0．75 mmol ／ L 硫酸亚铁溶液，
混匀后再加入 1 mL 0．01％ H2O2，37 ℃温育 60 min，
在波长 536 nm处测定吸光度值，同时用 1 mL的去
离子水代替样品液，作为损伤管；用 1 mL 的去离子
水代替 H2O2，作为空白管。 每个处理试样均做 3 个
平行，取平均值。通过以下公式计算出不同维生素 C
浓度的·OH清除率，并绘制标准曲线。
·OH清除率＝ A 样-A 损
A 空-A 损
×100％
1．2．2 超氧阴离子的清除试验 根据吴慧平的方
法［8］，邻苯三酚在碱性条件下能发生自氧化，生成有
色中间物（在 420 nm 处有最大吸收峰）和超氧阴离
子（·O2－），超氧阴离子对自氧化又起催化作用，依据
有色中间物生成量的多少，可判断超氧阴离子生成
量的多少 ［9］。 具体测定方法是在 10 mL 的比色管中
分别加入 4 mL Tris－HCl 缓冲液（pH 值 8．2），置于
25 ℃水浴中预热 20 min， 然后分别加入 20、40、60、
80、100 μg/mL 的样品液或维生素 C 溶液 1 mL，再
加入在 25 ℃预热 20 min 的 1 mL 0．2 mmol ／ L 邻苯
三酚溶液（邻苯三酚用 0．05 mol ／ L 的 HCl 配制），混
匀后在 25℃水浴中反应 4 min，立即用 2 滴 8 mol ／ L
的 HCl终止反应， 并在波长 420 nm 处测定吸光度
值，以等体积 10 mmol ／ L 的 HCl 代替邻苯三酚溶液
为空白，调零；对照组为 1 mL 的维生素 C 溶液。 每
个处理试样均做 3 个平行试验， 取平均值，其中维
生素 C为阳性对照。 按下式计算·O2－清除率［6］，并绘
制标准曲线。
·O2－清除率＝
A 对照-A 样
A 对照
×100％
1．2．3 火炭母有效成分的提取 称取火炭母粉末
40 g，分别加入 600 mL 甲醇，在 200 W 超声波细胞
破碎机里处理 40 min 后回流提取 2 h， 所得提取物
经过脱色、过滤得提取液，并蒸发浓缩至 50 mL，从
中取出 1 mL，稀释一定倍数，利用 H2O2/Fe2＋体系法
测定其对羟自由基的清除作用，或者利用邻苯三酚
体系法测定其对超氧阴离子的清除作用，计算出清
除率，并与维生素 C 标准曲线比较，计算出稀释液
中与维生素 C 相当的浓度，再根据稀释倍数计算得
出总提取液中与维生素 C相当的物质含量。
1．2．4 火炭母有效成分的提取条件优化 试验对
火炭母有效成分的提取条件分别进行了比较，①提
取方法对火炭母有效成分提取效果影响因素有直
接浸泡、超声波辅助浸泡、微波辅助浸泡 3 种方法；
②在超声波功率设置为 200 W 的前提下，比较了超
声波时间对火炭母有效成分提取效果的影响，处理
时间分别为 20、40、60、80 min；③对火炭母有效成分
提取效果影响的溶剂分别为甲醇、水、乙酸乙酯、石
油醚；④甲醇浓度（甲醇∶水，体积比）对火炭母有效
成 分 提 取 效 果 影 响 的 配 比 选 择 分 别 是
1∶2、1∶1、2∶1、5∶1、1∶0。
2 结果与分析
2．1 维生素 C对·OH清除率的标准曲线
根据测定结果绘制维生素 C 对·OH 清除率的
标准曲线，结果见图 1，从图 1 可见，清除率与维生
素 C浓度有很好的线性关系，相关系数为 0．998 4。
2．2 维生素 C对·O2－清除率的标准曲线
由测定结果绘制维生素 C 对·O2－清除率的标准
曲线，结果维生素 C 浓度在 0～100 μg ／ mL 范围内，
与清除率有良好的线性关系， 其线性方程为 y＝
0．002 1x＋0．003 5，相关系数为 0．991 1，可以作为标
准曲线对火炭母提取液中的抗氧化效果进行测定。
2．3 条件优化
2．3．1 提取方法对火炭母有效成分提取效果的影
响 试验考察了直接浸泡、微波辅助浸泡、超声波
辅助浸泡 3 种方法对火炭母有效成分提取效果的
影响，结果见表 1，由表 1 可知，在超声波辅助的前
提下， 提取液对·OH－的清除率较其他两种方法要
高。
2．3．2 超声波时间对火炭母有效成分提取效果的
影响 在超声波功率设置为 200 W 的前提下，分别
进行超声波处理 20、40、60、80 min， 以比较超声波
50
40
30
20
10
0
·
OH
清
除
率
//%
0 20 40 60 80 100
维生素 C 浓度//μg/mL
图 1 维生素 C 对·OH 清除率标准曲线
y=0.004 8x-0.069 3
黄国霞等：火炭母有效成分的提取及抗氧化活性研究 2491
湖 北 农 业 科 学 2011 年
（责任编辑 王 珞）
时间对火炭母有效成分提取效果的影响，结果见表
2， 从表 2 结果可见， 当超声波处理时间为 40 min
时，对火炭母有效成分提取的效果最佳。
2．3．3 溶剂种类对火炭母有效成分提取效果的影
响 试验分别用甲醇、水、乙酸乙酯和石油醚 4 种
溶剂对火炭母有效成分进行了提取，比较它们的提
取液对·OH－的清除情况，结果见表 3。 从表 3 可见，
火炭母甲醇提取液对·OH－的清除率最高，是提取火
炭母抗氧化有效成分的理想溶剂。
2．3．4 甲醇浓度对火炭母有效成分提取效果的影
响 甲醇浓度（甲醇∶水，体积比）对火炭母有效成分
提取效果影响的测定结果见表 4，由表 4 可知，不同
浓度甲醇对提取液的抗氧化性能影响较大，当甲醇∶
水为 1∶1时，提取液对·OH－的清除效果最好。
2．4 提取液对超氧阴离子的清除率
综合前述优化条件， 采用超声波处理 40 min、
甲醇∶水为 1∶1、提取液体积为 600 mL、回流 2 h 时的
火炭母提取液，对·O2－进行清除率测定，结果见表 5，
由表 5 可知， 火炭母提取液对·O2－有较强的清除作
用，通过计算得出当火炭母原料为 40 g、提取液浓缩
至 50 mL 时，总提取液对超氧阴离子的清除效果与
9．82 g维生素 C的效果相当。
3 小结与讨论
试验采用超声波辅助手段方法对火炭母中抗
氧化成分进行了提取， 用 H2O2/Fe2＋体系法和邻苯三
酚体系法对提取液中的有效成分进行了测定，所得
结果显示，火炭母甲醇提取液具有较强的抗氧化作
用，可以为火炭母制剂临床用药及保健用药提供参
考。
参考文献：
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技术出版社，1999．647－649．
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步研究［J］． 结核病与胸部肿瘤，2008（1）：25－29．
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现代农业科学，2009，9（16）：1－2．
表 1 不同提取方法的火炭母有效成分提取效果
提取方法
直接浸泡
微波辅助浸泡
超声波辅助浸泡
600 倍稀释液的
·OH-清除率//%
17.90
23.48
35.65
总提取液相当于
维生素 C 的量//g
4.44
4.40
6.29
表 3 不同溶剂条件下的火炭母有效成分提取效果
溶剂
甲醇
水
乙酸乙酯
石油醚
600 倍稀释液的
·OH-清除率//%
35.65
2.46
18.11
4.72
总提取液相当于
维生素 C 的量//g
6.29
2.00
1.12
0.36
表 2 不同超声波时间的火炭母有效成分提取效果
时间
min
20
40
60
80
600 倍稀释液的·OH-清除率
%
12.54
28.10
27.41
27.06
总提取液相当于维生素 C 的量
g
4.55
6.34
5.23
4.16
表 4 不同甲醇浓度条件下的火炭母有效成分提取效果
甲醇∶水
1∶2
1∶1
2∶1
5∶1
1∶0
600 倍稀释液的·OH-清除率
%
52.59
85.50
52.70
28.59
25.89
总提取液相当于维生素 C 的量
g
4.44
6.29
4.17
2.36
1.99
表 5 提取液对·O2-的清除效果
样品号
1
2
3
4
5
平均值
600 倍稀释液的·O2-清除率
%
41.95
38.45
45.45
36.71
47.55
42.02
总提取液相当于维生素 C 的量
g
9.57
8.95
10.68
8.64
11.24
9.82
2492