全 文 ：毛脉酸模内生真菌 ＲGT － S4 生长曲线及
菌丝体化学成分初步研究
王星星1，2，王振月1* ，王博1，3，卫丽曼1，郑成琳1
(1．黑龙江中医药大学药学院，黑龙江 哈尔滨 150040;
2．江苏康缘药业股份有限公司现代中药研究院妇科新药研究所，江苏 连云港 222001;
3．黑龙江珍宝岛药业药物研究院，黑龙江 哈尔滨 150000)
摘 要:目的:研究毛脉酸模( Ｒumex gmelini Turcz． ) 内生真菌 ＲGT － S4 的生长曲线及菌丝体中的化学
成分。方法:运用液体培养法对毛脉酸模内生真菌 ＲGT － S4 的生长曲线进行研究，同时运用溶剂萃取、
硅胶柱色谱、ODS反相柱色谱、Sephadex LH － 20 柱色谱、制备液相等方法对其醇提物正丁醇部位进行
分离纯化，根据理化性质、NMＲ数据鉴定化合物的结构。结果:最佳生长天数为 7 天;同时分离到 3 个
化合物，其结构鉴定为:甘露醇( Ⅰ) 、D －果糖( Ⅱ) 、L － 2 － O －甲基 －手 －肌醇( Ⅲ) 。结论:对其生长
天数进行研究，以优化其培养条件，同时以上化学成分均为首次从毛脉酸模内生真菌 ＲGT － S4 菌丝体
中分离得到。
关键词:毛脉酸模;内生真菌;曲霉属; 生长曲线; 化学成分
中图分类号:Ｒ284． 2 文献标识码:A 文章编号:1002 － 2392(2013)05 － 0017 － 03
收稿日期:2013 － 04 － 14 修回日期:2013 － 05 － 26
基金项目:国家自然科学基金项目(No． 30970300) ;哈尔滨市科技创新
人才 研 究 专 项 资 金 项 目 (优 秀 学 科 带 头 人) (No．
2010ＲFXXS031)
作者简介:王星星(1984 －) ，女，硕士，从事中药新药研究与开发。
* 通讯作者:王振月(1956 －) ，男，教授，博士研究生导师。主要研究方
向:中药资源开发与生物技术。
植物内生真菌作为一种新的微生物资源引起了人
们广泛的关注，近年来对内生真菌的研究越来越多，因
此内生真菌的作用日益凸显。由于长期生长于植物内
部，往往能产生许多具有与共生植物相似的或不同的
活性代谢产物，具有抗肿瘤［1］、抗菌［2］、抗病毒［3］、抗
逆［4］、促进植物生长［5］、降血糖［6］、抗氧化［6］等作用。
从药用植物中提取活性物质一直是人们获得药物的主
要途径，但是植物生长周期长以及资源的不合理利用，
使得药物资源的供求矛盾日渐突出。内生真菌活性物
质的作用，为药用植物资源的利用开辟了一条新的途
径，同时为天然产物资源的开发利用提供了新的方向。
毛脉酸模(Ｒumex gmelini Turcz．)为蓼科酸模属植
物。民间以根入药，具有抗真菌、抗肿瘤、抗病毒和抗
氧化作用［7 － 8］。本课题组从多角度对毛脉酸膜极其内
生真菌进行了深入的研究，证明其具有一定的抗肿瘤
作用。本文对毛脉酸模根中的内生真菌 ＲGT － S4
(Aspergillus)的生长曲线进行研究，以确定其最佳生
长天数，对菌丝体中化学成分进行分离与鉴定，以期从
内生真菌中找到活性成分，扩大药源，并为毛脉酸模及
其内生真菌进一步的开发利用提供理论依据。
1 实验材料、仪器及试剂
1． 1 实验材料
毛脉酸模内生真菌 ＲGT － S4 为曲霉属，所用菌株
为本课题组从一年生毛脉酸模中分离得到;柱层析硅
胶(青岛海洋化工厂，80 ～ 100，200 ～ 300 目) ;反相填
料 YMC GEL ODS － A 型;葡聚糖凝胶 GE Sephadex
LH －20，薄层色谱用硅胶板(HPTLC Silica gel 60 F254)
为德国 Merck 公司产品;化学试剂为分析纯(天津市
富宇精细化工股份有限公司)。
1． 2 培养基的配置
马铃薯葡萄糖(PDA，1L) :马铃薯 200g(马铃薯削
皮切成小丁，煮沸，20min 后过滤，取滤液) ，葡萄糖
20g，pH值自然，蒸馏水定容至 1 000mL，121℃湿热灭
菌 20min。
1． 3 实验仪器
pH －71 电热恒温培养箱(天津泰斯特仪器有限
公司) ;二级 B2 型生物安全柜(北京东联哈尔仪器制
造有限公司) ;DNG － 9140A 电热恒温鼓风干燥箱(上
海一恒科技有限公司) ;DK － S24 型电热恒温水浴锅
(上海森信实验仪器有限公司) ;恒温振荡器(北京东
·71·
2013 年第 41 卷第 5 期
Vol. 41，No. 5，2013
中 医 药 学 报
Acta Chinese Medicine and Pharmacology

联哈尔仪器制造有限公司) ;电热手提式压力蒸汽消
毒(哈尔滨市松花江医疗器械厂) ;KQ － 500E 型医用
超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司) ;Mettler 电
子天平 AE240;INOVA － 600 型超导核磁共振光谱仪
(美国 Varian 公司) ;Waters D600 － 2489 型制备液相
色谱仪;Hypersil － ODSⅡ制备型色谱柱(10μm，
300mm ×20mm，大连依利特公司)。
2 毛脉酸模内生真菌的生长曲线研究
2． 1 实验方法
2． 1． 1 种子液的配制
将固体平板菌种常温放置 24h 进行活化，然后将
活化的菌种用接种针接于 350mLPDA 液体培养基中，
28℃振荡速度为 130r /min，培养 3 天，配制成种子液。
2． 1． 2 内生真菌 ＲGT － S4 的培养
将种子悬浮液接种于 350mLPDA 培养基中，按上
述条件培养，每天取出 3 瓶将菌丝和菌液分离，用蒸馏
水洗净菌丝上的母液后放在蒸发皿中放入 60℃烘箱
中烘干后称重，分别记录 10 天菌丝体的干重。
2． 2 数据处理方法
试验数据统计分析用 excel2007 版软件。
2． 3 毛脉酸模内生真菌 ＲGT － S4 的生长曲线结果与
分析(见表 1，图 1)
表 1 ＲGT － S4 菌丝平均干重表
dry weight of mycelium(g)
growth days(d)
X1 X2 X3 珚X4
1 0． 78 0． 56 0． 79 0． 71
2 0． 96 1． 19 1． 20 1． 12
3 1． 26 1． 16 1． 13 1． 19
4 1． 38 1． 26 1． 40 1． 34
5 1． 51 1． 46 1． 43 1． 47
6 1． 65 1． 75 1． 89 1． 76
7 2． 42 1． 97 1． 95 2． 11
8 1． 90 1． 90 2． 00 1． 93
9 1． 98 1． 59 1． 99 1． 85
10 2． 23 1． 40 2． 16 1． 93
由图 1 可知，考虑到节省资源与时间，毛脉酸模内
生真菌 ＲGT － S4 的最佳生长天数确定为 7 天。
3 毛脉酸模内生真菌 ＲGT － S4 菌丝体正丁醇部位化
学成分的研究
3． 1 发酵与提取分离
将固体平板菌种常温放置 24h 进行活化，然后将
活化的菌种用接种针接于 350mLPDA 液体培养基中，
28℃振荡速度为 130r /min，培养 7 天，取出将菌丝和菌
图 1 毛脉酸模内生真菌 ＲGT － S4 的生长曲线
液分离，用蒸馏水洗净菌丝上的母液后放在蒸发皿中
放入 60℃烘箱中烘干备用。
毛脉酸模内生真菌 ＲGT － S4 干燥菌丝体共 1kg，
装入圆底烧瓶内，用 8 倍量 70%工业乙醇回流提取 3
次，分别为 3h、2h、1h合并回流液，减压浓缩，回收乙醇
得到粗品 300g。取上述 300g 粗品，加适量水溶解，分
别用石油醚、乙酸乙酯、水饱和正丁醇萃取至无色，减
压回收上述萃取液，得到石油醚萃取部分 18g，乙酸乙
酯萃取部分 20g，水饱和正丁醇萃取部分 100g，取水饱
和正丁醇部分，经硅胶柱色谱，用二氯甲烷 －甲醇洗
脱，收集各组分，再经 ODS 柱色谱、葡聚糖凝胶柱色谱
法，制备液相等手段分离出 3 个化合物:甘露醇(Ⅰ)、
D －果糖(Ⅱ)、L － 2 － O －甲基 －手 －肌醇(Ⅲ)。
3． 2 结构鉴定
化合物Ⅰ:白色粉末，易溶于水，mp 166 ～ 168℃，
1H － NMＲ(500MHz，D2O)δ3． 30 ～ 3． 90 给出多元醇的
质子信号，13C － NMＲ给出两组 CH与一组 CH2碳信号
δ73． 7，δ72． 1 和 δ66． 0。由此推测化合物Ⅰ为多元醇
类化合物，且呈对称性。根据1 H － NMＲ 与13 C － NMＲ
数据得知化学式为 C6H14 O6，与甘露醇已知文献
［9］对
照，数据基本一致，可以确定该化合物为甘露醇(Man-
nitol)。具体的 NMＲ 数据归属为:1 H － NMＲδ(3． 76
(2H，m) ，3． 80(3H，，m) ，3． 87(2H，，m) ，3． 68(1H，
m) ，3． 67(2H，m) ，3． 60(3H，m) ，3． 74(2H，m) ，3． 55
(1H，m) ，13C － NMＲδ73． 7(C － 1) ，72． 1(C － 2) ，66． 0
(C － 3) ，66． 0(C － 4) ，73． 6(C － 5) ，72． 0(C － 6) ，
65. 9(C －7) ，65． 9(C －8)。
化合物Ⅱ:为白色粉末，易溶于水，mp100 ～
102℃。13C － NMＲ(500MHz，in CD3OD)中可以看到 12
个碳信号，出现在 δ105 ～ 60 之间，其中 δ103． 2 和
δ99． 2 为糖的端基碳信号，提示化合物为两个六碳糖。
·81·
中 医 药 学 报
Acta Chinese Medicine and Pharmacology
2013 年第 41 卷第 5 期
Vol. 41，No. 5，2013

根据 C 信号的化学位移 δ 值确定两个糖分别为 α、β
两种构型的 D －果糖，1 H － NMＲ 数据与 D －果糖［10］
一致，所以确定化合物Ⅱ为 D －果糖(D － Fructose)。
具体的 NMＲ 数据归属为:13 C － NMＲα －构型:δ64． 5，
103． 1，83． 2，76． 8，77. 5，64． 2，65． 5，104． 3，83． 5，
77. 3，78． 2，65． 2;β － 构型:65． 9，99． 2，69． 4，71. 2，
71. 8，65. 1，66． 7，100． 9，70． 4，72． 5，72． 0，66． 2。
化合物Ⅲ:白色粉末，mp184 ～ 186℃。1 H － NMＲ
(500MHz，D2O) ，δ:4． 15(1H，m)、3． 94(1H，m)、3． 63
(1H，m)、3． 51(1H，m)、3． 47(1H，m)、3． 28(1H，m)为
6 个连氧碳上氢质子信号，说明其为一多元醇类化合
物，δ3． 45(3H，s)为甲氧基质子信号。13 C － NMＲ(D2
O)中显示 6 个含氧取代碳信号分别是 δ80． 0(C － 2)、
72． 8(C － 4)、71． 8(C － 3)、71． 1(C － 6)、70． 3(C －
5)、67． 0(C － 1) ，1 个甲氧基碳信号 δ56． 8，由此可知
其为环己六醇(肌醇)类化合物。将以上数据与已知
文献［11］对照，确定该化合物为 L － 2 － O －甲基 －手 －
肌醇(L － 2 － O － methyl － chiro － inositol)。
4 讨论
本实验以毛脉酸模曲霉属内生真菌 ＲGT － S4 的
菌丝体为研究对象，对其生长曲线进行了研究，确定了
最佳培养天数，并分离鉴定了 3 个化合物，均为首次在
该内生真菌中分离得到。甘露醇是良好的利尿剂，果
糖是食品中重要的甜味剂，肌醇参与体内的新陈代谢
活动，具有免疫、预防和治疗某些疾病等多种作用。此
三种化合物至今未在毛脉酸模植物组织中分离得到，
说明内生真菌与植物体存在共生关系的同时，还能产
生与宿主不同的化学成分，这为从内生真菌中发现新
的生物活性成分提供了科学依据。
参考文献:
［1］ 李海燕，刘丽．产生物活性物质植物内生菌的研究进展［J］．天然
产物研究与开发，2004，16(5) :482 － 485．
［2］ Fisher PJ，Anson AE，petrini O． Fungal endophytes in Ulex europaeus
and U． gallic［J］． Trans Brit Mycol Soc，1986，86:153．
［3］ ClayK，CheplickGP，MarksS． 1989． Impactof the fungusBalansin hen-
ningsisnn on the grass Panicum agrostoides:frequency of infection，
plant growth and reproduction and resistance to pests［J］． Oecologia，
80(3) :374 － 380．
［4］ 谢凤行，任安之，葛崇葳，等． 渗透胁迫下感染内生真菌的高羊茅
(Festuca arundinaceaSchreb．)种群与非感染种群若干生理指标的
比较研究［J］．南开大学学报(自然科学版) ，2007，40(4) :7 － 12．
［5］ 赵旭，常思静，景春娥，等．我国植物内生菌研究进展［J］．中国沙
漠，2010，30(1) :87 － 91．
［6］ Strobel GA，Ford EJ，Worapong JK，et al． Ispoestacin，an isobenzo-
furanone from Pestalotiopsis microspora，possessing antifungal and an-
tioxidant activities［J］． Phytochemistry，2002，60:179 － 183．
［7］ 谢彦梅，许岩，常丰华，等． 毛脉酸模无菌苗的制备及下胚轴愈伤
组织诱导的研究［J］．中医药信息，2012，29(2) :98 － 100．
［8］ 门敬菊，姚文，王振月．大豆多肽对毛脉酸模根中蒽醌类和酸模素
生物量的影响［J］．中医药信息，2013，30(2) :6 － 10．
［9］ 堵年生，周王文，王健，等．管花肉苁蓉化学成分的研究［J］．中国
药科大学学报，1993，24(1) :46 － 48．
［10］ 余振喜．萝卜秦艽化学成分及质量控制研究［D］．北京:北京中医
药大学，2006:10 － 30．
［11］ 郭明娟，江洪波，田祥琴，等．胡颓子叶的化学成分［J］．华西药学
杂志，2008，23(4) :381 － 383．
Growth Curve and Chemical Constituents of
ＲGT － S4 Mycelium from Ｒumex Gmelini Turcz
WANG Xing － xing1，2，WANG Zhen － yue，WANG Bo1，3，WEI Li － man1，ZHENG Cheng － lin1
(1． College of Pharmacy，Heilongjiang University of Chinese Medicine，Harbin 150040，China;
2． Institute of Gynecological New Drugs，Modren Institute of Chinese Medicine，Jiangsu
Kanion Pharmaceutical Co． Ltd．，Lianyungang 222001，China;3． Zhen Baodao Institute
of Pharmaceutical Ｒesearch，Harbin 150000，China)
Abstract:Objective:To study the growth curve and chemical constituents of ＲGT － S4 mycelium from Ｒumex gmelini
Turcz． ． Method:We studied growth curve by using liquid cultivation，and ethanol extracts by using n － BuOH extraction，
solvent extraction，silica gel column chromatography，ODS column chromatography，Sephadex LH －20 and other sepa-
ration means． The structures were identified according to physical and chemical properties and date of NMＲ． Ｒesults:The
best growth days were seven days，and three compounds were identified as Mannitol(Ⅰ) ，D － fructose(Ⅱ) ，L － 2 － O
－ methyl － chiro － inositol(Ⅲ)． Conclusion:Growth days are studied in order to optimizate the culture conditions，and
the above compounds are identified from ＲGT － S4 mycelium of Ｒumex gmelini Turcz． for the frist time．
Key words:Ｒumex gmelini Turcz．;Endophytic;Fungi Aspergillus;Growth curve;Chemical constituents
·91·
2013 年第 41 卷第 5 期
Vol. 41，No. 5，2013
中 医 药 学 报
Acta Chinese Medicine and Pharmacology
