全 文 ：华西药学杂志W CJ· PS 2009, 24(5)：506 ～ 507
作者简介:李庆 ,江西新余 ,正攻读生药学专业的硕士学位。
＊通讯作者(Correspondentauthor), Email:suwang571@126.com
藏边大黄中鞣质的分离纯化工艺
李 庆 ,王 曙＊
(四川大学华西药学院 , 四川 成都 610041)
摘要:目的 用 D141大孔吸附树脂对藏边大黄鞣质进行分离纯化。方法 以洗脱参数为主要考察指标 , 采用 UV法测定鞣
质的含量。结果 原药材经水渗漉 , 鞣质得率为 93.61%, 渗漉液用量为药材的 15倍量;D141大孔树脂的静态吸附鞣质量为
27.5 mg·g-1;适宜洗脱流速为 2 BV·h-1;样品上样开始有鞣质渗漏时 ,大孔树脂吸附量为 14.4 mg·g-1;鞣质主要有效部位为
10%和 30%浓度乙醇洗脱液 , 洗脱液用量为柱体积的 3倍量 ,总洗脱率为 90.07%;单独使用 30%乙醇洗脱 , 干燥后固体物中
鞣质的含量为 35.5%。结论 D141大孔树脂可将藏边大黄鞣质进行有效分离纯化富集。
关键词:藏边大黄;鞣质;紫外分光光度法;D141型大孔吸附树脂
中图分类号:R282 文献标识码:A 文章编号:1006-0103(2009)05-0506-02
StudyonthepurificationoftannininRheumemodiWall
LIQing, WANGShu＊
(WestChinaSchoolofPharmacy, SichuanUniversity, Chengdu, Sichuan, 610041P.R.China)
Abstract:OBJECTIVE TostudyextractionandpurificationoftannininRheumemodiWallusingD141Macroporousresin.METH-
ODS Consideringelutionparametertobeamainguideline, UVmathodwasusedtodetectthecontentoftannininRheumemodiWal.
RESULTS TheseepfilteringratesoftannininPlainmedicinalplantwere93.61%, andtheamountsofseepfilteringsolutionwas15
timesthanthatofplainmedicinalplant.Thestaticadsorptionamountoftanninwas27.5 mg·g-1;theflowratewas2 BV·h-1;adsorp-
tionamountoftanninwas14.1 mg·g-1 inleakagepoint;themaineffectivesectionoftanninwaselutedby10%and30% ethanol.Elu-
entvolumewasthreetimesofthecolumnvolumeandtotalelutionratewas90.07%.Thecontentoftenniawas35.5% using30%ehta-
nolaselution.CONCLUSION D141 macroporousresincanbeusedtopurifythetannininRheumemodiWal.
Keywords:RheumemodiWall;Tannin;UV;D141 Macroporousresin
CLCnumber:R282 Documentcode:A ArticleID:1006-0103(2009)05-0506-02
藏边大黄 RheumemodiWal.系蓼科大黄属波
叶组植物的根与根茎 。研究表明 ,蓼科植物藏边大
黄中含有较多的鞣质 ,有多种药理功效 ,能改善肾功
能 、抗病毒 、抗凝血 ,能治疗精神病 、治疗胃出血等疾
病 [ 1] 。目前未见有对藏边大黄中鞣质进行分离纯
化的工艺研究。因此 ,现使用 D141大孔吸附树脂
对藏边大黄鞣质进行分离纯化 ,为藏边大黄鞣质工
业化生产提供科学依据。
1 实验部分
1.1 仪器与试药
TU-1810紫外可见分光光度计;D141大孔树
脂(成都晨光化工研究院)。没食子酸(中国药品生
物制品检定所);藏边大黄样品于 2008年 4月由西
藏自治区药检所提供 ,经本课题组鉴定为 Rheum
emodiWal.
1.2 溶液的制备
精密称取 42.44mg没食子酸对照品 ,置 100 ml
棕色量瓶中 ,加水溶解并稀释至刻度 ,精密量取 5
ml,置 50ml棕色量瓶中 ,用水稀释至刻度 ,摇匀 ,即
得对照品溶液 。取适量藏边大黄药材粉末 ,平行精
密称定两份 ,置 250ml棕色量瓶中 ,加水 150 ml,放
置过夜 ,超声处理 10 min,放冷 ,用水定容 ,静置(使
固体物沉淀),过滤 ,弃去 50ml初滤液 ,精密量取 20
ml续滤液 ,置 100ml棕色量瓶中 ,用水定容 ,即得供
试品溶液 。
1.3 标准曲线的制备
精密量取对照品溶液 1、2、3、4、5 ml,分别置 25
ml棕色量瓶中 ,各加入 1 ml磷钼钨酸试液 ,再分别
加 11、10、9、8、7ml水 ,用 29%碳酸钠溶液定容。以
相应的试剂为空白 , 30 min后 ,在 760 nm测定吸光
度 ,以鞣质浓度对吸光度进行线性回归 ,得回归方程
为:Y=8.4×10-3X-2×10-4(r=0.9990)。
1.4 总酚的测定
精密量取供试品溶液 2 ml,置 25 ml棕色量瓶
中 ,照 “ 1.3”项下方法 , 自 “加入 1 ml磷钼钨酸试
DOI :10.13375/j.cnki.wcjps.2009.05.009
液 ”起 ,加 10 ml水 ,依法测定吸光度 。从标准曲线
中计算供试品溶液中没食子酸的量(mg)。
1.5 不被吸附的多酚的测定
取 25 ml供试品溶液 ,加至已盛有 0.6g干酪素
的 100ml具塞锥形瓶中 ,密塞 ,置 30℃水浴中保温
1 h,不时振摇 , 取出 ,放冷 ,摇匀 ,过滤 ,弃初滤液 。
精密量取 2 ml续滤液 ,置 25 ml棕色量瓶中 ,照
“ 1.3”项下方法 ,自 “加入 1 ml磷钼钨酸试液 ”起 ,
加 10 ml水 ,同法测定吸光度。从标准曲线中计算
供试品溶液中没食子酸的量(mg)。藏边大黄中鞣
质的含量为 4.7%。
1.6 工艺条件与参数优化
1.6.1 原药材渗滤 称取 1 kg藏边大黄 ,置渗滤
筒中 ,用 20倍量水渗滤 ,先后分段接收渗滤液体积
约 10、5、5 L。表明渗滤液用量为药材 15倍量的含
测结果为 8.58 mg·ml-1 ,渗滤率为 93.61%。合并
10倍和 5倍量渗滤液 ,备用。
1.6.2 D141大孔吸附树脂的预处理 大孔吸附树
脂用 95%乙醇浸泡 24 h,装柱后用 95%乙醇洗至流
出液与水混合不混浊 ,再继续洗至流出液无异味 ,改
用大量水洗至无醇味 ,备用 。
1.6.3 大孔吸附树脂对鞣质静态吸附量的测定
量取已处理好的 D141大孔吸附树脂 5 ml(0.7 g·
ml-1),置 200 ml锥形瓶中 ,精密加入 100 ml混合
液 ,每隔 5min振摇 10 s, 持续 2 h,静置 24 h,使其
达到饱和吸附后过滤 。测定滤液中鞣质的浓度 。吸
附量 =[ (吸附液初始浓度 -吸附平衡后浓度)×
吸附液体积 ] /树脂质量 。结果 ,大孔树脂的吸附量
为 27.5 mg·g-1。
1.6.4 上样最佳流速的考察和渗漏时树脂吸附量
的测定 取 3个型号大小相同的柱子。分别量取 3
份大孔树脂 ,每份 10 ml,湿法装柱。将混合液上样 ,
分别设流速为 1、2、3 BV·h-1 ,按每 5ml流出液等份
收集 ,用明胶溶液作为指示剂检测流出液。发现 1
BV·h-1流速时 ,第 5个收集液段有渗漏;2 BV·h-1
流速时 ,第 4个收集液段有渗漏;3 BV·h-1流速时 ,
第 2个收集液段有渗漏 。从吸附量和流速及上样时
间综合分析 ,初步判断流速为 2 BV·h-1时吸附效率
较为合理 。对柱 2在上样渗漏时大孔树脂的吸附量
进行计算 ,结果 10 ml树脂吸附上样液 15 ml,已知
上样液鞣质的浓度为 6.7 mg·g-1 ,计算得树脂吸附
量为 14.4 mg·g-1。
1.6.5 洗脱剂浓度的选择 分别用水和 10%、
30%、50%、70%的乙醇对柱 2进行洗脱 ,各洗脱液
均为 5倍量 ,测定各洗脱液中鞣质含量 。结果表明 ,
水洗液和 70%乙醇洗脱液中检测不到鞣质 , 50%洗
脱液中鞣质含量较低。主要集中在 10%、30%乙醇
洗脱液里 ,总洗脱率达 90.07%。
1.6.6 洗脱剂的用量及干膏中鞣质的含量测定
根据上述结果 ,先用水洗脱(除去部分杂质),再选
用 30%乙醇按 5倍量洗脱 ,分别接收第 3、4、5倍量
3部分洗脱液测定含量 ,发现第 4、5倍量的洗脱液
均检测不到鞣质。表明只需用 3倍量洗脱液洗脱 ,
即可将多数鞣质洗脱下来。将前 3倍量的洗脱液蒸
干至恒重 ,计算鞣质的含量为 35.5%。
2 讨论
文中提取工艺用水作为渗滤液 ,渗滤量为药材
的 15倍;乙醇作为洗脱液 ,在低浓度下就能将大部
分树脂吸附的鞣质洗脱出来 ,适合工业化生产。
D141大孔吸附树脂可有效地将藏边大黄中的
鞣质分离纯化 , 其富集的有效部位分别为 10%、
30%的乙醇洗脱液。初步判断大生产时上样流速为
2BV·h-1 ,鞣质吸附效果较为合理;洗脱时 ,先用水
洗 ,再用 30%乙醇 2 BV·h-1直接洗脱 ,洗脱液用量
为柱体积的 3倍 , 浓缩 ,即可得到纯度较高的鞣质
浸膏 。
参考文献:
[ 1] 黄浩 ,曹启荣.大黄鞣质及相关物的研究 [ J].中草药 , 1998,
29(3):199-202.
[ 2] 中华人民共和国国家药典委员会.中国药典 [ S] .一部.北
京:化学工业出版社 , 2005,附录 57.
收稿日期:2008-11
507第 5期 李 庆 , 等。藏边大黄中鞣质的分离纯化工艺