全 文 ：焦立响，黄相中，李文娟，等． 波叶青牛胆中巴马汀与药根碱的匀浆提取工艺［J］． 江苏农业科学，2012，40( 7) : 255 － 257．
波叶青牛胆中巴马汀与药根碱的匀浆提取工艺
焦立响，黄相中，李文娟，关小丽，叶艳青，郭俊明
( 云南民族大学民族药资源化学国家民委 －教育部重点实验室，云南昆明 650500)
摘要: 在单因素的基础上，以药根碱、巴马汀的含量为评价指标，采用正交试验优选法，以甲醇体积分数、匀浆时
间、液料比为考察因素对波叶青牛胆( Tinospora crispa) 中巴马汀与药根碱提取工艺进行优化。结果表明，最佳提取条
件为甲醇体积分数 90%、匀浆时间 2． 5 min、液料比 1 g ∶ 10 mL。该提取工艺简单、稳定性好，为青牛胆的提取提供科
学的工艺参数。
关键词: 波叶青牛胆; HPLC; 匀浆提取; 巴马汀; 药根碱
中图分类号: R284． 2 文献标志码: A 文章编号: 1002 － 1302( 2012) 07 － 0255 － 03
收稿日期: 2011 － 11 － 30
基金项目: 国家自然科学基金 ( 编号: 51062018 ) ; 教育部科学技术研
究重点项目基金( 编号: 209116 ) ; 云南民族大学开放基金 ( 编号:
MJY090213) ．
作者简介:焦立响( 1984—) ，男，山西大同人，硕士研究生，从事药物
分析研究。E － mail: jlxiang0403@ 126． com。
通信作者: 郭俊明，教授。Tel: ( 0871 ) 5910014。E － mail: guojun _
ming@ 126． com。
波叶青牛胆 ( Tinospora crispa) 系防己科青牛胆属植物。
青牛胆属植物有止痛、利咽、清热解毒之功效，临床用于治疗
扁桃体炎、急性咽喉炎等［1 － 3］。目前对巴马汀、药根碱有效成
分的 HPLC测定已有报道［4 － 5］，但样品的提取一般采用乙醇
回流、水回流、乙醚回流等［6 － 8］。匀浆提取是指样品通过加入
溶剂进行磨浆，以提取其中有效成分的一种提取方法，具有低
温、低耗、快速、提取率高的特点，与超声提取相比该方法噪声
污染小，与回流提取相比节省了溶剂用量［9］。在样品的前处
理方面得到了广泛的应用［10 － 11］。本试验采用匀浆法提取，以
药根碱、巴马汀含量为评价指标，在单因素试验基础上对匀浆
提取过程中的 3 因素采用正交试验［12 － 13］进行优化，旨在为提
取青牛胆提供科学依据。
1 材料与方法
1． 1 材料
新型 T25 匀浆机( 德国 IAK) ; 电子分析天平 ( 北京赛多
利斯天平有限公司) ; Agilent1200 高效液相色谱仪( 包括四元
泵，自动进样器，二极管阵列检测器 DAD，柱温箱，Chemstation
色谱工作站 ) ; 色谱柱 Agilent Eclipse XDB － C18 ( 4． 6 ×
150 mm，5 μm) 。
波叶青牛胆( 云南丽江产，经云南大学生物系马绍宾鉴
定为 Tinospora crispa，粉碎，过筛) ; 巴马汀与药根碱对照品
( 自制，经熔点、1HNMR、13CNMR证实、人工解谱及文献对照
鉴定，经高效液相色谱分析纯度均大于 99% ) ; 乙腈 ( 色谱
纯) ;磷酸( 分析纯) ;甲醇( 分析纯) ;超纯水。
1． 2 方法
1． 2． 1 药根碱、巴马汀含量的测定
1． 2． 1． 1 色谱条件 色谱柱为 Agilent Eclipse XDB － C18
( 4． 6 × 150 mm，5 μm ) ，流速为 1． 0 mL /min，检测波长
270 nm，柱温箱温度为 35 ℃，进样体积 10． 0 μL，流动相见表
1。色谱图见图 1、图 2。
表 1 流动相梯度
时间
( min)
体积比
A: 0． 1%H3PO4 溶液 B:乙腈
0 90 10
10 85 15
15 75 25
20 65 35
21 0 100
25 0 100
—552—江苏农业科学 2012 年第 40 卷第 7 期
DOI:10.15889/j.issn.1002-1302.2012.07.047
1． 2． 1． 2 对照品的制备及线性关系考察 精确称取药根碱
对照品 10 mg，巴马汀对照品 10 mg，置于 10 mL容量瓶中，加
甲醇溶解并定容，制得标准品储备液。准确吸取储备液用甲
醇稀释至不同浓度，按上述色谱条件进行 HPLC 分析。分别
以药根碱浓度与其对应的峰面积、巴马汀的浓度与其对应的
峰面积进行线性回归，所得回归方程及相关系数见表 2。
表 2 标准溶液浓度、线性回归方程及相关系数
化合物 标准溶液浓度( μg /mL) 线性回归方程 相关系数
保留时间
( min)
药根碱 6、9、11、14、22 A = 27 490． 24C + 14． 535 0． 997 8 17． 4
巴马汀 50、100、125、200、333 A = 3 311． 790C + 21． 952 0． 999 2 19． 1
1． 2． 1． 3 供试品溶液的测定 精确称取 1． 000 g 波叶青牛
胆，匀浆提取，提取液稀释至适宜的检测浓度后用 0． 45 μm
滤膜过滤，按上述色谱条件进行 HPLC 分析。将峰面积代入
线性回归方程，计算提取液中 2 种化合物的含量。
1． 2． 1． 4 精密度考察 取同一药根碱、巴马汀对照品溶液，
按照上述色谱条件进行分析，连续进样 6 次，其峰面积的 RSD
值分别为 0． 84、0． 75。
1． 2． 1． 5 稳定性试验 以表 4 中 3 号试验的样品为供试品，
分别放置 0、2、4、6、8、12、24 h，按照上述色谱条件进行分析，
药根碱、巴马汀峰面积的 RSD 值分别为 0． 80、0． 37。结果表
明，供试品在 24 h内稳定。
1． 2． 1． 6 重现性试验 按照“1． 2． 1． 3”制备 6 份供试品，按
照上述色谱条件进行分析，药根碱、巴马汀峰面积的 RSD 值
分别为 0． 43、0． 29。结果表明，重现性良好。
1． 2． 2 匀浆提取工艺的优化 精确称取 1． 000 g 波叶青牛
胆，匀浆提取，比较不同提取条件下药根碱、巴马汀的含量，并
以 2 种化合物的含量较高时对应的条件为中心值。依次进行
甲醇体积分数、转速、料液比、提取时间 4 个单因素试验。
1． 2． 2． 1 甲醇体积分数对提取效果的影响 在室温下以不
同的甲醇体积分数作为提取液，料液比为 1 g ∶ 100 mL，匀浆
2 min，提取效果见图 3。巴马汀与药根碱的含量随着甲醇体
积分数的增加，呈现先增后减的趋势，当甲醇体积分数在
50%与 80%时，巴马汀与药根碱的含量均达到最大值。为了
进一步分析料液比对巴马汀、药根碱提取的影响，选取甲醇体
积分数在 10% ～90%之间进行正交优化设计。
1． 2． 2． 2 料液比对提取效果的影响 在室温下以 80%的甲
醇作为提取液，选取不同的料液比，转速为 3 000 r / min，匀浆
2 min，提取效果见图 4。随着溶剂用量的增加，巴马汀与药根碱
的含量呈增加趋势，但当料液比增加到1 g ∶ 50 mL后，巴马汀、药
根碱的提取量达到最大值。为了进一步分析料液比对巴
马汀、药根碱提取的影响，选取料液比在1 g ∶ 10 mL ～1 g ∶ 50 mL
之间进行正交优化设计。
1． 2． 2． 3 匀浆机转速对提取效果的影响 在室温下以 80%
的甲醇作为提取液，料液比为 1 g ∶ 50 mL，选取不同的转速，
匀浆 2 min，提取效果见图 5。匀浆机的转速对提取的影响不
显著，不再对转速进行考察。为减少匀浆机的磨损，选择转速
为 3 000 r / min。
1． 2． 2． 4 提取时间对提取效果的影响 在室温下以 80%的
甲醇作为提取液，料液比为 1 g ∶ 50 mL，转速为 3 000 r /min，
—652— 江苏农业科学 2012 年第 40 卷第 7 期
选取不同的提取时间，其提取效果见图 6。随着提取时间的
增加提取量呈增加趋势，当提取时间在 1． 5 min 时，巴马汀、
药根碱的提取量达到最大值。为了进一步分析提取时间对 2
种化合物提取的影响，选取提取时间在 0． 5 ～ 2． 5 min 之间进
行正交优化设计。
1． 2． 2． 5 正交试验设计 精确称取 1． 000 g 波叶青牛胆，匀
浆提取。根据单因素试验，以甲醇体积分数、匀浆时间、料液
比为考察因素，以提取液中药根碱与巴马汀的含量为指标，按
正交设计 L9 ( 3
3 ) 安排试验，结果见表 3 至表 6。
表 3 正交试验因素水平
水平
因素
A:料液比
( g ∶ mL)
B:提取时间
( min)
C:甲醇体积分数
( % )
1 1 ∶ 10 0． 5 10
2 1 ∶ 30 1． 5 50
3 1 ∶ 50 2． 5 90
表 4 正交试验结果与极差分析
序号
因素水平
A:料液比 B:提取时间
C:甲醇
体积分数
药根碱
( mg /g)
巴马汀
( mg /g)
1 1 1 1 0． 46 6． 73
2 1 2 2 0． 83 10． 89
3 1 3 3 1． 11 14． 38
4 2 1 2 0． 82 10． 57
5 2 2 3 0． 91 11． 67
6 2 3 1 0． 52 7． 07
7 3 1 3 0． 91 11． 66
8 3 2 1 0． 57 7． 69
9 3 3 2 0． 82 10． 51
k1 ( 药根碱) 0． 80 0． 73 0． 52
k2 ( 药根碱) 0． 75 0． 77 0． 82
k3 ( 药根碱) 0． 77 0． 82 0． 98
极差 R( 药根碱) 0． 05 0． 09 0． 46
k1 ( 巴马汀) 10． 667 9． 653 7． 163
k2 ( 巴马汀) 9． 770 10． 083 10． 657
k3 ( 巴马汀) 9． 953 10． 653 12． 570
极差 R( 巴马汀) 0． 897 1． 000 5． 407
表 5 巴马汀含量方差分析表
误差来源 偏差平方和 自由度 f F值 F0． 05临界值 P值
A 1． 346 2 1． 000 19． 000 ＞ 0． 05
B 1． 510 2 1． 122 19． 000 ＞ 0． 05
C 45． 096 2 33． 504 19． 000 ＜ 0． 05
误差 1． 35 2
表 6 药根碱含量方差分析表
误差来源 偏差平方和 自由度 f F值 F临界值 P
A 0． 004 2 1． 000 19． 000 ＞ 0． 05
B 0． 011 2 2． 750 19． 000 ＞ 0． 05
C 0． 328 2 82． 000 19． 000 ＜ 0． 05
误差 0． 00
注: F0． 05 ( 2，2) = 19． 00; F0． 01 ( 2，2) = 99． 00。
2 结果与分析
以药根碱、巴马汀含量为考察指标，极差大小显示各因素
作用大小为 C ＞ B ＞ A。经方差分析，3 因素中甲醇体积分数
对提取液中的药根碱、巴马汀含量有显著性影响，其他因素均
无显著性。综合考虑各种因素，优选波叶青牛胆的提取工艺
为 A1B3C3，即液料比 1 g ∶ 10 mL，提取时间为 2． 5 min，甲醇
体积分数为 90%。按优化工艺 A1B3C3 进行重复性试验，同时
作为对照，重复 A1B2C3 和 A2B3C3，测药根碱、巴马汀的含量，
结果显示最佳提取工艺 A1B3C3 ＞ A2B3C3 ＞ A1B2C3 ( 表 7) 。
表 7 验证试验
样品
药根碱含量( mg /g) 巴马汀含量( mg /g)
A1B3C3 A2B3C3 A1B2C3 A1B3C3 A2B3C3 A1B2C3
1 1． 09 0． 76 0． 64 14． 2 9． 71 8． 17
2 1． 15 0． 76 0． 65 14． 4 9． 66 8． 32
3 1． 12 0． 77 0． 64 14． 4 9． 72 8． 22
平均值 1． 12 0． 76 0． 64 14． 3 9． 70 8． 24
RSD( % ) 1． 03 0． 80 0． 87 2． 68 0． 33 0． 93
3 结论
本试验在单因素试验的基础上通过正交试验对波叶青牛胆
中巴马汀与药根碱的匀浆提取工艺条件进行了优化。结果证
明，优选青牛胆的提取工艺为 A1B3C3，即液料比 1 g ∶ 10 mL，
提取时间为 2． 5 min，甲醇体积分数为 90%。该工艺简单、稳
定性好，为青牛胆的提取提供科学的工艺参数。匀浆提取法
一般应用于活体样品的提取，在中药或民族药的提取方面报
道较少，为了提高对中药或民族药中有效成分的提取，本试验
用匀浆提取法对波叶青牛胆进行了提取，得到了令人满意的
效果。证明匀浆法可以在中药提取中推广应用。
参考文献:
［1］程春梅，戴 云，黄相中，等． 云南青牛胆块根的化学成分研究
［J］． 中草药，2010，41( 5) : 689 － 692．
［2］黄相中，程春梅，尹 燕，等． 云南青牛胆块根的化学成分研究
( Ⅱ) ［J］． 中药材，2010，33( 10) : 1574 － 1576．
［3］朱红梅． 金果榄的研究进展［J］． 中国民族民间医药杂志，2001
( 2) : 75 － 76．
［4］徐焱琛，杨光义，陈吉炎． 薄层扫描法测定金果榄药材中盐酸药
根碱的含量［J］． 时珍国医国药，2007，18( 6) : 1412 － 1413．
［5］杨 宏，王天志，杜蕾蕾，等． RP － HPLC 测定金果榄药材中巴马
汀和药根碱的含量［J］． 华西药学杂志，2004，19( 3) : 195 － 196．
［6］陈 黎，叶立红，朱海涛，等． 正交设计法优选金果榄提取工艺
［J］． 中国医院药学杂志，2008，28( 23) : 2004 － 2006．
［7］涂自良，杨光义，陈吉炎，等． 金果榄水提液与醇提液指标成分相
关性考察［J］． 医药导报，2007，26( 11) : 1359．
［8］冷 静，付晓泰，傅超美，等． HPLC 测定金果榄中的青牛胆苦素
［J］． 华西药学杂志，2008，23( 5) : 600 － 601．
［9］薛景娇，和顺琴，杨光宇，等． 匀浆法提取 －高效液相色谱法测定
金银花中的绿原酸［J］． 云南民族大学学报: 自然科学版，2011，
20( 2) : 86 － 88．
［10］杨 磊，刘婷婷，卫 蔚，等． 响应面法优选新疆紫草总萘醌的
匀浆提取工艺研究［J］． 中草药，2010，41( 4) : 568 － 573．
［11］崔柱文，陈章玉，贺 宾，等． 匀浆法提取 －高效液相色谱法测
定烟草料液中苯甲酸·山梨酸［J］． 安徽农业科学，2010，38
( 11) : 5598 － 5599．
［12］金艳梅，朱国军． 正交试验法研究蒲公英中总生物碱提取工艺
［J］． 江苏农业科学，2009( 3) : 329 － 330．
［13］苏秀芳． 正交试验法优选人面子叶挥发油提取工艺［J］． 江苏
农业科学，2011( 1) : 327 － 328．
—752—焦立响等:波叶青牛胆中巴马汀与药根碱的匀浆提取工艺