全 文 ：药 物 生 物 技 术
Pharmaceutical Biotechnology 2012，19(4) :332 ～ 333
毛脉酸模内生真菌 RGT-S11菌丝体化学成分研究
王 博1，2，王振月1
* ，王星星1，3，郑成琳1，卫丽曼1
(1. 黑龙江中医药大学 药学院;2. 黑龙江珍宝岛药业药物研究院;
3. 江苏康缘药业股份有限公司 现代中药研究院妇科新药研究所)
摘 要 研究毛脉酸模(Rumex gmelini Turcz.)内生真菌 RGT-S11 菌丝中的化学成分。运用溶剂萃取、硅胶
柱色谱、ODS反相柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱、制备液相等方法进行分离纯化，根据理化性质、NMR 数据鉴定
化合物的结构。结果:分离得到 7 个单体化合物:苯甲酸(Ⅰ) ，棕榈酸(Ⅱ) ，麦角甾-5，7，22-三烯-3β-醇(Ⅲ) ，油
酸(Ⅳ) ，腺苷(Ⅴ) ，鸟苷(Ⅵ) ，没食子酸(Ⅶ)。以上化合物均为首次从内生真菌 RGT-S11 菌丝中分离得到。
关键词 毛脉酸模;内生真菌;化学成分;提取分离;结构鉴定;相关性
中图分类号 Q936 文献标志码 A 文章编号 1005-8915(2012)04-0332-03
自 1993年首次报道从短叶紫杉(Taxus brevifolia)的树
皮中分离出可以产生抗肿瘤化合物紫杉醇的内生真菌以
来，人们对内生真菌活性代谢产物与宿主植物的关系的研
究越来越关注［1］。植物内生真菌自身不但能产生丰富多样
的生物活性代谢产物，为天然药物的研究提供丰富的潜在
资源，而且还可以通过合成的抗生素、激素、酶抑制剂、诱导
物等多种活性物质或通过诱导物(葡聚糖、糖蛋白、花生四
烯酸等不饱和脂肪酸)胁迫宿主植物合成的萜类、生物碱、
皂苷、黄酮等次生代谢产物，并具备促进宿主植物合成活性
成分的能力［2］。同时，内生真菌产生的次生代谢产物，还可
以产生一些重要的药物，具有很高的开发利用价值。
毛脉酸模(Rumex gmelini Turcz. )为蓼科酸模属植物。
民间以根入药，具有抗真菌、抗肿瘤、抗病毒和抗氧化作
用［3］。本课题组多年来从各方面对其进行了深入的研究，
从一年生毛脉酸模根、茎、叶中分离出 42 株内生真菌，并对
其与宿主成分相关性及代谢产物生物活性进行了初步的研
究。本课题组从 RGT-S4 的菌丝中分离出 7 个化合物，其中
腺苷是一种存在于体内所有细胞中的内源性核苷，具有舒
张血管，降低血压，减慢心律，增加 cAMP 刺激肾上腺素等
多种生理活性，在临床心血管疾病的诊断和治疗方面得到
了广泛的应用［4］。苯甲酸是高效的抗真菌类药物，临床用
于治疗皮肤真菌类疾病。没食子酸具有抗病毒的作用。麦
角甾醇是重要医药化工原料，可以生产多种药物［5］。
1 仪器和材料
核磁共振光谱仪采用 INOVA-600 型超导核磁共振光
谱(美国 Varian 公司)测定;制备液相色谱仪为 Waters
D600-2489，采用大连依利特公司 Hypersil-ODSⅡ(10 μm，
300 mm ×20 mm)制备型色谱柱;柱层析硅胶(青岛海洋化
工厂，80-100，200-300目) ;反相填料 YMC GEL ODS-A型与
三菱化学 MCI GEL CHP20P;葡聚糖凝胶 GE Sephadex-
LH20，薄层色谱用硅胶板(HPTLC Silica gel 60 F254)为德
国 Merck公司产品;苯甲酸标准品(批号:100419-200301 中
国生物制品检定所) ;化学试剂为分析纯(天津市富宇精细
化工股份有限公司)。
供试菌株为本课题组从一年生毛脉酸模中分离得到，
经过形态学及 rDNA扩增、测序、遗传进化分析鉴定为链格
孢属真菌，编号 RGT-S11。
2 提取分离
取经过活化的菌种，接种于 350 mL PDA液体培养基中，
置于 28 ℃恒温振荡培养箱中培养 7 d，将菌丝与菌液用 8 层
纱布过滤蒸馏水冲洗干净后 60 ℃水浴将菌丝体蒸干备用。
毛脉酸模内生真菌 RGT-S4 干燥菌丝体共 1 kg，用 8 倍
量 70%乙醇回流提取 3 次，合并滤液，减压干燥得到浸膏以
蒸馏水混悬，分别以石油醚，乙酸乙酯，水饱和正丁醇萃取。
减压回收上述萃取液，得到石油醚萃取部分 0. 5 g，乙酸乙
酯萃取部分 47 g，水饱和正丁醇萃取部分 120 g，本文对乙
酸乙酯和水饱和正丁醇部分进行进一步分离。
乙酸乙酯部分 47 g经硅胶柱色谱，依次以二氯甲烷-甲
醇(纯二氯甲烷，50∶ 1，30∶ 1，15∶ 1)为洗脱剂进行梯度洗脱，
分别得到 Fr. 1 ～ Fr. 4 4 个组分，Fr. 1 经过硅胶色谱得到化
233
* 收稿日期:2012-04-05 修回日期:2012-05-03
基金项目:国家自然科学基金项目(No． 30970300)。
作者简介:王博(1985-) ，从事中药新药研究与开发。
* 通讯作者:王振月(1956-) ，主要研究方向为中药资源开发与生物技术。E-mail:wangzhen_yue@ 163. com，电话:13314514353。
王 博等:毛脉酸模内生真菌 RGT-S11 菌丝体化学成分研究
合物Ⅰ(12 mg) ，Fr. 2 经硅胶柱色谱得到化合物Ⅱ(9 mg) ，
Ⅳ(11 mg)。Fr. 3 经过硅胶柱色谱得到化合物Ⅲ(25 mg)。
正丁醇部分 120 g 经 MCI 柱色谱，依次以水，30%甲
醇，60%甲醇，甲醇作为洗脱剂洗脱，得到水部位 85 g，30%
甲醇部位 8 g，60%甲醇部位 7 g，甲醇部位 7. 9 g。30%甲醇
部位经过 Sephadex LH-20 柱色谱，甲醇洗脱，得到 Fr. 1 ～
Fr. 3 3 个组分，Fr. 1 经过制备液相得到化合物Ⅴ(20 mg) ，
Ⅵ(10 mg)。甲醇部位 7. 9 g经过硅胶柱色谱，得到化合物
Ⅶ(11 mg)。
3 结构鉴定
化合物Ⅰ:白色片状晶体，易溶于氯仿，mp:121 ℃，使
用高效液相色谱仪(HPLC)检测(色谱条件为甲醇-水 = 60∶
40，检测波长 254 nm)检测，与苯甲酸标准品比对，保留时
间一致。混合测试熔点不降低，推定为苯甲酸。
化合物Ⅱ:白色片状晶体，易溶于氯仿，mp:62 ℃，1H-
NMR(600 MHz，CDCl3) :δH:0. 88(3H，t，J = 7. 0 Hz) ，1. 62
(2H，q，J = 7. 0 Hz) ，2. 35(2H，t，J = 7. 5 Hz)和含有 24 个 H
的单宽峰:1. 28(24H，brs) ，13 C-NMR:δC:14. 1(C-16) ，22. 6
(C-15) ，24. 9(C-14) ，29. 0 ～ 30. 0(C-4 ～ 13) ，32. 1(C-3) ，
34. 0(C-2) ，174. 6(C-1) ，经与文献［6］对照而鉴定为棕榈酸。
化合物Ⅲ:无色针状结晶(氯仿) ，mp:l51-152 ℃，Liber-
mann-Buchard 反应显阳性。1H-NMR(600 MHz，CDCl3)谱
中高场区 δH:0. 68(3H，S) ，1. 08(3H，d，J = 6. 5 Hz) ，0. 89
(3H，d，J = 6. 0 Hz) ，0. 97(3H，d，J = 6. 0 Hz) ，0. 99(3H，S) ，
0. 87(3H，d，J = 6. 0 Hz) ，低场区 δH:5. 22(1H，dd，J = 15. 0，
7. 0 Hz) ，5. 39(1H，m)和 5. 57(1H，dd，J = 6. 6，2. 5 Hz)。
13C-NMR:δC:38. 3(C-1) ，31. 9(C-2) ，70. 4(C-3) ，40. 7(C-
4) ，139. 7(C-5) ，119. 5(C-6) ，116. 2(C-7) ，141. 3(C-8) ，
46. 2(C-9) ，38. 3(C-10) ，21. 0(C-11) ，39. 0(C-12) ，42. 8(C-
13) ，54. 5(C-14) ，22. 9(C-15) ，28. 2(C-16) ，55. 7(C-17) ，
12. 0(C-18，CH3) ，16. 2(C-19，CH3) ，40. 4(C-20) ，21. 0(C-
21，CH3) ，135. 5(C-22) ，131. 9(C-23) ，42. 8(C-24) ，33. 0
(C-25) ，19. 9(C-26，CH3) ，19. 6(C-27，CH3) ，17. 5(C-28，
CH3)将波谱数据与文献［7］道的数据相一致，确定为麦角
甾-5，7，22-三烯-3β-醇(ergosta-5，7，22-trien-3β-ol)。
化合物Ⅳ:白色无定形粉末，溴甲酚蓝反应呈阳性，
1H-NMR(600 MHz，DMSO-d6)δH:0. 86(2H，t，J = 6. 9 Hz)为
CH3 信号，δH:1. 23 ～ 1. 28 为众多 CH2 信号，δH2. 15(1H，t，
J = 6. 1Hz)为与羰基相连的位质子信号，δH:5. 31 为烯烃质
子信号。13C-NMR:δC:174. 4(C-1，-COOH) ，33. 6(C-2) ，31. 2
(C-3) ，26. 5(C-4) ，26. 5(C-5) ，129. 6(C-9) ，129. 5(C-10) ，
28. 4 ～ 28. 8(-CH2) ，13. 9(C-18，-CH3) ，将数据与文献［8］中
的油酸相同，确定为油酸。
化合物Ⅴ:白色无定形粉末，Molish 反应成阳性，
1H-NMR(600 MHz，DMSO-d6)谱显示两个单峰芳香氢信号
δH:8. 27(1H，s) ，δH8. 06(1H，s) ，单峰氢信号 δH:7. 27(2H，s，
NH2) ，糖端基氢信号 δH:5. 82(1H，d，J = 6 Hz) ，由其偶合常
数可知苷键为 β 构型。在13 C-NMR 谱中，δC:139. 8(C-2) ，
119. 3(C-3a) ，156. 1(C-4) ，152. 3(C-6) ，149. 0(C-7a) ，五碳
糖信号 δC:87. 9(C-1) ，73. 4(C-2) ，70. 6(C-3) ，85. 9(C-
4) ，61. 7(C-5) ，经与文献中［9］数据比较，确定化合物为
腺苷。
化合物Ⅵ:白色粉末，易溶于水、甲醇、较难溶于丙
酮。1H-NMR(600 MHz，DMSO-d6)δH:10. 61(2H，s，NH) ，
6. 39(2H，s，NH2) ，7. 86(1H，s) ，5. 65(1H，d，J = 6. 0 Hz) ，
4. 35(1H，t，J = 6. 0 Hz) ，4. 05(1H，t，J = 3. 6 Hz) ，3. 49(1H，
m) ，3. 57(1H，m) ;13 C-NMR:δC:153. 6(C-1) ，151. 3(C-2) ，
116. 7(C-3) ，δ156. 7(C-4) ，135. 5(C-5)为双键碳信号，
δC86. 3(C-1) ，73. 6(C-2) ，70. 3(C-3) ，85. 1(C-4) ，61. 3
(C-5)为 5 个连氧碳信号，经与文献中［10］据比较，确定化
合物为鸟苷。
4 结论与讨论
本课题组对毛脉酸模根中的内生真菌 RGT-S11 菌丝中
化学成分进行分离与鉴定，初步分离得到苯甲酸(Ⅰ) ，棕
榈酸(Ⅱ) ，麦角甾-5，7，22-三烯-3β-醇(Ⅲ) ，油酸(Ⅳ) ，腺
苷(Ⅴ) ，鸟苷(Ⅵ) ，没食子酸(Ⅶ)7 个单体化合物，其中饱
和脂肪酸和内源性核苷为诱导物与信号传递物质，可能是
内生菌对宿主植物的生物学作用的物质基础之一，本课题
组将对毛脉酸模内生真菌 RGT-S11 菌丝的其它组分及菌液
的化学成分进行进一步研究，以期寻找其它活性成分。本
研究为毛脉酸模及其内生真菌相关性的进一步研究并奠定
了基础。也为毛脉酸模及其内生真菌进一步的开发利用提
供理论依据。
参 考 文 献
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Study on the Removal of Endotoxin from Succinylated Gelatin
ZHAO Wei，CAO Yu-hong，ZHU Ling，DAI Jun，LI Xin-zhu，HU Ming-tong，LI Qi-de
(Jiangsu Chia-tai Tianqing Pharmaceutical Co．，Ltd． R＆D centre，Nanjing，210042)
Abstract To develop an extraction method to remove endotoxin from succinylated gelatin． Using Triton X-114 as extractor，endotoxin
in succinylated gelatin was extracted by controlling the temperature． Quantity of endotoxin and succinylated gelatin，and the molecular
weight of the gelatin were measured before and after extraction to evaluate the efficiency of the extraction． Result:amount of endotoxin
was lowered from 2500 ～ 5000 EU /mL to 0． 25 ～ 2． 5EU /mL without influence on the quantity and molecular weight of the succi-
nylated gelatin． Extraction by Triton X-114 was an effective method in reducing the amount of endotoxin present in the succinylated
gelatin． It can be developed to be an endotoxin removal process for manufacture．
Key words Triton X-114，Extraction，Endotoxin，Succinylated gelatin，
櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗
Multi-angle laser scatting
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Studies on Chemical Constituents of RGT-S11 Mycelium from Rumex
gmelini Turcz.
WANG Bo1，2，WANG Zhen-yue1* ，WANG Xing-xing1，3，ZHENG Cheng-lin1，WEI Lin-man1
(1． Heilongjiang University of TCM;2． ZhenBaodao Institute of Pharmaceutical Research;3． Kanion Pharmaceuti-
cal Company)
Abstract To study the chemical constituents of RGT-S11 mycelium from Rumex gmelini Turcz，various techniques，including silica
gel column chromatography，ODS reversed phase chromatography column，Sephadex LH-20 chromatography column，preparative
HPLC and method of recrystallization were applied to the separation of RGT-S11 mycelium． Seven compounds were isolated and
identified as benzoic acid(Ⅰ) ，palmitic acid (Ⅱ) ，ergosta-5，7，22-trien-3β-ol (Ⅲ) ，oleinic acid (Ⅳ) ，adenosine (Ⅴ) ，guanosine
(Ⅵ) ，gallic acid (Ⅶ)by 1H-NMR，13C-NMR，HMBC，HSQC，modern spectroscopy methods and so on． Compounds Ⅰ ～Ⅵ were
isolated from RGT-S11 mycelium for the first time． The further study on the isolation and structure identification of chemical constit-
uents from the RGT-S4 can provide references for the pharmacodynamics research.
Key words Rumex gmelini Turcz，Endophytic Fungi，Chemistry constituents，Extraction and separation，Structure identification，Corre-
lation
153