全 文 ：第 28 卷第 1期
2以珍年 1月 分析试验室 Chj~ J6u n间 fo A I词y s is 肠场旧 ory
V o l
.
28
.
No
2( X刃 一 1
H P L C测定河套大黄中的土大黄昔含量
陈志强 带 ’ ,2 , 李贞景 , , 傅志良’ , 王昌禄 ,
( 1
. 天津科技大学食品工程与生物技术学院 , 天津 3X( 抖57 ;
2
. 天津市尖峰天然产物研究开发有限公司 , 天津 3X( 只57 )
摘 要 : 从河套大黄中分离纯化出活性成分土大黄普 , 作为 自制的标准品 , 利
用 K五” l las i尹 lC : ( 25 0 lnI x 4
.
6 lnI 1
.
d
.
,
5 脚 )反相色谱柱 , 以 V( 甲醇 ) : V( 乙
睛 ) : V( 水 ) 二 35 : :5 印 为流动相 , 以 320 ln 为检刚波长 , 对河套大黄中土 大黄
普进行浏定。 土 大黄普在 .0 427 一 4
.
1卯 滩 范围内与峰面积呈 良好线性关系
(
r 二 0
. 奥为4 ) , 平均回收率为 9 . 12 % 。 该方法为河套大黄的质量控制莫定 了基
础 。
关键词 : 河套大黄 ; 土大黄普 ; 高效液相色谱
中圈分类号 : O的 7 . 7 文献标识码 : A 文章编号 : 1戊仆价 20 (2X( 为 )01 一 101 一 03
河套大黄又称土大黄 , 它是寥科大黄属波叶
组植物瓜卿助油娜 彻奴吧几把 C . Y . hC egn et c . .T
Kao
.的根和根茎 , 主要分布于山西 、 陕西 、 宁夏 、
甘肃等地 。 河套大黄主要含蕙酿类成分 , 同时含
有多经基类化合物 ( P Hs )土大黄昔 (而脚 n t ic in ) 。
近年的研究发现 PHS类成分具有抗氧化川 、 抗病
毒 2j[ 、 抗肿瘤 31[ 、 抗血栓及抗过敏 [’] 等作用 。 为了
深人研究大黄的活性成分 , 开发 PHS新药 , 需要
制备大量的 H I S标准品 , 并对大黄中的 P HS进行
测定。 因此 , 研究 PHS标准品的制备及其测定方
法具有重要的意义 。 本文从河套大黄中分离纯化
出土大黄昔标准品 , 并对其结构进行了鉴定 ; 利
用建立的高效液相色谱法对河套大黄进行了测定。
1 土大黄昔标准品的制备
1
.
1 土大黄昔的分离纯化
取河套大黄根茎粉 , 加 95 % 乙醇回流提取 3
次 , 过滤 , 合并滤液 , 减压浓缩 , 得大黄总浸膏。
加水分散 , 过滤 , 沉淀加人饱和碳酸钠水溶液 , 加
热 , 过滤 , 滤液调 PH 至 7 , 过滤 , 沉淀以 95 % 乙醇
充分溶解 , 加适量 C a C12 固体 , 以 N aO H水溶液调
声 为 8 一 9 , 静置过夜 , 过滤 , 滤液浓缩 , 以丙酮 -
水 (2 + 3) 重结晶 , 得土大黄昔标准品 。
1
.
2 土大黄昔的结构鉴定
分离纯化得到的物质为白色针状结晶 , 熔点
为 28 一 23 0 ℃ , 硅胶薄层板上紫外灯下照射呈强
蓝紫色荧光 , Miol sc h反应阳性 。 vu 几黔 /unI : 2 1 ,
305
,
3解 ; 质谱分析测定得相对分子质量为 42() ,
推测分子式为 q l场 仇。 同时 ’ HNMR和 ` , CNM R数
据与文献报道的数据一致困 。 化合物土大黄昔鉴
定为 3 , 3 ` , 5一 苗 hy如 x y并 , . m e ht y 10材s t i阮-en 3一0 一卜D -
乡u c OS id e , 其结构式如图 l 。
O C H ,
日一 D 一 ig u c o s e一 0
图 l 土大黄普结构式
珑 . 1 5加此加此 度 比叩佣次如
1
.
3 土大黄昔的纯度分析
利用建立的高效液相法对自制的土大黄昔标
准品进行纯度分析 , 其色谱图见图 2 ( a ) , 色谱数
据见表 1。
收稿日期 : 么刃7一 1压 1;6 修订 日期 : 加佣刁 1拐
基金项目 : 天津科技大学引进人才科研启动基金 (么刃6又 39 )项目资助
作者简介 : 陈志强 ( 1叨 2 一 ) , 男 , 副教授 ; -E m` 】: 囚v c hen @ ust .咖 . cn
DOI : 10. 13595 /j . cnki . i ssn1000 -0720. 2009. 0025
第 28卷第 1期刀 X旧年 1月 分析试验室伽 ~ lou n回 o fA闹师 , 助加m加 yr
V o l
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28
.
N。
2X(刃 一 1
表 l 自制土大黄普标准品的 Hr 比数据
1袖 . I Q如面圈姻笋咖血山加 健 由即佣次加 s恤回 . 川
峰号 保留时间
t l而 n 峰高 峰面积
l 2
.
573
6
.
48 2
7
.砚 3
4 10
.
4 15
54
.
28 6
45
.
7 89
326
. 驯石
125 576
.
133
5 15
.
2X()
5 18
.叹刃
567 2
.
720
29 8( y7 7 2
.
25
含量
w /%
0
.
0 17
0
.
0 17
0
.
1如
男 . 7 6
2 土大黄昔的测定
2
.
1 仪器与试荆
从恤te o 6 X〕E 高效液相色谱仪 , 配有 卯6 型
PDA 紫外检测器 , 71 7禅us 自动进样系统 ; iM l e n i -
朋6 2色谱管理系统 ; 甲醇 、 乙睛为色谱纯 ; 超纯
水 ; 其余试剂均为分析纯 。
2
.
2 对照品溶液的制备
准确称取土大黄昔标准品 5 . o mg , 置于 or mL
容量瓶中 , 以甲醇定容 , 作为对照品溶液。
2
.
3 样品溶液的制备
准确称取药材 1 . 0 9 , or 倍量甲醇提取 3 次 ,
每次 Z h , 过滤 , 滤渣用少量甲醇洗涤 3次 , 合并
滤液和洗液 , 减压浓缩 , 回收甲醇。 残渣加甲醇溶
解 , 转移至 1加 mL 容量瓶中 , 用甲醇稀释至刻度 ,
摇匀 , 备用 。 进样前 , 根据不同浓度需要稀释至不
同倍数 , 并用 0 . 45 脚 滤膜过滤 , 取滤液进行测
定。 色谱图见图 2 。
一50 1( a) 15 0 1(b )
> 10遏
田钾 50
七 10月
日却 5 0
流动相 : V( 甲醇) : V( 乙睛 ) : V( 水 ) 二 35 : 5 :印 ; 紫外
检测波长 : 320 lun ; 流速 : 1 1111了而 n ; 温度 : 25 ℃ 。
3 结果与讨论
3
.
1 线性范围
准确称取土大黄昔标准品 10 . o mg , 置 50 mL
容量瓶中 , 加甲醇溶解并稀释至刻度 , 摇匀 , 再准
确吸取 0 . 1 , 0 . 2 , 0 . 5 , 1 , Z mL 置 or mL 容量瓶中 ,
甲醇稀释至刻度 , 摇匀 , 分别进样 or 沁 , 按照上
述色谱条件测定 , 以峰面积为纵坐标 , 进样量为
横坐标作标准曲线 , 得回归方程为 Y 二 0 , 38 +
45 72
.
30 m
, ; 二 0
. 臾刃4 。 结果表明 , 进样量在 0 . 42 7
一 4
.
190 鸿 峰面积与进样量呈良好线性。
3
.
2 精密度试验
对同一浓度对照品溶液 , 分别进样 5次 , 每次
10 沁 , 测得土大黄昔含量 , 计算相对标准偏差
RSD 为 0 . 3% , 表明仪器精密度良好。
3
.
3 稳定性试验
取同一样品溶液分别于 。 、 4 、 12 、 24 、 48 h 时
进样 10 泌 , 峰面积基本不变 , 咫D < 3 . 0 % 。
3
.
4 回收率试验
准确称取含量已知的大黄样品 5 份 , 各 0 . 25
g
, 分别准确加人对照品 1 . o mg , 按样品溶液的制
备项下操作 , 在上述液相条件下进行 HP扰 分析。
每个样品测定 3次 , 根据峰面积计算平均回收率 ,
其结果为 9 . 12 % , sR D为 2 . 6% 。
3
.
5 样品分析
河套大黄药材购自5个不同产地的药材市场 ,
按 2 . 3项下方法制备供试品溶液 , 在上述色谱条
件下进行样品分析 , 用外标法计算 , 结果见表 2o
。渔思in 15 20 浮二i。进15
图 2 离效液相色讲圈
珑 .2 0 助因回娜” 幽 了奴 血卿成山 劝犯面川 (a) , het
. 傅触 ( b )
表 2 不同产地河套大黄药材土大黄普含 t 测定结果
,伪b t Z 众奴六苗. 心砚 代 , 山 s 成 阳哪肠 加团 , 田晚民磁 p州卜
d u曲吧 助以 .
编号 产地 w 土大黄普 /(州 g )
6 1
.
02
尹OQùō、4762研3( a) 土大黄昔标准品 ; ( b) 样品
V (甲醇 ) : V (乙睛 ) : V(水 ) 二 ( 35 : 5 :印 ) , 320 nm , 1 l l l l J而 n
25 ℃
甘肃兰州
宁夏固原
陕西西安
山西大同
山西太原
2
.
4 IH兀C检测条件
色谱柱 : 大连国家色谱研究分析中心 K八 〕一 4
ams il爪 e
l:分析柱 ( 25 0 nu x 4
,
6 rnm 1
.
d
.
,
5 脚 ) ;
一 102 一
结论
在分离土大黄昔时 , 经过加水过滤 , 加人饱
第 28卷第 1期
2 X (刃年 l月 分析试验室Ci h nse lo u n过 o fsA词 ysi s肠场 a rto r yo l v
.
28
.
o N
.
l
2以为一 1
和碳酸钠水溶液加热过滤 , 滤液调声至 7过滤等
处理能够除去河套大黄粗提物中所含的大部分杂
质 ; 后期加人适量氯化钙固体 , 溶液调 pH 至 8 -
9
, 静置过夜 , 过滤 , 其目的是除去河套大黄提取
物中残留的蕙醒类化合物。 原理是葱醒类化合物
与钙离子在微碱性条件下会形成葱醒钙络合物 ,
该络合物不溶于水及有机溶剂 , 可以过滤除去 ,
这样滤液中土大黄昔的含量相对较高 , 结晶后即
可得到土大黄昔标准品。
本文建立了 HP比 测定河套大黄中土大黄昔
的方法 , 并对 5个不同产地的河套大黄进行了测
定 , 结果表明 5个不同产地的河套大黄中土大黄
昔的质量分数均在 6 % 以上 , 这为河套大黄中土大
黄昔标准品的制备 、 活性研究及其产业化开发提
供了依据 。
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