全 文 ：第 31 卷 第 9 期
2 0 1 3 年 9 月
中 华 中 医 药 学 刊
CHINESE ARCHIVES OF TRADITIONAL CHINESE MEDICINE
Vol． 31 No． 9
Sep． 2 0 1 3
中
华
中
医
药
2019
学
刊
杠板归的体内外抗肿瘤作用实验研究
陶锋1，张如松2
(1．浙江医学高等专科学校药学系，浙江 杭州 310053;2．浙江中医药大学药学院，浙江 杭州 310053)
摘 要:目的:研究杠板归提取物对肿瘤细胞的体内外抑制率。方法:采用 MTT 法，观察杠板归提取物对多
种肿瘤细胞的抑制率以及 IC50;通过观察杠板归提取物对 S － 180 肉瘤的抑制作用评价杠板归的体内抗肿瘤作
用。结果:杠板归提取物对多种肿瘤细胞体外抑制率均较好，其中以乙酸乙酯部位最佳;乙酸乙酯提取物对 S －
180 肉瘤具有较强的体内抗肿瘤作用。结论:抗癌灵乙酸乙酯提取物具有显著抗肿瘤作用。
关键词:杠板归;乙酸乙酯提取物;抗肿瘤
中图分类号:R285． 6 文献标志码:A 文章编号:1673 － 7717(2013)09 － 2019 － 03
Research on Anti － Tumor Effect of Polygonum perfoliatum L．in vitroand in vivo
TAO Feng1，ZHANG Rusong2
(1． Pharmacy Department，Zhejiang Medical College，Hangzhou 310053，Zhejiang，China;
2． Medical College，Zhejiang Chinese Medical University，Hangzhou 310053，Zhejiang，China)
Abstract:Objective:To observe the growth inhibitory effect of tumor cells by extracts of Polygonum perfoliatum L． in
vitro and in vivo． Methods:The anti － proliferative activities of several extracts against a quantity of tumor cells were eval-
uated by MTT colorimetric assay in vitro． The result showed by inhibitory rate and IC50 ． The inhibitory effects of several
extracts on tumor growth in vivo were observed by the models of implanted sarcoma 180 (S － 180)in mice． The result
showed by inhibitory rate． Results:Extracts of Polygonum perfoliatum L． Had anti － proliferative activities against several
tumor cells in vitro，especially the ethyl acetate extract． The inhibitory rates of ethyl acetate extract on the growth of S －
180 were significant in vivo． Conclusion:Ethyl acetate extract of Polygonum perfoliatum L． has significant growth inhibi-
tory effect of tumor cells．
Key words:Polygonum perfoliatum L．;ethyl acetate extract;anti － tumor
收稿日期:2013 － 04 － 12
基金项目:浙江医学高等专科学校科研基金资助项目(2009XZA04)
作者简介:陶锋(1978 －)，男，讲师，博士，研究方向:天然药物化学。
通讯作者:张如松，教授，博士研究生导师，研究方向:中药药效物
质与创新药物的研究开发。
杠板归是我国一味具有很高药用价值的清热解毒中草
药，它是蓼科植物杠板归(Polygonum perfoliatum L．)的地上
部分。主产于我国长江以南各省区，具有利水消肿，清热解
毒，止咳等功效［1］。用于肾炎水肿、百日咳、泻痢、湿疹、疖
肿、毒蛇咬伤、肿瘤等。据王安卿《采药志》、《纲目拾遗》等
资料记载，杠板归具有治疗肿瘤的作用。现代药理学研究
发现，杠板归具有抗炎和抗菌的作用［2 － 4］;在分离和结构鉴
定中发现黄酮和三萜酸类成分［5 － 6］是杠板归的主要成分，
这些成分都具有较强的生理活性。但对于杠板归抗肿瘤活
性及机制的研究，至今尚未见报导。本次研究以杠板归粗
粉为实验对象，分别得到石油醚、乙酸乙酯、乙醇和水等 4
种提取物，通过体外 MTT 试验，评价各组分对肿瘤细胞的
生长抑制和细胞毒性并通过小鼠 S － 180 肉瘤的体内有抗
肿瘤试验删选出活性最强的提取物。
1 材 料
1． 1 细胞株
小鼠黑色素瘤 B － 16 细胞，人胃腺癌 SGC － 7901 细
胞，人结肠腺癌 Colo320 细胞，人前列腺癌 PC － 3 细胞，由
浙江省医学科学院药物研究所提供;人急性髓性白血病
HL60 细胞，由浙江大学药学院提供。
小鼠移植性 S － 180 肉瘤，为本实验室传代，按常规方
法腹水留种，每 4 ～ 5 d传代 1 次。
1． 2 实验动物
清洁级 ICR小鼠，雌雄各半，接种时体重为 18 ～ 22 g，
购自浙江省医学科学院动物中心，许可证号:SCXK(浙)
2008 － 0033。
1． 3 药材来源及鉴定
杠板归:购自浙江中医药大学中药饮片厂(批号
101018) ，产地:浙江。经浙江中医药大学药学院张如松教
授鉴定为:蓼科(Polygonaceae)蓼属(Polygonum L．)植物杠
板归(Polygonum perfoliatum L．)的地上部分。
1． 4 试剂
DMEM培养基，含双抗，Invitrogen 公司;新生小牛血
清，杭州四季青生物工程材料研究所;0． 25%胰蛋白酶，上
海生工公司，进口分装;二甲基亚砜，无锡海硕生物有限公
司;MTT(四甲基偶氮唑盐) ，杭州昊天生物技术有限公司。
1． 5 仪器
CO2细胞培养箱 － Forma3111 美国 Thermo Fwasher
Scientific，公司;超净工作台 － Air Tech:苏州安泰空气技术
公司;倒置显微镜 － CKX4:日本 Olympus 公司;酶标仪 －
Model 680:美国 BIO － RAD 公司;直径 60mm 培养皿、巴氏
吸管、无菌注射器:华东医药股份有限公司。
2． 方 法
2． 1 供试药物的提取制备
取杠板归干燥全草 500 g，用 70%乙醇适量浸泡过夜，
9102
DOI:10.13193/j.issn.1673-7717.2013.09.157
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用 12 倍量(V/W)70%乙醇回流提取 3 次，每次 2 h，趁热过
滤除去药渣，旋转蒸发至无醇味后，分别用石油醚、乙酸乙
酯萃取 4 次，得到石油醚提取液、乙酸乙酯提取液以及乙醇
残留物。减压浓缩至浸膏，分别得到石油醚提取物、乙酸乙
酯提取物、乙醇残留物。
杠板归水提物的制备:取杠板归干燥全草 500 g，用适
量水浸泡 1 h后，用 12 倍量(V/W)水回流 3 次，每次 2 h，
趁热过滤出去药渣，减压浓缩至浸膏，得到水提取物。
体外试验时，精密称取 10 mg供试品，用移液器精确加
入 1 mL DMSO溶解，配制成 10 mg /mL溶液备用。
2． 2 MTT法测定杠板归提取物对肿瘤细胞的抑制率及
IC50
取对数生长期的 B － 16、SGC － 7901、COLO320、PC －
3、HL60 细胞，将所选的细胞数接种于 96 孔板上，100 μL /
孔。培养 24 h后加药，给药组剂量为 300 μg /mL、150 μg /
mL、75 μg /mL、37． 5 μg /mL、18． 75 μg /mL。同时设对照
组和空白组。每组设 4 复孔，培养 72 h后，每孔加入 5 mg /
mL MTT 20 μL，培养 4 h 后倾去培养液，分别加入 150 μL
DMSO溶解，振摇均匀。用酶标仪在 570 nm 波长处测定
OD值［7］。并算出不同浓度杠板归提取物对肿瘤细胞的抑
制率，根据抑制率计算药物对肿瘤细胞的半数抑制浓度
(IC50) ，IC50用 82798 － IC50软件计算。
抑制率计算公式:IR =
OD正常对照孔 － OD给药孔
OD正常对照孔 － OD空白对照孔
× 100%
2． 3 杠板归提取物对 S － 180 小鼠肉瘤的抑制作用
2． 3． 1 荷瘤小鼠模型的建立 选择腹腔接种 7 ～ 9 d 的 S
－ 180 肉瘤小鼠，处死后于无菌条件下抽取乳白色腹水，用
无菌生理盐水稀释成 1 × 107个 /mL 瘤细胞悬液。在无菌
条件下，于健康小鼠右前肢腋部皮下接种瘤液，每只 0． 2
mL，雌雄各半［7］。
2． 3． 2 给药方式 接种次日，按体重随机分成模型组、环
磷酰胺组(25 mg /kg) ，杠板归乙酸乙酯提取物 3 个剂量组
(200、100、50 mg /kg) ，每组 10 只。每日称重后，杠板归提
取物灌胃给药，环磷酰胺足皮下注射，每日 1 次，给药 10 d。
2． 3． 3 抑瘤率的测定 给药后第 11 d 处死 S － 180 荷瘤
小鼠，完整剥取瘤块，称重，按下面公式计算抑瘤率:
抑瘤率(%)=(模型组平均瘤重 －给药组平均瘤重)/
模型组平均瘤重 × 100%
2． 3． 4 统计处理 数据均以 珋x ± s 表示，计量资料组间显
著性差异采用单因素方差分析(SPSS 17． 0) ，P ＜ 0． 05 为有
显著性差异;P ＜ 0． 01 为有极显著性差异。
3 结 果
3． 1 杠板归提取物对多种肿瘤细胞增殖的抑制作用
杠板归提取物对多种肿瘤细胞的抑制作用见表 1 ～ 4。
结果表明，杠板归乙酸乙酯提取物对多种肿瘤细胞均有显
著的增殖抑制作用;但药物对各种细胞的敏感性不同，其中
对 Colo320、PC － 3、HL60 、SGC － 7901 敏感度高，细胞抑制
力强;对 B － 16 敏感度稍差，抑制力稍弱。
3． 2 杠板归乙酸乙酯提取物对小鼠 S － 180 肉瘤的抑制作
用
小鼠接种 S － 180 肉瘤后，各组在第 4 ～ 5 d 均可触及
皮下肿瘤，第 6 ～ 7 d肉眼观察可见杠板归乙酸乙酯提取物
组肿瘤体积明显小于模型组，各组抑瘤率详见表 5。乙酸
乙酯提取物高剂量组(200 mg /kg)的抑瘤率达到 58． 46%，
且瘤重与模型组相比有极显著性差异(P ＜ 0． 01)。
表 1 杠板归石油醚提取物对肿瘤细胞的
抑制作用(n = 4，珋x ± s)
瘤株 浓度(μg /mL) 抑制率(%) IC50(μg /mL)
18． 75 2． 29 ± 2． 8
37． 5 3． 06 ± 2． 8
B － 16 75 23． 81 ± 2． 6 91． 93 ± 6． 7
150 70． 81 ± 2． 3
300 98． 70 ± 1． 6
18． 75 2． 36 ± 2． 4
37． 5 19． 97 ± 2． 1
Colo320 75 44． 13 ± 1． 7 63． 62 ± 4． 3
150 96． 93 ± 1． 4
300 98． 78 ± 1． 2
18． 75 27． 52 ± 2． 3
37． 5 44． 78 ± 2． 2
SGC － 7901 75 58． 33 ± 2． 0 41． 68 ± 3． 6
150 90． 08 ± 1． 7
300 95． 87 ± 1． 4
18． 75 7． 31 ± 2． 6
37． 5 21． 75 ± 2． 1
PC － 3 75 48． 65 ± 1． 7 91． 86 ± 6． 2
150 64． 67 ± 1． 5
300 84． 41 ± 1． 4
18． 75 36． 97 ± 2． 7
37． 5 40． 86 ± 2． 5
HL60 75 63． 35 ± 2． 4 35． 24 ± 6． 5
150 94． 73 ± 2． 2
300 96． 24 ± 2． 0
表 2 杠板归乙酸乙酯提取物对肿瘤细胞的
抑制作用(n = 4，珋x ± s)
瘤株 浓度(μg /mL) 抑制率(%) IC50(μg /mL)
18． 75 4． 00 ± 3． 0
37． 5 5． 07 ± 2． 9
B － 16 75 19． 31 ± 2． 9 142． 85 ± 8． 1
150 55． 53 ± 2． 6
300 81． 24 ± 2． 3
18． 75 16． 08 ± 2． 8
37． 5 22． 60 ± 2． 7
Colo320 75 66． 72 ± 2． 2 47． 81 ± 3． 5
150 95． 32 ± 2． 1
300 98． 53 ± 1． 7
18． 75 20． 58 ± 2． 6
37． 5 31． 56 ± 2． 5
SGC － 7901 75 72． 40 ± 2． 0 44． 75 ± 4． 5
150 88． 76 ± 1． 8
300 98． 94 ± 1． 6
18． 75 13． 14 ± 2． 5
37． 5 55． 43 ± 1． 9
PC － 3 75 78． 70 ± 1． 6 43． 15 ± 5． 3
150 86． 40 ± 1． 2
300 93． 47 ± 1． 1
18． 75 25． 51 ± 2． 7
37． 5 40． 77 ± 2． 5
HL60 75 53． 28 ± 2． 5 43． 08 ± 4． 7
150 92． 61 ± 2． 2
300 94． 68 ± 2． 1
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2021
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表 3 杠板归乙醇残留物对肿瘤细胞的
抑制作用(n = 4，珋x ± s)
瘤株 浓度(μg /mL) 抑制率(%) IC50(μg /mL)
18． 75 1． 90 ± 3． 1
37． 5 12． 93 ± 2． 8
B － 16 75 16． 17 ± 2． 6 137． 36 ± 7． 6
150 65． 97 ± 2． 1
300 76． 72 ± 1． 9
18． 75 18． 50 ± 2． 9
37． 5 27． 55 ± 2． 8
Colo320 75 47． 03 ± 2． 1 97． 65 ± 6． 4
150 52． 41 ± 2． 2
300 77． 48 ± 1． 8
18． 75 29． 98 ± 3． 0
37． 5 43． 44 ± 2． 7
SGC － 7901 75 51． 98 ± 2． 5 63． 49 ± 5． 4
150 62． 85 ± 2． 2
300 74． 29 ± 2． 2
18． 75 18． 83 ± 2． 8
37． 5 21． 85 ± 2． 6
PC － 3 75 32． 86 ± 2． 2 120． 12 ± 7． 8
150 57． 22 ± 1． 8
300 72． 13 ± 1． 5
18． 75 7． 42 ± 3． 3
37． 5 16． 34 ± 3． 0
HL60 75 30． 93 ± 2． 8 152． 84 ± 4． 6
150 49． 02 ± 2． 5
300 68． 35 ± 2． 3
表 4 杠板归水提物对肿瘤细胞的抑制作用(n = 4，珋x ± s)
瘤株 浓度(μg /mL) 抑制率(%) IC50(μg /mL)
18． 75 14． 74 ± 2． 7
37． 5 16． 09 ± 2． 8
B － 16 75 19． 98 ± 2． 5 493． 69 ± 8． 4
150 22． 25 ± 2． 3
300 54． 95 ± 2． 0
18． 75 6． 54 ± 3． 2
37． 5 17． 08 ± 2． 9
Colo320 75 31． 47 ± 2． 7 186． 40 ± 7． 3
150 42． 17 ± 2． 4
300 60． 64 ± 2． 3
18． 75 4． 27 ± 3． 2
37． 5 12． 38 ± 3． 0
SGC － 7901 75 32． 54 ± 2． 7 122． 56 ± 5． 5
150 57． 37 ± 2． 4
300 80． 67 ± 2． 2
18． 75 2． 46 ± 3． 5
37． 5 17． 53 ± 3． 0
PC － 3 75 23． 19 ± 2． 8 196． 97 ± 4． 8
150 40． 87 ± 2． 5
300 58． 94 ± 2． 3
18． 75 4． 27 ± 2． 9
37． 5 8． 41 ± 2． 8
HL60 75 29． 07 ± 2． 6 195． 49 ± 2． 8
150 48． 65 ± 2． 3
300 55． 23 ± 2． 1
表 5 杠板归乙酸乙酯提取物对小鼠 S － 180 肉瘤的抑制作用(珋x ± s)
分组
给药
方式
剂量
(mg /kg)
小鼠数量
初始 最终
小鼠体重(g)
初始 最终
平均瘤
重(g)
抑制率
(%)
模型组 ig． － 10 10 21． 2 ± 1． 0 27． 7 ± 1． 9 1． 30 ± 0． 20 －
CTX对照组 ip． 25 10 10 20． 9 ± 0． 9 21． 5 ± 2． 0 0． 62 ± 0． 17 52． 31＊＊
乙酸乙酯提取物给药组(低剂量) ig． 50 10 10 21． 3 ± 1． 1 27． 7 ± 2． 1 0． 73 ± 0． 21 43． 85*
乙酸乙酯提取物给药组(中剂量) ig． 100 10 10 21． 2 ± 0． 9 28． 0 ± 1． 7 0． 64 ± 0． 28 50． 77＊＊
乙酸乙酯提取物给药组(高剂量) ig． 200 10 10 21． 5 ± 1． 1 27． 8 ± 1． 9 0． 54 ± 0． 24 58． 46＊＊
注:与模型组比较，* P ＜ 0． 05，＊＊P ＜ 0． 01。
4 讨 论
杠板归作为我国一味具有很高药用价值的清热解毒中
草药，在民间广泛使用，并在肿瘤的治疗中已有较为悠久的
历史并已广泛应用。本次研究首次采用 MTT 法系统地体
外考察了杠板归提取物对多种肿瘤细胞的增殖抑制作用。
结果表明杠板归提取物对多种肿瘤细胞有较好的生长抑制
作用，但药物对各种细胞的敏感性不同，其中对 Colo320、
PC － 3、HL60、SGC － 7901 细胞抑制力较强，对 B － 16 抑制
力较弱;对同一肿瘤细胞而言，乙酸乙酯部位的抑制作用最
高。说明杠板归抗肿瘤活性成分具有中等极性强度。
体内试验是对体外试验的验证，由于综合了机体吸收、
分布、代谢、排泄的影响，所以较体外试验更为客观，本次研
究选取了小鼠 S － 180 肉瘤作为研究对象。实验表明，杠板
归乙酸乙酯提取物对其具有较好的抑制作用，并呈现明显
的剂量 －效应关系。实验结果还显示，各组小鼠体重在实
验结束时均有增加，但与模型组相比，CTX组小鼠的体重增
加最慢，这与 CTX的免疫抑制和毒性作用有关。而其他各
组小鼠体重与模型组相比没有显著差异，因为对乙酸乙酯
提取部位值得进一步跟踪开发。
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