全 文 ：宁　蕾 ,邓业成 ,骆海玉 ,等.粪箕笃提取液抑菌活性初步研究 [ J].江苏农业科学 , 2011(1):166-168.
粪箕笃提取液抑菌活性初步研究
宁　蕾 , 邓业成 , 骆海玉 , 秦　卉
(广西师范大学生命科学学院 /药用资源化学与药物分子工程教育部重点实验室 ,广西桂林 541004)
　　摘要:采用生长速率法测定了粪箕笃各部位提取物对柑橘疮痂病菌 、柿角斑病菌 、梨锈病菌 、西瓜枯萎病菌 、稻瘟
病菌 、甘蔗凤梨病菌和玉米炭疽病菌 7种植物病原真菌的抑菌活性。结果表明:质量浓度为 10 g/L时 , 根提取液对梨
锈病菌 、西瓜枯萎病菌和玉米炭疽病菌有明显的抑菌活性 , 72 h的抑菌率分别为 100.00%、95.45%和 92.04%;茎提
取液对玉米炭疽病菌也有明显抑菌活性 , 72h的抑菌率为 94.89%;叶提取液对 7种病菌的抑菌活性均较低。根提取
液对梨锈病病菌 、柿角斑病菌 、甘蔗凤梨病菌 、米炭疽病菌和西瓜枯萎病菌的 EC50分别为 1.76、 3.37、 1.76、 1.18、
1.36g/L,茎提取液对梨锈病病菌 、甘蔗凤梨病菌 、玉米炭疽病菌和西瓜枯萎病菌的 EC50分别为 2.86、 2.76、 1.24、
1.80g/L。用液 -液萃取法对粪箕笃根提取物进行了初步分离 , 发现活性物质主要存在于正丁醇和水萃取物中 , 活性
成分是极性较大的物质。
　　关键词:粪箕笃;抑菌活性;植物病原真菌
　　中图分类号:S567.230.1　　文献标志码:A　　文章编号:1002-1302(2011)01-0166-02
收稿日期:2010-04-06
基金项目:药用资源化学与药物分子工程教育部重点实验室资助项
目(编号:桂科能 07109001-11);广西自然科学基金(编号:桂科
自 0991097)。
作者简介:宁　蕾(1985—),女 ,广西南宁人 ,硕士研究生 , 主要从事
天然产物研究。 E-mail:ninglei8502@yahoo.com.cn。
通信作者:邓业成 ,博士 ,教授 , 主要从事生物源天然产物农药研究。
E-mail:dyecheng@ 163.com。
　　防己科千金藤属植物粪箕笃 (StephanialongaLour.)为
多年生草质藤本 ,产于云南东南部 、广西 、广东、海南 、福建和
台湾 ,生于灌丛或缘林 [ 1] 。粪箕笃味辛 , 性平 , 具有清热解
毒 、利湿通便 、消疮肿等功效 [ 2 ] ,民间常用其治疗毒蛇咬伤 。
由于其具清热利尿之功效 ,国内医学研究领域集中于粪箕笃
在治疗肾病及慢性中耳炎方面的应用 ,尤其对慢性中耳炎的
治疗效果良好 [ 3 -4 ] 。粪箕笃全株的化学成分已有研究报
道 [ 5 -6] ,其次生代谢物对小菜蛾具有较强的干扰作用 [ 7 -8 ] ,其
非生物碱对动物致病菌有明显的抑制作用 [ 9 ] ,但其对植物致
病菌的抑菌活性方面还没有报道 。本研究以柑橘疮痂病等 7
种植物重要致病菌为供试菌 ,分别测试粪箕笃植株各部位提
取液的抑菌活性 ,并对其抑菌活性物质进行了初步分离 ,为粪
箕笃植物源农药的开发与利用奠定基础 。
1　材料与方法
1.1　材料
1.1.1　供试植物　粪箕笃植株样品于 2009年 9月采于桂林
郊区石灰岩山地 。
1.1.2　供试病原菌　柑橘疮痂病菌(ElsinoefawcettiiBitane.
etJenkins)、柿角斑病菌(CercosporakakiEll.etEv)、梨锈病菌
(GymaosporangiumharaeanumSyd.)、西瓜枯萎病菌(Fusarium
oxysporumf.sp.Niveum)、稻瘟病菌(PyraculariaoryzaeCav)、
甘蔗凤梨病菌 [ Ceratocystisparadoxa(Dade)Moreau.] 、玉米炭
疽病菌 [ Coletotrichumgraminicoia(Ces.)Wilson]等病原真菌
均从田间采集于植物发病部位 ,经室内马铃薯蔗糖琼脂培养
基(PDA)分离纯化培养获得 。
1.2　方法
1.2.1　提取液制备　采用有机溶剂冷浸提取法对粪箕笃植
株各部位进行提取 ,用植物干粉 5倍量的甲醇浸泡 24 h,过
滤 ,重复提取 3次 ,合并 3次提取液 ,减压浓缩 ,得提取液浸
膏 ,称重 ,保存于冰箱中备用 。
1.2.2　抑菌活性测定　采用生长速率法测定 [ 10] 。溶解提取
液浸膏的溶剂为体积比为 1 ∶1的丙酮 -水混合溶剂 ,配成质
量浓度为 10 g/L的药液(毒力测定时 ,用丙酮和水分别配制
成 7个系列浓度的药液)备用 。每个处理设 3个重复 。在洁
净操作台上 ,用移液枪取 1 mL药液(对照用相同体积的体积
比为 1 ∶1的丙酮 -水混合液代替)加入直径为 9 cm的无菌
培养皿中 ,再加入 9 mLPDA热培养基 ,混匀 ,冷却凝固后即
制成带毒培养基 。真菌用直径 0.4 cm的打孔器在培养好的
菌落边缘切取菌饼 ,并用接种针将菌饼接在带毒培养基表面 ,
使菌饼带有菌丝的一面朝下 ,每个培养皿接 3个菌饼 。最后
将培养皿放入温度为(28±1)℃、相对湿度为 65% ～ 75%的
培养箱中培养 ,培养 72 h后用十字交叉法测量菌落直径 ,按
下式计算抑菌率:
菌落增长直径(cm)=测量直径(cm)-0.4(cm)
抑菌率 =(对照菌落直径 -处理菌落直径)÷对照菌落
直径 ×100%
测定各个质量浓度的抑菌率 ,用最小二乘法求出毒力回
归方程 、有效中浓度 EC50 ,最后求出相对毒力 。
1.2.3　抑菌活性成分初步分离 　采用液 -液萃取法对粪箕
笃植株甲醇提取液的有效成分进行初步分离 。称取提取液浸
膏 20g,溶解于 100mL蒸馏水中 ,依次用等体积的石油醚 、乙
酸乙酯 、正丁醇各萃取 3次 ,合并 3次萃取液 ,减压浓缩 ,得
各溶剂萃取物 。然后通过抑菌活性测定各萃取物的活性 。
2　结果与分析
2.1　粪箕笃植株不同部位提取液对病原真菌的抑制活性
采用生长速率法测定了粪箕笃各部位提取液对柑橘疮痂
—166— 江苏农业科学　2011年第 1期
DOI :10.15889/j.issn.1002-1302.2011.01.081
病病菌等 7种植物病原真菌的抑菌活性 ,结果见表 1。粪箕
笃根提取液对梨锈病菌 、西瓜枯萎病菌和玉米炭疽病菌有很
高的抑菌活性 ,提取液质量浓度为 10 g/L时 ,抑菌率分别为
100.00%、95.45%和 92.04%;对甘蔗凤梨病菌和柿角斑病
菌的抑菌活性次之 ,抑菌率分别为 76.31%和 62.23%;对稻
瘟病菌和柑橘疮痂病菌的抑制活性较低 , 抑菌率分别为
43.19%和 42.74%。茎提取液对玉米炭疽病菌有较高的抑制
活性 ,抑菌率为 94.89%;对梨锈病菌 、西瓜枯萎病菌和甘蔗
凤梨病菌的抑菌活性次之 ,抑菌率分别为 66.83%、69.62%
和 71.01%;对柑橘疮痂病菌 、柿角斑病菌和稻瘟病菌的抑菌
活性较低 ,抑菌率分别为 28.95%、49.00%和 41.21%。叶提
取物对 7种供试病原菌的抑制活性均较低 。
表 1　粪箕笃植株各部位甲醇提取物对 7种病原真菌菌丝的抑制活性
供试菌 72h抑菌率(%)
根提取液 茎提取液 叶提取液
柑橘疮痂病菌 42.74±1.00a 28.95±1.48c 35.92±1.25b
柿角斑病菌 62.23±0.87a 49.00±0.31b 35.91±0.94c
梨锈病菌 100.00±0.00a 66.83±1.10b 6.70±2.75c
西瓜枯萎病菌 95.45±2.62a 69.62±2.69b 22.95±0.69c
稻瘟病菌 43.19±1.18b 41.21±2.42b 59.28+2.70a
甘蔗凤梨病菌 76.31±1.09a 71.01±1.84a 15.89±2.02b
玉米炭疽病菌 92.04±1.19a 94.89±2.89a 32.43±1.97b
　　注:提取液质量浓度为 10g/L;抑菌率数据为 3次重复平均值;
每行数据后字母相同者 ,表示在 5%水平上差异不显著(DMRT)。
2.2　粪箕笃根和茎提取物对几种植物病原真菌的毒力
从表 1结果可以说明粪箕笃的活性部位是根和茎。为进
一步明确其抑菌效果 ,分别测定了粪箕笃根和茎提取液对几
种病原菌的毒力 ,结果见表 2。粪箕笃根提取物对梨锈病病
菌 、柿角斑病菌 、甘蔗凤梨病菌 、玉米炭疽病菌和西瓜枯萎病
菌的 EC50分别为 1.76、3.37、1.76、1.18、1.36 g/L;茎提取物
对梨锈病病菌 、甘蔗凤梨病菌 、玉米炭疽病菌和西瓜枯萎病菌
的 EC50分别为 2.86、2.76、1.24、1.80 g/L。
表 2　粪箕笃根和茎甲醇提取液对几种植物病原真菌菌丝的毒力
提取液 供试菌 毒力回归方程 EC50(95%置信限)(g/L)
相对
毒力
根提取液 梨锈病菌 y=4.41+2.39x 1.76(1.07 ～ 2.46) 1.91
柿角斑病菌 y=4.75+1.04x 3.37(2.30 ～ 4.44) 1.00
甘蔗凤梨病菌 y=4.75+1.04x 1.76(1.27 ～ 2.24) 1.91
玉米炭疽病菌 y=4.68+2.37x 1.18(0.83 ～ 1.54) 2.86
西瓜枯萎病菌 y=4.42+0.63x 1.36(0.90 ～ 1.83) 2.48
茎提取液 梨锈病菌 y=4.51+1.06x 2.86(2.07 ～ 3.67) 1.18
甘蔗凤梨病菌 y=4.50+1.96x 2.76(1.84 ～ 3.70) 1.22
玉米炭疽病菌 y=4.29+1.61x 1.24(0.88 ～ 1.58) 2.72
西瓜枯萎病菌 y=4.83+1.86x 1.80(1.26 ～ 2.34) 1.87
2.3　粪箕笃根提取液各种溶剂萃取物的抑菌活性
为了明确粪箕笃提取液的抑菌活性成分 ,采用有机溶剂
液 -液萃取法对粪箕笃根甲醇提取液的有效成分进行了初步
分离 ,将提取物初步分为石油醚萃取物 、乙酸乙酯萃取物 、正
丁醇萃取物和水萃取物 4个部分 ,并测定了各种溶剂萃取物
的抑菌活性 ,结果见表 3。萃取物质量浓度为 5g/L时 ,正丁
表 3　粪箕笃根的各种溶剂萃取物对梨锈病菌的抑菌活性
萃取物 抑菌率(%)
石油醚萃取物 25.26±0.60c
乙酸乙酯萃取物 60.85±1.19b
正丁醇萃取物 93.81±0.48a
水萃取物 93.11±0.20a
　　注:萃取物质量浓度为 5g/L;抑菌率数据为 3次重复平均值;每
列数据后小写字母不同者 ,表示在 5%水平上差异显著(DMRT)。
醇萃取物和水萃取物抑菌活性较高 ,抑菌率分别为 93.81%
和 93.11%。说明粪箕笃抑菌活性成分主要存在于正丁醇萃
取物和水萃取物中 ,活性成分是极性较大的物质 。
2.4　粪箕笃正丁醇萃取物柱层析分离各流分的抑菌活性
表 3试验结果表明 ,正丁醇萃取物的抑菌活性最高 ,所以
选用正丁醇萃取物做进一步柱层析分离 。将萃取物溶解于蒸
馏水中 ,过 D101大孔树脂层析柱 ,去掉氨基酸 、盐类 、色素等
杂质 ,将洗脱液减压浓缩 ,再过 C-18反相硅胶柱(洗脱剂为
甲醇 ∶水 =1∶1), 10 mL为 1个流分 ,合并相似流分 。选用
梨锈病菌为供试菌 ,测定了各流分的抑菌活性 ,结果见表 4。
从表 4中可见 ,样品质量浓度为 1 g/L时 , 2 ～ 3流分的抑菌率
为 100%,其余流分的抑菌活性均较低 ,说明抑菌活性物质存
在于 2 ～ 3流分中 。由于 2 ～ 3流分量较少 ,所以未能进一步
分离 。
表 4　粪箕笃正丁醇萃取物柱层析各流分的抑菌活性
流分 抑菌率(%)
2 ～ 3 100±0.00a
4 ～ 5 51.75±1.37b
8 ～ 10 38.44±1.37c
15 ～ 20 25.91±0.12d
21 ～ 35 9.86±1.85e
　　注:流分质量浓度为 1g/L;抑菌率数据为 3次重复平均值;每列
数据后小写字母不同者 ,表示在 5%水平上差异显著(DMRT)。
3　结论与讨论
通过测定粪箕笃植株各部位提取物对植物病原真菌的抑
菌活性 ,发现粪箕笃的抑菌活性物质主要分布在根和茎中 。通
过液 -液萃取法对粪箕笃甲醇提取物作初步分离并进行活性
追踪 ,发现活性物质在正丁醇和水萃取物中 ,由此可见活性物
质的极性较大 。粪箕笃对柑橘疮痂病菌等 7种植物病原菌均
有抑制活性 ,根和茎提取物的抑菌活性比叶提取物高。据报
道 ,粪箕笃对动物致病菌也有抑制活性 [9 ] ,说明该植物活性物
质具有广谱抗菌作用 。其活性成分有待进一步分离和鉴定 ,同
时其抑菌作用机制也需作进一步研究 。粪箕笃分布广泛 ,生长
旺盛 ,少有人采收 ,因此资源比较丰富 ,在植物源农药和医药领
域具有较好的开发与应用前景 ,值得进一步深入研究 。
参考文献:
[ 1]刘玉壶.中国植物志 [ M] .北京:科学出版社 , 1996, 30(1):51-
52.
[ 2]江苏新医院.中药大辞典:下册 [ M] .上海:上海人民出版社 ,
1977:2421.
(下转第 168页)
—167—宁　蕾等:粪箕笃提取液抑菌活性初步研究
刘　莉 ,赵家升.南涧地区实蝇类害虫监测 [ J] .江苏农业科学 , 2011(1):168-169.
南涧地区实蝇类害虫监测
刘　莉 , 赵家升
(保山学院生物与化学系 ,云南保山 678000)
　　摘要:2007— 2008年连续 2年采用性诱剂诱捕法 ,对云南省南涧地区实蝇类害虫进行了监测调查研究 ,初步查明
实蝇种类共有 8种 ,其中优势种为黑漆实蝇和橘小实蝇。通过对 2种实蝇优势种种群动态分析表明 ,实蝇在南涧地区
为季节性发生 ,冬季诱捕不到实蝇 ,种群高峰期在 7— 9月。
　　关键词:实蝇;优势种;南涧
　　中图分类号:S431　　文献标志码:A　　文章编号:1002-1302(2011)01-0168-02
(上接第 167页)
[ 3]韦少妍.慢性肾功能衰竭的灌肠治疗与护理 [ J] .现代中西医结
合杂志 , 2005, 14(6):801, 836.
[ 4]苏毓梅.粪箕笃液治疗慢性化脓性中耳炎 [ J].人民军医 , 1979
(9):71.
[ 5]劳爱娜 ,高耀良 , 唐宗俭 ,等.粪箕笃生物碱成分的研究 [ J].化
学学报 , 1982, 40(11):1038.
[ 6]邓京振 ,赵守训.粪箕笃地上部分非碱性成分的分离和鉴定 [ J].
中国药科大学学报 , 1993, 24(2):73-75.
[ 7]彭跃峰 ,庞雄飞.非嗜食植物次生物质对小菜蛾实验种群的干扰
作用[ J] .湖北植保 , 2004(3):1-3.
[ 8]彭跃峰 ,庞雄飞.九种植物抽提物对小菜蛾产卵驱避作用的研究
[ J] .山东农业科学 , 2004(4):40-42.
[ 9]林启云 ,谢金鲜.粪箕笃利尿、镇静及镇痛作用研究 [ J].广西中
医药 , 2001, 24(3):43-45.
[ 10]陈年春.农药生物测定技术 [ M] .北京:北京农业大学出版社 ,
1990:66-68.
　　实蝇是指实蝇科中的一类昆虫 ,主要分布于除北极和南
极外世界大部分地区 。实蝇是一类世界性害虫 ,严重危害水
果和蔬菜生产 。因此 ,实蝇的不少种类是国际上的重要检疫
性害虫 [ 1 -2] 。
南涧位于云南省西部 ,地处横断山脉南缘纵谷区 ,处于北
纬 25°03′、东经 100°32′,海拔 1 381 m,年平均气温 18.9 ℃,
年平均降水量 709.3 mm,属低纬山地季风气候 。近几年来南
涧地区实蝇发生严重 ,对当地果蔬生产影响很大 。笔者于
2007年和 2008年连续 2年对南涧地区的实蝇类害虫进行了
调查和研究 ,旨在探明南涧地区实蝇的种类 、数量 、寄主及危
害情况 ,为实蝇类害虫的防除提供科学依据。
1　材料与方法
1.1　材料
1.1.1　外激素诱剂种类　橘小实蝇性诱剂(诱虫醚)methyl-
eugenol(简称 Me),监测对象是橘小实蝇(Bactroceradorsalis)
及相关实蝇种类 [ 3] 。瓜实蝇性诱剂 (诱蝇酮)cuelure(简称
Cue),监测对象是瓜实蝇 (Bactroceracucurbitae)及相关实蝇
种类 [ 3 ] 。
1.1.2　诱捕器制作　用容积为 1.5 L的矿泉水瓶或者饮料
瓶改装制作 。由瓶盖 、瓶身(高 29.0 cm、直径 8.0cm)、挂钩 、
诱芯和实蝇入口 5个部分组成 。取干净的饮料瓶 ,在接近瓶
底处开 1个长宽均为 3.0 cm的方形小门 ,便于将诱到的雄虫
收稿日期:2010-04-22
基金项目:国家自然科学基金(编号:30260023);国家 “ 973”重点基
础研究发展计划(编号:2003CB415100)。
作者简介:刘　莉(1973—),女 ,云南保山人 ,硕士 ,副教授 ,主要从事
昆虫生态学研究。 E-mail:liuli0875@ 126.com。
取出;钻通瓶盖 ,穿入铁丝制成的挂钩 ,上端可悬挂于树枝上 ,
下端挂诱芯 ,并使诱芯位于瓶的中央;在瓶身 1 /3和 2 /3处的
相对瓶壁上各开直径为 1.0 cm的圆孔 ,便于实蝇进入和诱剂
气味随瓶内空气对流散发 。诱捕器做好后 ,再用棉花做成可
吸持诱剂的诱芯 [ 4] 。
1.2　调查方法
把加有诱剂的诱捕器 (为起毒杀作用 , 诱剂中均加入
0.1%的马拉硫磷农药)用铁丝挂在离地面 1.5m高的树枝上
(诱捕器被固定 ,不随风晃动 ,不受树叶遮蔽 ,并防止受阳光
暴晒 ,通风较好)。在村寨果园和蔬菜地设置 2个监测点 ,每
个监测点投放 4个诱捕器 ,每种诱剂 2次重复 ,诱捕器间距
20 m,每个月添加 1次诱剂和农药 ,每半个月收集记录 1次各
诱器内虫数 ,并逐一鉴定实蝇种类 。在此期间 ,到果园抽样调
查 ,记录实蝇危害情况及寄主种类等 。
2　结果与分析
2.1　实蝇种类及数量
通过连续 2年的调查和监测 ,在南涧共监测诱捕到实蝇
417头 ,初步鉴定实蝇种类共有 8种 [ 5 -6] (表 1),其中南涧果
实蝇为新记录种 。从数量上看 ,黑漆实蝇 (占 58.75%)明显
多于其他种 ,其次是橘小实蝇(占 24.70%),再次是泰实蝇
(占 9.60%),而南瓜实蝇 、番石榴实蝇 、黑纹实蝇 、三点棍腹
实蝇 、南涧果实蝇很少 ,共占 7.98%。将个体捕获量占总捕
获量比例大于 10%的实蝇视为优势种 ,南涧实蝇的优势种为
黑漆实蝇和橘小实蝇 。
2.2　实蝇优势种种群动态
前面研究表明 ,南涧实蝇优势种是黑漆实蝇和橘小实蝇 ,
下面分别对这 2种实蝇种群动态进行探讨 。
—168— 江苏农业科学　2011年第 1期