全 文 ：[收稿日期 ] 　2007 - 06 - 20
[作者简介 ] 　王秀冬 (1966 - ), 女 ,山东省菏泽市人 , 博士 ,副
研究员 , Tel:010-66931425
研究简报
HPLC测定河套大黄中土大黄苷的含量
王秀冬 , 毕建进 , 黄丽华 , 卢兖伟 , 孙仲怡 , 吴祖泽
(军事医学科学院放射与辐射医学研究所 ,北京　100850)
　　河套大黄为蓼科植物河套大黄 Rheum hotaoense C. Y.
Cheng e t T. C. Kao的干燥根及根茎 ,为甘肃及西北地区常见
的大黄属栽培植物 [ 1] 。 土大黄苷具有抗菌 、改善微循环 、降
血脂 、降血糖 、抗肿瘤 、抑制过敏反应 、调控机体免疫防御系
统 、抗血栓以及抗氧化等作用 [ 2] 。河套大黄中土大黄苷的含
量较高 , 可作为提取土大黄苷及制备有关制剂较好的生产原
料。但针对河套大黄中土大黄苷的定量测定未见详细报道。
本实验用 HPLC测定河套大黄中土大黄苷的含量 ,为控制河
套大黄药材质量提供了一种可靠的方法。
1　材料与方法
1. 1　材料
1. 1. 1　仪器 　DUR 640 紫外-可见分光光度计 (Beckm an
Cou lter);岛津 LC-10ATVP高效液相色谱仪 (SPD-10AVP检
测器 , SIL-10ADVP自动进样器 , C lass-VP工作站 );Hypersil
ODS2　分析色谱柱(大连依利特 , 4. 6 mm ×250 mm , 5 μm)。
1. 1. 2　药品与试剂　土大黄苷对照品(自制 , 批号 060117,
纯度 98%以上);河套大黄药材经中国医学科学院中国协和
医科大学药用植物研究所杨美华博士鉴定为 Rheum ho-
taoense C. Y. Cheng e tT. C. Kao的干燥根及根茎。乙腈(色谱
纯 , 天津市科密欧化学试剂开发中心 );甲醇 (色谱纯 , F isher
公司);醋酸(分析纯 ,北京化工厂);水为重蒸水。
1. 2　方法
1. 2. 1　溶液配制　精密称取土大黄苷对照品 25 m g加甲醇
至 25 m l, 得 1 mg /m l的对照品储备液。精密称取土大黄苷
对照品适量 , 加甲醇制成每 1 m l含 0. 1 m g的对照品溶液。
取河套大黄药材粉末 (过 40目筛)约 0. 1 g, 精密称定 , 置具
塞锥形瓶中 , 精密加入甲醇 50 m l, 称定重量 , 加热回流 15
m in,放冷 , 再称定重量 ,用甲醇补足减失的重量 ,摇匀 , 滤过 ,
取续滤液 , 得供试品溶液。
1. 2. 2　色谱条件　以乙腈(A)-1. 0%醋酸水(B)(25∶75)为
流动相 , 以 Hypersil ODS2 5 μm 填充不锈钢柱为固定相 , 检
测波长为 324 nm ,进样量为 10 μl, 流速为 1. 0 m l /m in, 理论
板数按土大黄苷峰计算应不低于 3 000。
2　结果
2. 1　方法的专属性
分别精密吸取溶剂甲醇 、土大黄苷对照品溶液和供试品
溶液各 10μl,分别注入液相色谱仪 , 记录色谱图。结果甲醇
在土大黄苷的主峰处无明显的吸收 ,说明阴性无干扰 ,结果
见图 1。
图 1　溶剂甲醇(A)、土大黄苷对照品溶液 (B)和供试品溶液 (C)
的 HPLC图
1号峰为土大黄苷
2. 2　标准曲线 、线性范围和最低检测限
分别精密吸取土大黄苷对照品储备液 0. 1、 0. 25、 0. 5、
1.0、2. 0、3. 0、4. 0 m l, 置 10 m l量瓶中 , 加甲醇稀释至刻度 ,
摇匀 ,滤过 , 注入液相色谱仪 , 测定 , 由峰面积 (Y)和对照品
进样量(X)绘制标准曲线 , 得回归方程 Y =4 118. 212X +
169 349. 7, r =0. 9996。 结果表明土大 黄苷进样量在
100. 64 ～ 4 025. 60 ng之间时 , 与其峰面积呈良好的线性关
系。
在本实验条件下以信噪比为 3∶1时的进样量为最低检
测限 ,其最低检测限为 0. 01 ng。
2. 3　加样回收率
采用加样回收法 ,精密称取同一批已知含量的药材粉末
(批号:030801-3, 含水分 4. 94%)0. 1 g, 置具塞锥形瓶中(分
别已按相当于药材含量的 80%, 100%, 120%量加人土大黄
苷对照品), 同 1. 2. 1项下方法制备供试品溶液 , 进样分析 ,
由测得量与加入量计算回收率 ,结果表明该方法回收率良好
(表 1)。
2. 4　精密度
取土大黄苷对照品溶液 , 重复进样 6次 ,记录峰面积 ,其
RSD值为 0. 70%, 说明该仪器的精密度良好。
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军事医学科学院院刊　 2007年 10月 第 31卷 第 5期
Bu llA cadM ilM ed Sci, O ct2007;　　Vo l31　N o 5　
2. 5　溶液稳定性
取供试品溶液 , 室温放置 , 分别在 0, 2, 4, 6, 8, 10 h测
定 ,记录峰面积 , 其 RSD为 0. 10%, 表明样品溶液 10 h内稳
定。
表 1 土大黄苷加样回收率
称样量
(g)
样品中含量
(mg)
加入量
(m g)
测得量
(m g)
回收率
(%)
平均值
(%)
RSD
(%)
0. 1078 6. 24 4. 92 11. 02 97. 2
0. 1048 6. 07 5. 01 10. 88 96. 0
0. 1033 5. 98 4. 82 10. 60 95. 9
0. 1019 5. 90 6. 10 11. 81 96. 9
0. 1054 6. 10 5. 96 11. 80 95. 6 96. 3 0. 72
0. 1026 5. 94 6. 14 11. 79 95. 3
0. 1042 6. 03 7. 16 12. 95 96. 6
0. 1027 5. 95 7. 27 13. 02 97. 2
0. 1079 6. 25 7. 03 13. 01 96. 2
2. 6重复性试验
精密称取 6份同一批药材 (批号:030801-3)0. 1g, 同
1. 2. 1项下方法制备供试品溶液 , 进样分析 , 计算土大黄苷的
含量 , 其 RSD为 0. 25%。
2. 7　样品测定
对 10批河套大黄药材 , 按 1. 2. 1项下方法制备供试品
溶液 , 进样分析 ,外标法计算含量 ,结果见表 2。
表 2　 10批河套大黄药材的土大黄苷含量(n=3)
药材批次 土大黄苷(%) RSD(%)
030801-2 5. 54 1. 12
031231-2 6. 18 1. 36
030428 10. 26 1. 85
040306-1 5. 62 1. 60
030801-3 6. 09 1. 23
040306-2 7. 31 1. 47
030806 8. 68 1. 34
040306-3 7. 97 1. 72
031231-1 5. 89 1. 59
040116-1 5. 56 1. 62
3　讨论
3. 1　色谱条件的选择
本试验在进行高效液相色谱法的流动相选择中 ,比较了
甲醇-水(52∶48)、甲醇-乙腈-水(35∶5∶60)、乙腈-水(27∶73)、
乙腈-1. 0%醋酸溶液(25∶75)等作为流动相的色谱图 , 结果
发现 , 选用乙腈-1. 0%醋酸溶液(25∶75)为流动相时 ,主峰与
其前后峰的分离度均较好 ,且其柱效较高 , 保留时间适中 , 峰
形较好 , 故选择乙腈 - 1. 0%醋酸溶液(25∶75)为河套大黄药
材含量测定的流动相 。
试验中对土大黄苷对照品溶液进行紫外扫描 , 发现其在
紫外区的最大吸收波长为 324 nm , 与文献报道一致 [ 3] 。选
择 324 nm为检测波长 , 在选定的流动相下 ,土大黄苷可与其
他成分达到很好的分离 ,溶剂无干扰 ,故选择 324 nm为检测
波长。
在其他色谱条件不变的情况下 , 分别就色谱条件中的固
定相 、流动相 、柱温 、流速及检测波长等方面进行小范围的变
动 ,对同一样品进行含量测定 , 以考察色谱条件的耐用性。
结果发现 ,以上条件在小范围变动时 ,不影响测定结果。
3. 2　提取条件的确定
实验中比较了超声和回流两种常用的提取方法 , 80%乙
醇和甲醇两种提取溶剂的提取效果 , 结果发现选择甲醇为溶
剂 ,采用回流提取的方法提取药材 ,提取的土大黄苷量较高。
不同批药材因产地 、采收时间 、贮存时间长短等因素不
同 ,含量差异较大 , 须建立统一的药材质量标准。本实验建
立了河套大黄药材中土大黄苷的含量测定方法 , 方法简便 、
准确 、灵敏 , 为河套大黄药材的质量控制规范法 、标准化提供
了依据。
[关键词 ] 　土大黄苷;色谱法 , 高压液相;大黄
[中图分类号 ] 　R28 [文献标识码 ] 　A
[文章编号 ] 　1000-5501(2007)05-0498-02
[参考文献 ]
[ 1] 　甘肃省药品标准 [ S] . 甘肃省卫生厅. 1998. 55 -58.
[ 2] 　陈志强 ,张　文 ,张学良 ,等. HPLC制备河套大黄中多羟基芪
类化合物 Rhapon ti[ J] .中成药 , 2004, 26(11):932 - 933.
[ 3] 　陈德昌.中药化学对照品工作手册 [M ] .北京:中国医药科技
出版社 , 2000. 38.
(本文编辑　姜晓舜)
499　军事医学科学院院刊　2007年 10月第 31卷 第 5期