全 文 ：海州常山腋芽诱导培养初探
宋 婷1，李 翔1，张 颖1，张应华1※，许俊强1，吴金花2
（1. 云南农业大学园林园艺学院，云南昆明 650201；2. 云南省澄江县农业技术推广站，652500）
摘 要 以海州常山的1年生茎段为外植体，比较不同消毒剂、消毒时间的消毒效果。消毒后的茎段接
种到附加了不同浓度的6-BA和IAA的MS培养基中，筛选腋芽抽生的适宜生长调节剂浓度组合。结果
表明：外植体消毒的最佳方案是75%酒精30 s＋0.1%HgCl2消毒7 min，有效材料获得率高达62.0%。在
诱导腋芽抽生培养中，以培养基“MS＋6-BA 0.2 mg/L＋IAA 0.1 mg/L”的配方效果最佳，腋芽萌动率
高达90.9%。
关键词 海州常山；组织培养；茎段；外植体消毒；腋芽抽生
中图分类号：S56；Q945.51 文献标志码：A 文章编号：1673-890X(2015)22-083-03
知网出版网址：http://www.cnki.net/kcms/detail/50.1186.s.20150908.1436.048.html 网络出版时间：2015/9/8 14:36:58
收稿日期：2015-06-07
基金项目：云南省级财政发展生物产业专项资金项目（[2013]-313）。
作者简介：宋婷（1992—），女，安徽宿松人，云南农业大学园林园艺学
院园艺专业2014级在读硕士研究生，研究方向为蔬菜高效栽培。※为通
信作者，E-mail: zhangyh9519@163.com。
海州常山（Clerodendrum trichotomum Thuhb）别
名斑鸠菜、泡花树，因叶大有特殊臭气，又叫臭梧桐，
为马鞭草科（Verbenaceae）大青属（Clerodendrum）落
叶灌木或小乔木[1]。海州常山是一种风味独特的木本
野生蔬菜，又是应用很广的药用植物，在中药材市场
上的用量很大。此外，海州常山一株树上花果共存，
而且花果期长，色泽亮丽，为良好的观花、观果园林
植物；具有一定抗旱、耐淹、耐涝和抗污染的能力，
对重金属砷的耐受性和富集能力都较强，是砷污染地
的理想修复树种[2－3]。
海州常山市场需求量大，具有广泛的开发利用前
景，但种苗繁殖难是规模化种植的一个制约因素。由
于扦插和分株的繁殖系数低，而种子发芽较困难，因
此，组培快繁体系的建立，对海州常山种质资源保护
及规模化人工种植都具有重要意义。
1 材料与方法
1.1 植物材料
试验材料为海州常山1年生带腋芽茎段，取材于
云南省楚雄市彝人古镇。
1.2 方法
1.2.1 外植体消毒
将海州常山枝条去掉叶片，留叶柄0.2 cm左后，
以保护腋芽免受机械损伤，先用洗衣粉液进行清洗，
然后流水冲洗5 h左后。冲净后置于超净工作台上紫外
灯照射10 min，后用75%酒精浸泡30 s，无菌水冲洗2
次，再根据设计的消毒试验方案（表1）进行消毒，
在消毒液中加入2滴吐温20。倒去消毒液，用无菌水
漂洗5～7次，吸干水分，将消毒后的茎段置于无菌滤
纸，切去基部受损组织，接种于培养基上。通过对比
不同消毒剂以及不同消毒时间的消毒效果，筛选合适
的消毒剂及最佳消毒时间。
1.2.2 初代培养
筛选最佳消毒剂及最佳消毒时间，参考刘慧春
表1 海州常山外植体消毒方案
处理代号
1
2
3
4
5
6
7
消毒剂
NaClO
NaClO
NaClO
HgCl2
HgCl2
HgCl2
HgCl2
浓度
/%
5
5
5
0.1
0.1
0.1
0.1
时间
/min
3
5
7
5
7
10
15
第9卷第22期
Vol.9 No.22
南方农业
South China Agriculture
2015年8月
Aug.2015
宋 婷,李 翔,张 颖,等.海州常山腋芽诱导培养初探[J].南方农业,2015,9(22):83－85.
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等人的方法[4]，采用MS＋BA0.2＋IAA0.1培养基。诱
导海州常山腋芽抽生，以MS为基本培养基，添加不
同浓度的6-BA、IAA作为外源生长调节剂，共设计
8种浓度配比（见表2）。附加3%蔗糖、0.7%琼脂，
pH＝6.0。将配制好的培养基置于121℃、0.12 MPa压
力下高温灭菌30 min，培养温度为23～25℃，光照度
1500～2000 lx，光照12 h/d。
1.2.3 数据处理
对外植体消毒后的污染率、存活率及腋芽萌动率
进行统计[5－6]，每处理重复3次，统计公式如下。
污染率＝(污染的外植体数/接种外植体数)×100%
存活率＝(消毒后存活的外植体数 /接种外植体
数)×100%
腋芽萌动率＝(腋芽已萌动的外植体数/接种存活
的总外植体数)×100%
2 结果与分析
2.1 最适消毒剂及消毒时间的筛选
本试验采用 7 5 %酒精处理 3 0 s后，分别用
0.1%HgCl2、5%NaClO对外植体进行不同时间的消毒
处理。结果表明，不同消毒剂、不同消毒时间对海州
常山茎段消毒效果表现不一，其污染率和存活率有所
不同，试验结果见表3。
茎段用75%酒精30 s＋0.1%HgCl2消毒5 min时，污
表2 诱导海州常山腋芽抽生的培养基生长调节剂配比
处理代号
1
2
3
4
处理代号
5
6
7
8
生长调节剂配比
MS＋BA0.2＋IAA0.1
MS＋BA0.2＋IAA0.2
MS＋BA0.2＋IAA0.4
MS＋BA0.2＋IAA0.6
生长调节剂配比
MS＋BA0.4＋IAA0.1
MS＋BA0.4＋IAA0.2
MS＋BA0.4＋IAA0.4
MS＋BA0.4＋IAA0.6
表3 消毒剂、消毒时间对海州常山外植物体的消毒效果
消毒剂
75%酒精＋
0.1%HgCl2
75%酒精＋
5%NaClO
消毒时间
/min
5
7
10
15
3
5
7
接种外植体数
/个
160
160
160
160
160
160
160
污染率
/%
48.6
31.4
22.9
15.0
97.5
65.0
15.0
存活率
/%
50.0
62.0
54.0
30.0
2.5
30.0
15.0
染率为48.6%，消毒后茎段褐化轻，后期长势好，芽
萌动快，抽生叶片为深绿色（图1a）；消毒7 min时，
茎段稍有褐化现象，但后期恢复快，整体长势好，存
活率高达62%，消毒效果最好（图1b、图2）；消毒10
min时，外植体汞中毒较深，部分外植体褐化死亡，
腋芽后期抽生缓慢（图1c）；当消毒15 min时，汞中
毒很深，60%以上的外植体褐化死亡，存活率仅有
30%，腋芽抽生极为缓慢。
茎段用75%酒精30 s＋5%NaClO消毒3 min时，无褐
化现象，接种160个茎段，仅有4个茎段存活，污染率为
97.5%，存活率为2.5%；当消毒7 min时，茎段褐化非常
严重，70%的外植体因褐化死亡，存活率仅有15%，且
后期腋芽抽生困难；而消毒时间为5 min时，效果最好，
存活率最高达30%，后期腋芽抽生相对缓慢。
综合上述试验结果，海州常山外植体(茎段)进行
消毒最适方案为75%酒精30 s＋0.1%HgCl2消毒7 min，
污染率低，存活率最高。
2.2 诱导海州常山腋芽抽生培养基的筛选
以筛选出的适宜消毒方法，7 5 %酒精3 0 s＋
0.1%HgCl2消毒7 min，设计8个不同浓度配比的培养基
（见表2），试验结果表明，生长调节剂的不同浓度
配比对诱导海州常山腋芽抽生效果表现不一，其7 d液
芽萌动率跟15 d腋芽萌动率均有所不同（见表4）。
图1 75%酒精消毒30 s＋0.1%HgCl2消毒5～10 min
接种后30 d腋芽生长情况
a. 0.1%HgCl2消毒5 min，b. 0.1%HgCl2消毒5 min，c. 0.1%HgCl2消毒5 min
图2 75%酒精消毒30 s＋0.1%HgCl2消毒7 min
接种后15 d腋芽生长情况
宋 婷，李 翔，张 颖，张应华，许俊强，吴金花：海州常山腋芽诱导培养初探
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表4 8种培养基诱导海州常山腋芽的萌动率/%
培养时间
7 d
15 d
1
36.4
90.9
2
27.0
73.7
3
21.0
69.0
4
23.0
76.0
5
18.8
37.5
6
11.1
20.8
7
20.7
53.8
8
18.2
37.5
分析7 d和15 d的腋芽抽生情况，其中5号、6号、
7号、8号培养基腋芽抽生相对缓慢，1号、2号、3
号、4号培养基腋芽抽生相对较快，故6-BA浓度为0.2
mg/L最佳；1号、2号、3号、4号培养基腋芽萌动率以
1号、2号较高，1号最高，故低浓度的IAA更有助于腋
芽的抽生。所以1号培养基“MS＋BA0.2＋IAA0.1”
为诱导海州常山腋芽抽生的最佳培养基。
3 讨论
3.1 防止褐变的方法
褐变在海州常山组培过程中普遍存在，能否有效
控制褐变是决定组培成功的关键。可以采取以下防止
方法。
（1）通常取幼龄部位进行组织培养不易褐变，
但随着组织的老龄化，植物组织内醌类物质增多而褐
变严重[7]，选择外植体时应尽量选择腋芽饱满、无病
虫害的1年生枝条。
（2）春夏季特别是春季取材的褐变情况较轻，
外植体生长旺盛，分生能力强且不易褐变，而以已经
木栓化或木质化的枝条和处于休眠状态的芽作为外植
体进行组织培养时则褐变严重，因此组培尽量在春季
进行并选择半木质化枝条。
（3）外植体受伤程度较小时褐变更易控制[8]，所
以平常取材时应尽量减少伤口面，保持材料的完整性。
（4）适当添加抗氧化剂及吸附剂，前者抑制多
酚氧化，后者吸附氧化物，从而减轻对组织培养物的
毒害。
3.2 选择合适的消毒方案
对大多数外植体只需要进行表面消毒即可，外
植体表面消毒的关键在于选择合适的消毒剂和消毒时
间。不同植物或同一植物不同外植体消毒的方法不
同，本试验中所采取的7种不同消毒方式，其消毒结
果存在明显差异，所以为达到满意的消毒效果，需根
据外植体情况，选择多种类消毒方式进行试验，摸索
出适宜的消毒剂及最佳消毒时间。
3.3 诱导海州常山腋芽抽生的最佳生长调节剂配比
试验结果表明，低浓度的6-BA与低浓度的IAA更
有助于腋芽的抽生。最适培养基为1号“MS＋BA0.2
＋IAA0.1”，此试验结果与刘慧春[4]等人在豆腐柴组
培试验中的结果一致，低浓度的生长调节剂配比更有
利于腋芽抽生。
4 小结
综合上述试验结果，初步确立海州常山外植
体 (茎段 )消毒处理的最适方案为7 5 %酒精3 0 s＋
0.1%HgCl2消毒7 min，污染率低，存活率最高。诱导
腋芽抽生1号培养基速度最快，15 d腋芽萌动率最高，
高达90.9%，所以“MS＋BA0.2＋IAA0.1”为诱导海
州常山腋芽抽生的最佳培养基。
参考文献：
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（责任编辑：丁志祥）
第9卷第22期
Vol.9 No.22
南方农业
South China Agriculture
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