全 文 ：书　［收稿日期］　２０１４－０３－２４；２０１４－１０－１２修回
　［基金项目］　江西省观赏植物遗传改良重点实验室开放基金项目“红花山玉兰引种栽培及快繁技术研究”（２０１２－ＫＬＢ－４）
　［作者简介］　唐军荣（１９８２－），男，讲师，硕士，从事植物组织培养及林木苗木培育研究。Ｅ－ｍａｉｌ：ｔｊｒｚｙ＠１６３．ｃｏｍ
［文章编号］１００１－３６０１（２０１４）１１－０６６５－００４２－０４
红花山玉兰组织培养外植体的选择及其消毒方法
唐军荣１，高 柱２，刘腾云２，赵晓洁１，李 伟３
（１．西南林业大学 国家林业局西南地区生物多样性保育重点实验室，云南 昆明６５０２２４；２．江西省科学院
生物资源研究所，江西 南昌３３００２９；３．云南绿大地生物科技股份有限公司，云南 昆明６５０２１７）
　　［摘　要］为筛选出红花山玉兰组织培养适宜的外植体类型及其消毒方法，为红花山玉兰的无性繁殖提
供技术支持，对灭菌时间、外植体类型和取材时间等进行研究。结果表明：茎段和顶芽的存活率分别为
４０．０％和３３．３３％，较叶片和叶柄的存活率高，且茎段和顶芽的存活率较叶片的存在显著差异，二者的死亡
率均与叶柄和叶片的存在显著差异；茎段和顶芽为适宜的外植体。茎段在６月取材优于１２月，且采用０．１％
的升汞消毒１０ｍｉｎ，其存活率为４０．０％；顶芽在６月和１２月取材均可，消毒后去除托叶能够有效地降低顶
芽的污染率，提高其存活率。最佳消毒组合：先用７５％的酒精表面喷洒预处理，再用０．１％的升汞消毒
１０ｍｉｎ，之后去除顶芽的托叶。该方法污染率和死亡率低，存活率最高，依次分别为６．６７％、７．７８％和
８５．５５％，且芽启动率高。
［关键词］红花山玉兰；外植体消毒；消毒方法；存活率
［中图分类号］Ｓ６８５．１５ ［文献标识码］Ａ
Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｄｉｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎ　Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｏｆ　Ｅｘｐｌａｎｔｓ　ｏｆ
Ｍａｇｎｏｌｉａ　ｄｅｌａｖａｙｉ　ｉｎ　Ｔｉｓｓｕｅ　Ｃｕｌｔｕｒｅ
ＴＡＮＧ　Ｊｕｎｒｏｎｇ１，ＧＡＯ　Ｚｈｕ２，ＬＩＵ　Ｔｅｎｇｙｕｎ２，ＺＨＡＯ　Ｘｉａｏｊｉｅ１，ＬＩ　Ｗｅｉ　３
（１．Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｂｉｏｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　Ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｏｎ　ｉｎ　Ｓｏｕｔｈｗｅｓｔ　Ｃｈｉｎａ，Ｓｔａｔｅ　Ｆｏｒｅｓｔｒｙ　Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ，Ｋｕｎｍｉｎｇ，
Ｙｕｎｎａｎ　６５０２２４；２．Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｐｌａｎｔ　Ｇｅｎｅｔｉｃ　ａｎｄ　Ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｊｉａｎｇｘｉ，Ｎａｎｃｈａｎｇ，
Ｊｉａｎｇｘｉ　３３００２９；３．Ｙｕｎｎａｎ　Ｇｒｅｅｎ－ｌａｎｄ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｋｕｎｍｉｎｇ，Ｙｕｎｎａｎ　６５０２１７，Ｃｈｉｎａ）
　　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎ　ｏｒｄｅｒ　ｔｏ　ｓｅｌｅｃｔ　ａｐｐｒｏｐｒｉａｔｅ　ｄｉｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄｓ　ａｎｄ　ｅｘｐｌａｎｔｓ　ｔｙｐｅ　ｏｆ　Ｍ．ｄｅｌａｖａｙｉｉｎ　ｔｉｓｓｕｅ
ｃｕｌｔｕｒｅ，ａｎｄ　ｐｒｏｖｉｄｅ　ｔｅｃｈｎｉｃａｌ　ｓｕｐｐｏｒｔ　ｆｏｒ　ｉｔｓ　ａｓｅｘｕａｌ　ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ，ｔｈｅ　ｔｉｍｅ　ｏｆ　ｅｘｐｌａｎｔｓ　ｄｉｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎ，
ｅｘｐｌａｎｔｓ　ｔｙｐｅｓ　ａｎｄ　ｓａｍｐｌｉｎｇ　ｔｉｍｅ　ｗｅｒｅ　ｓｔｕｄｉｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｔｈｅ　ｓｔｅｍ　ａｎｄ　ｔｅｒｍｉｎａｌ　ｂｕｄ　ｗｅｒｅ　ｍｕｃｈ　ｂｅｔｔｅｒ　ｔｈａｎ
ｌｅａｖｅｓ　ａｎｄ　ｐｅｔｉｏｌｅｓ　ｆｏｒ　ｄｉｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎ　ｉｎ　ｖｉｅｗ　ｏｆ　ｉｔｓ　ｌｏｗｅｒ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ｍｏｒｔａｌｉｔｙ　ａｎｄ　ｒｅｌａｔｉｖｅｌｙ　ｈｉｇｈｅｒ　ｓｕｒｖｉｖａｌ　ｒａｔｅ．
Ｔｈｅ　ｓｕｒｖｉｖａｌ　ｒａｔｅ　ｗａｓ　４０．０％ａｎｄ　３３．３３％ｒｅｌａｔｉｖｅｌｙ　ｆｏｒ　ｓｔｅｍｓ　ａｎｄ　ｔｅｒｍｉｎａｌ　ｂｕｄｓ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ　ｉｎ
ｍｏｒｔａｌｉｔｙ　ｗａｓ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｌｅａｖｅｓ　ａｎｄ　ｐｅｔｉｏｌｅｓ．Ｔｈｅ　ｓｔｅｍｓ　ｓａｍｐｌｅｄ　ｉｎ　Ｊｕｎｅ　ｗｅｒｅ　ｂｅｔｔｅｒ
ｔｈａｎ　ｉｎ　Ｄｅｃｅｍｂｅｒ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｓｕｒｖｉｖａｌ　ｒａｔｅ　ｗａｓ　４０％ｂｙ　ｉｍｍｅｒｓｉｎｇ　ｉｎ　ＨｇＣｌ２（０．１％）ｆｏｒ　１０ｍｉｎｕｔｅｓ．Ｉｔ　ｗａｓ
ｐｏｓｓｉｂｌｅ　ｔｏ　ｓａｍｐｌｅ　ｉｎ　Ｊｕｎｅ　ａｎｄ　Ｄｅｃｅｍｂｅｒ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｔｅｒｍｉｎａｌ　ｂｕｄｓ，ａｎｄ　ｉｔ　ｃａｎ　ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｌｙ　ｒｅｄｕｃｅ　ｔｈｅ　ｒａｔｅ　ｏｆ
ｃｏｎｔａｍｉｎａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｍｏｒｔａｌｉｔｙ，ａｎｄ　ｉｍｐｒｏｖｅｄ　ｓｕｒｖｉｖａｌ　ｒａｔｅ　ａｆｔｅｒ　ｄｉｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎ　ｔｏ　ｒｅｍｏｖｅ　ｓｔｉｐｕｌｅｓ．Ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍａｌ
ｄｉｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎ　ｓｃｈｅｍｅｓ　ｗａｓ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｔｅｒｍｉｎａｌ　ｂｕｄ　ｗｅｒｅ　ｓｐｒａｙｅｄ　ｗｉｔｈ　７５％ａｌｃｏｈｏｌ，ａｎｄ　ｗｅｒｅ　ｉｍｍｅｒｓｅｄ　ｉｎ
ＨｇＣｌ２（０．１％）ｆｏｒ　１０ｍｉｎｕｔｅｓ，ｆｉｎａｌｙ　ｒｅｍｏｖｅｄ　ｔｈｅ　ｔｅｒｍｉｎａｌ　ｂｕｄ　ｓｔｉｐｕｌｅｓ，ｔｈｅ　ｌｏｗｅｓｔ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ｃｏｎｔａｍｉｎａｔｉｏｎ
（６．６７％）ａｎｄ　ｍｏｒｔａｌｉｔｙ（７．７８％），ａｎｄ　ｔｈｅ　ｈｉｇｈｅｓｔ　ｓｕｒｖｉｖａｌ　ｒａｔｅ　ｗａｓ　８５．５５％，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｐｅｒｃｅｎｔ　ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ
ｗａｓ　ｈｉｇｈ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｍａｇｎｏｌｉａ　ｄｅｌａｖａｙｉ；ｅｘｐｌａｎｔｓ　ｄｉｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎ；ｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ　ｗａｙ；ｓｕｒｖｉｖａｌ　ｒａｔｅ
　　红花山玉兰（Ｍａｇｎｏｌｉａ　ｄｅｌａｖａｙｉ）为２０世纪８０
年代初新发现的木兰科木兰属山玉兰的一个变种，
仅产于云南省牟定县的化佛山。由于此花是雌雄异
熟，故在原产地的结实率较低，引种至昆明则只开花
不结果［１］。红花山玉兰花瓣呈淡红色，花期长，树形
优美，因此，其园林绿化应用价值很高，在昆明的庙
宇、植物园均有栽培。目前，云南省已将其作为乡土
树种收录于《云南省城市绿化树种名录》，并在滇中、
滇西、滇西北和滇东南等地作为行道树和观赏树应
用于城市绿化。但由于结实率低，导致其在园林绿
化应用上受到一定程度的限制。近年来，木兰科植
物的组培技术取得了较大的进步，研究较为深入，特
别是在一些重要的园林绿化树种上已经成功建立起
再生体系［２－１０］。但是，目前木兰科植物的组培快繁
仍存在组培材料消毒困难、易褐化、增殖率低及生根
困难［１１－１４］等问题。
无菌体系的建立是植物组培成功的关键。其
中，外植体种类、取材部位和消毒方法是影响无菌体
系建立的重要因素。自然条件下，植物外植体带有
较多的细菌和真菌，进行组培时需对其进行消毒灭
菌，但要求不损伤其组织材料，保持生活力，使其在
良好的培养条件下很快恢复生机，正常生长和繁
殖［１５－１６］。较适的消毒方式能够杀灭细菌，降低外植
体的伤害，有助于其快速适应生长环境，调整消毒时
　贵州农业科学　２０１４，４２（１１）：４２～４５
　Ｇｕｉｚｈｏｕ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ
间或消毒剂种类［１７－１９］，以及消毒后去除外层老化组
织［２０］等方法均能达到提高无菌率的效果。红花山
玉兰生长缓慢，新发嫩枝少、短且表皮不光滑，污染
率高且消毒后易褐化死亡，对其组培影响较大。为
此，笔者等于２０１２年以红花山玉兰的顶芽、茎段、叶
柄和叶片为外植体试材，对灭菌时间、外植体类型和
取材时间等进行研究，以期筛选出红花山玉兰组织
培养适宜的外植体类型及其消毒方法，为红花山玉
兰的无性繁殖提供技术支持。
１ 材料与方法
１．１ 供试材料
１．１．１ 外植体 以红花山玉兰同一植株的顶芽、
茎段、叶柄和叶片为外植体试材。采自西南林业大
学校园内种植的红花山玉兰。
１．１．２ 其他 ６－ＢＡ和ＩＡＡ为北京康倍斯科技有
限公司产品；ＭＳ为基本培养基，ｐＨ５．８。
１．２ 不同外植体消毒效果比较
先将采回的外植体用洗洁精清洗，去除表皮上
的灰尘和杂物等，再用流水冲洗２０ｍｉｎ后用蒸馏水
冲洗１次，备用。在放入超净工作台使用升汞消毒
前，对外植体采用７５％酒精进行表面喷洒消毒预处
理，之后用０．１％的升汞浸泡消毒，再用无菌水冲洗
３～４次，无菌纸吸干后接种到添加６－ＢＡ　０．５ｍｇ／Ｌ
和ＩＡＡ　０．３ｍｇ／Ｌ的 ＭＳ培养基上，每个处理接种
３０个外植体，３次重复。于温度（２５±２）℃，光照强
度１　５００～２　０００ｌｘ，光照时间１２ｈ条件下培养。
３０ｄ后统计试验结果（下同）。其中，接种外植体大
小：叶片为２ｃｍ２左右的小块，叶柄长２～３ｃｍ，顶芽
高３ｃｍ左右，茎段为带１个叶腋的茎段。
１．３ 不同消毒时间对嫩茎消毒效果的影响
试验设４个处理：处理Ⅰ～Ⅳ的消毒时间分别
为６ｍｉｎ、８ｍｉｎ、１０ｍｉｎ和１２ｍｉｎ，每个处理接种３０
个，３次重复。将试验茎段按试验设计用升汞消毒
处理后再用无菌水冲洗３～４次，并用无菌纸吸干后
接种到添加６－ＢＡ　０．５ｍｇ／Ｌ和ＩＡＡ　０．３ｍｇ／Ｌ的
ＭＳ培养基上培养。培养条件同上。
１．４ 不同取材时间对外植体消毒的影响
采用２因素试验设计：１）取材时间：红花山玉
兰生长期（６月）和休眠期（１２月）。２）外植体：茎段
和顶芽。其中，对顶芽采取消毒后直接接种和消毒
后去除托叶再进行接种２种处理。每个处理接种
３０个外植体，３次重复。
１．５ 不同外植体对红花山玉兰初代培养启动的影响
在同一灭菌时间和培养条件下，观察红花山玉
兰的顶芽和茎段初代培养的启动效果。试验设３个
处理：处理Ⅴ，茎段消毒后接种；处理Ⅵ，顶芽消毒后
直接接种；处理Ⅶ，顶芽消毒后去除托叶再进行接
种。观察３种处理下存活外植体的启动情况。每个
处理统计４５个存活外植体的启动情况，无重复。
１．６ 数据统计与分析
各处理培养３０ｄ后分别统计污染率、死亡率、
存活率和启动率，采用 ＭｉｃｒｏｓｏｆｔＥｘｃｅｌ整理数据，并
采用ＳＰＳＳ１７．０软件进行方差分析和多重比较。
污染率＝
污染的外植体数
接种的外植体数×１００％
死亡率＝
死亡的外植体数
接种的外植体数×１００％
存活率＝
存活外植体数
接种的外植体数×１００％
启动率＝
存活外植体启动数
存活外植体数 ×１００％
２ 结果与分析
２．１ 不同外植体的消毒效果
观察发现：叶片在接种后第３天开始出现褐化
死亡，到第５天时，叶柄、茎段和顶芽也开始出现褐
化死亡。
从图１和表１可见：１）存活率。茎段的存活率
最高，为４０．００％；其次是顶芽，为３３．３３％；叶片的
存活率最低，仅为２．２２％。茎段和顶芽的存活率与
叶柄（２６．６７％）的差异均不显著，但３者均与叶片的
差异达显著。２）污染率。叶柄的污染率最低，仅为
１８．８９％；其次是顶芽，为２７．７８％。二者的差异达
显著，且与其余处理的差异达显著。叶片与茎段的
污染率较高，分别为３７．７８％和３４．４４％，二者的差
异不显著。３）死亡率。叶片的死亡率最高，为
６０．００％，其与叶柄的（５４．４４％）差异不显著，但二者
均与其余处理的差异达显著。综合３个指标可见，
叶片消毒困难，红花山玉兰组培的外植体以选择茎
段和顶芽为好。
a 顶芽 b 茎段 c 叶片 d 叶柄
图１ 不同外植体消毒后红花山玉兰的生长情况（３０ｄ）
Ｆｉｇ．１　Ｇｒｏｗｔｈ　ｓｔａｔｕｓ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｄｉｓｉｎｆｅｃｔｅｄ　ｅｘｐｌａｎｔｓ
·３４·
　唐军荣 等　红花山玉兰组织培养外植体的选择及其消毒方法
　ＴＡＮＧ　Ｊｕｎｒｏｎｇ　ｅｔ　ａｌ　Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｄｉｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎ　Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｏｆ　Ｅｘｐｌａｎｔｓ　ｏｆ　Ｍａｇｎｏｌｉａ　ｄｅｌａｖａｙｉ　ｉｎ　Ｔｉｓｓｕｅ　Ｃｕｌｔｕｒｅ
表１ 红花山玉兰不同外植体的消毒效果
　　Ｔａｂｌｅ　１　Ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　ｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｖａｒｉａｎｔ　ｅｘｐｌａｎｔｓ
ｏｆ　Ｍ．ｄｅｌａｖａｙｉ ％
外植体类型
Ｅｘｐｌａｎｔｓ
ｔｙｐｅ
污染率
Ｃｏｎｔａｍｉｎａｔｉｏｎ
ｒａｔｅ
死亡率
Ｍｏｒｔａｌｉｔｙ
ｒａｔｅ
存活率
Ｓｕｒｖｉｖａｌ
ｒａｔｅ
顶芽 Ｔｅｒｍｉｎａｌ　ｂｕｄ　 ２７．７８ｂ ３８．８９ｂ ３３．３３ａ
茎段Ｓｔｅｍ　 ３４．４４ａ ２５．５６ｃ ４０．００ａ
叶片Ｂｌａｄｅ　 ３７．７８ａ ６０．００ａ ２．２２ｃ
叶柄Ｐｅｔｉｏｌｅ　 １８．８９ｃ ５４．４４ａ ２６．６７ａｂ
　注：同列中不同小写字母表示组间差异达０．０５显著水平（下同）。
　Ｎｏｔｅ：Ｔｈｅ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｌｅｔｔｅｒｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ｃｏｌｕｍｎ　ｉｎｄｉｃａｔｅｄ　０．０５ｓｉｇ－
ｎｉｆｉｃａｎｔ　ｌｅｖｅｌ．Ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ｂｅｌｏｗ．
２．２ 不同消毒时间对茎段消毒效果的影响
茎段消毒后用无菌纸吸干水分，斜插于培养基
上，暗培养３ｄ后进行光照，以减少其褐化。培养到
第５天时，茎段开始出现污染，且污染主要发生在处
理Ⅰ和处理Ⅱ的培养瓶中。在培养１０～１５ｄ时，污
染均集中出现；１５ｄ后，污染减少；在培养第２２天时
没有污染再发生，其中污染主要表现为霉菌污染。
从表２可见，不同的升汞消毒时间，茎段的污染率、
死亡率和存活率也随之发生相应变化。消毒６～
１２ｍｉｎ，随着消毒时间的延长，其污染率逐渐下降，
死亡率则呈上升的趋势。其中，消毒６ｍｉｎ时，茎段
没有出现死亡，污染率最高，达 ９１．１１％；消毒
１０ｍｉｎ时，存活率最高，达４０．００％；消毒１２ｍｉｎ时，
死亡率增至４１．００％，存活率降至３１．１１％。方差分
表２ 不同处理时间红花山玉兰茎段的消毒效果
　　Ｔａｂｌｅ　２　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｄｉｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎ　ｔｉｍｅ　ｏｎ　ｂｕｄ
ｓｔｅｍｓ　ｏｆ　Ｍ．ｄｅｌａｖａｙｉ ％
处理
Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ
污染率
Ｃｏｎｔａｍｉｎａｔｉｏｎ
ｒａｔｅ
死亡率
Ｍｏｒｔａｌｉｔｙ
ｒａｔｅ
存活率
Ｓｕｒｖｉｖａｌ
ｒａｔｅ
Ⅰ ９１．１１ａ ０．００ｃ ８．８９ｃ
Ⅱ ６３．３３ｂ １１．１１ｃ ２５．５６ｂ
Ⅲ ３４．４４ｃ ２５．５６ｂ ４０．００ａ
Ⅳ ２７．７８ｄ ４１．１１ａ ３１．１１ａｂ
析表明，虽然在１０ｍｉｎ和１２ｍｉｎ时存活率的差异
不显著，但污染率和死亡率之间存在显著差异。因
此，综合污染率、死亡率和存活率３个指标可见，茎
段的最佳消毒时间为升汞消毒１０ｍｉｎ。
２．３ 不同采集时间对外植体消毒效果的影响
从表３可见：由于外植体采集时间的不同，其体
内贮藏的营养物质及其木质化程度也有差别，致使
外植体的消毒难易程度不同。其中，６月采集的茎
段和顶芽，其污染率较１２月低，但死亡率较１２月
高。可能是由于６月红花山玉兰处于生长期，枝条
木质化程度低，带菌量少，较易消毒；同时，由于处于
生长期，其体内的酚类物质含量相对较高，使得外植
体消毒后易出现褐化死亡。因此，茎段和顶芽的存
活率仍然不高，分别为３６．６６％和３２．２２％。６月和
１２月采集的顶芽采取消毒后剥离托叶的处理可使
包裹的嫩芽免受升汞的伤害，同时带菌量大大减少，
因此，存活率均较高，分别为７８．８９％和８５．５５％，二
者间的差异不显著，但与其他处理间的差异显著。
方差分析表明，６月采集的茎段其消毒效果优于１２
月；顶芽采用消毒后去除托叶，６月和１２月采集的
消毒效果差异不显著，即６月和１２月采集顶芽外植
体均可。
２．４ 不同处理对外植体初代培养启动的影响
从图２和表４可见：在同一灭菌时间和培养条
件下，外植体类型以及消毒后处理方式的不同，存活
的外植体启动结果也不相同。其中，茎段和消毒后
去托叶的顶芽启动率较高，分别为 ８０．０％ 和
８６．７％，且启动速度快，启动芽的长势好；而消毒后
未去托叶的顶芽启动较慢，且启动率低，仅６２．２％。
主要是由于顶芽被托叶包裹，在消毒后，托叶阻碍了
嫩芽的营养吸收，从而使得顶芽启动较困难，需要继
代１次，顶芽方可长出且长势弱。因此，采用茎段或
消毒后去托叶的顶芽最有利于芽体启动。
处理 V(50 d) 处理 VI(50 d) 处理 VII(50 d) 继代培养（20 d）
图２ 不同处理红花山玉兰外植体的生长情况
Ｆｉｇ．２　Ｇｒｏｗｔｈ　ｓｔａｔｕｓ　ｏｆ　ｅｘｐｌａｎｔｓ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ
表３ 不同采集时间红花山玉兰外植体的消毒效果
Ｔａｂｌｅ　３　Ｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｍ．ｄｅｌａｖａｙｉ　ｗｉｔｈ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｓａｍｐｌｉｎｇ　ｔｉｍｅ ％
取材时间
Ｓａｍｐｌｉｎｇ　ｔｉｍｅ
外植体类型
Ｅｘｐｌａｎｔｓ　ｔｙｐｅ
污染率
Ｃｏｎｔａｍｉｎａｔｉｏｎ　ｒａｔｅ
死亡率
Ｍｏｒｔａｌｉｔｙ　ｒａｔｅ
存活率
Ｓｕｒｖｉｖａｌ　ｒａｔｅ
６月 茎段 ４７．７８ｃ １５．５６ｃ ３６．６６ｂ
　Ｊｕｎｅ 顶芽（未去托叶） ４２．２２ｃ ２５．５６ａ ３２．２２ｂ
顶芽（消毒后去托叶） １０．００ｄ １１．１１ｄ ７８．８９ａ
１２月 茎段 ８６．６７ａ ３．３３ｅ １０．００ｃ
　Ｄｅｃｅｍｂｅｒ 顶芽（未去托叶） ６４．４４ｂ ２０．００ｂ １５．５６ｃ
顶芽（消毒后去托叶） ６．６７ｄ ７．７８ｄ ８５．５５ａ
·４４·
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　贵 州 农 业 科 学
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　Ｇｕｉｚｈｏｕ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ
表４ 不同处理红花山玉兰外植体的启动效果
Ｔａｂｌｅ　４　Ｂｕｄ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｉｎ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　Ｍ．ｄｅｌａｖａｙｉ　ｅｘｐｌａｎｔｓ
处理
Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ
芽启动率／％
Ｂｕｄ　ｓｔａｒｔｉｎｇ　ｒａｔｅ
生长状况
Ｇｒｏｗｔｈ　ｓｔａｔｕｓ
处理Ⅴ ８０．０ 启动较快，茎段横切面会有少量愈伤组织，诱导出的腋芽粗壮，深绿色。
处理Ⅵ ６２．２ 启动较慢，需继代１次，去除褐化的托叶后，里面的幼芽才能生长，且长势较弱。
处理Ⅶ ８６．７ 启动较快，顶芽粗壮，浅绿色，部分顶芽基部会萌发侧芽。
３ 结论与讨论
研究结果表明，红花山玉兰的外植体选择以顶
芽为好，且以消毒后去除托叶的顶芽进行组培效果
最好，启动率高，芽长势好；在顶芽的采集时间上，６
月和１２月均可，二者的存活率差异不显著，而对于
茎段取材，则６月要优于１２月。此外，红花山玉兰
外植体在消毒过程中，虽然通过消毒时间可以降低
污染，但是也会造成外植体的存活率下降。因此，外
植体消毒时，要掌握好各个指标的平衡关系，尽量减
少因消毒产生的对外植体的伤害，以免使外植体消
毒后在培养过程中启动慢，或者不启动［２１］。
红花山玉兰组培过程中外植体极易产生褐化，
在其切口处会分泌较多的酚类物质逐渐渗入到培养
基，导致外植体死亡。该试验通过添加活性炭结合
缩短转接时间对降低外植体的褐化率起到了一定的
效果，但对于红花山玉兰组培过程中防褐化的问题
仍需要进一步研究。
［参 考 文 献］
［１］ 龚 洵，武全安，鲁元学，等．栽培红花山玉兰的传粉
生物学［Ｊ］．云南植物研究，１９９８，２０（１）：８９－９３．
［２］ 刘根林．杂交鹅掌楸组织培养技术研究初报［Ｊ］．江苏
林业科技，２０００，２７（６）：２４－２６．
［３］ 陈金慧，施季森．鹅掌楸组培苗的生根及移栽技术
［Ｊ］．林业科技开发，２００２，１６（５）：２１－２２．
［４］ 李纪元，田 敏，李辛雷，等．成熟龄杂交鹅掌楸再生
体系的建立［Ｊ］．浙江林学院学报，２００６，２３（５）：５１２－
５１５．
［５］ 陈 颖，周统建，曹福亮，等．北美鹅掌楸组培快繁技
术体系的建立［Ｊ］．浙江林业科技，２００９，２９（６）：２９－
３１．
［６］ 杜凤国，刁绍起，王 欢，等．天女木兰的组织培养
［Ｊ］．东北林业大学学报，２００６，３４（２）：４２－４３．
［７］ 徐 石，陆秀君，李天来．天女木兰组织培养中有效获
得无菌外植体的研究［Ｊ］．西北林学院学报，２００８，３
（３）：１２７－１２９．
［８］ 陆秀君，徐 石，李天来，等．天女木兰幼胚离体培养
及组织快繁［Ｊ］．东北林业大学学报，２００８，３６（３）：５－
７．
［９］ 徐 石，刘 翔，张明宏，等．天女木兰组织培养技术
研究进展［Ｊ］．林业实用技术，２０１１（６）：３－４．
［１０］ 孙铭鸿，安 娜，周 清，等．天女木兰嫩茎愈伤组织
诱导及再生体系建立研究［Ｊ］．中国园艺文摘，２０１２
（４）：６－８．
［１１］ 王 欢，杜凤国，张志翔．天女木兰组织培养的抗褐化
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（责任编辑：王　海）
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　唐军荣 等　红花山玉兰组织培养外植体的选择及其消毒方法
　ＴＡＮＧ　Ｊｕｎｒｏｎｇ　ｅｔ　ａｌ　Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｄｉｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎ　Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｏｆ　Ｅｘｐｌａｎｔｓ　ｏｆ　Ｍａｇｎｏｌｉａ　ｄｅｌａｖａｙｉ　ｉｎ　Ｔｉｓｓｕｅ　Ｃｕｌｔｕｒｅ