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维药罗勒不同提取物对角叉菜胶所致大鼠急性胸膜炎模型的影响



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维药罗勒不同提取物对角叉菜胶所致大鼠急性胸膜炎模型的影响
古兰·托来西1, 艾尼瓦尔·吾买尔1, 田树革2, 娜迪拉·热依木3, 阿布来提·阿布力孜1, 依巴代
提·吐乎提1*
(1.新疆医科大学药学院药理教研室,新疆 乌鲁木齐 830054;2.新疆医科大学中医学院实验中心,新疆 乌
鲁木齐 830054;3.新疆医科大学第二附属医院,新疆 乌鲁木齐 830054)
收稿日期:2010-12-27
基金项目:国家自然科学基金(30660210)
作者简介:古兰·托来西(1984—) ,女,硕士研究生。Tel:15099509375,E-mail:Gulan. 215@ 163. com
* 通信作者:依巴代提·吐乎提(维吾尔族) ,女,教授,硕士生导师,研究方向:心血管药理。Tel:13899930546
摘要:目的 探讨罗勒不同提取物对胸膜炎模型大鼠的肿瘤坏死因子-a(TNF-a) ,前列腺素 E2(PGE2) ,白细胞介素-8
(IL-8)的影响。方法 实验分为 9 组,每组连续灌胃 7 d,末次给药 30 min 后采用角叉菜胶所致大鼠胸膜炎模型。结果
模型组大鼠胸腔渗出液中 TNF-a,蛋白质量明显升高(P < 0. 001,P < 0. 01)及血清中 IL-8,PGE2 显著升高(P < 0. 001)。
结论 罗勒不同提取物对角叉菜胶所致大鼠急性胸膜炎有显著的抑制作用,其作用机制可能是通过抑制炎性介质 PGE2
的生成和细胞因子 TNF-a,IL-8 的升高等环节产生抗炎作用。
关键词:维药罗勒;角叉菜胶;胸膜炎
中图分类号:R285. 5 文献标志码:B 文章编号:1001-1528(2011)08-1410-03
罗勒 Ocimum basilicum L. 是唇形科罗勒属一年生草本
植物,是维吾尔医应用历史悠久的常用药材之一,植物维文
名为热依汗(Rayhan)[2],别名九层塔,毛罗勒,丁香,香草
等[3]。原产于以印度为中心的亚洲热带[8],我国中部,南
部,东部有栽培,主要分布与云南,四川,广东,台湾,湖南,福
建,新疆等地。现代化学研究表明罗勒的主要成分包括挥发
油类,黄酮类及其苷类,香豆素类,此外还含萜类和生物碱
类[4]。本实验所研究的是在新疆栽培的罗勒。本课题组前
期研究已表明新疆罗勒有降血压,调血脂及抗血栓作用,在
国外研究表明罗勒具有抗炎作用,但国内尚未见罗勒抗炎作
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用的研究报告。本实验研究罗勒不同提取物(水,乙酸乙酯,
正丁醇)对胸腔渗出液的炎症因子,炎性介质以及蛋白质量
的影响作了相关研究,从中探讨其抗炎作用。
1 材料与方法
1. 1 实验材料
1. 1. 1 药品及试剂 盐酸地塞米松片:0. 75 mg /片(天津药
业集团新郑股份有限公司,批号 090817) ,戊巴比妥钠(批号
860901) ,角叉菜胶(Carrageenan,Car) (Biosharp 公司,批号
1000245) ,大鼠肿瘤坏死因子-a(TNF-a)ELISA试剂盒(批号
201005) ,大鼠白细胞介素 8(IL-8)ELISA 试剂盒(批号
201005) ,大鼠前列腺素 E2 (PGE2)ELISA 试剂盒(批号
201005 均由 R&D公司) ,Bradford 蛋白浓度测定试剂盒(北
京博迈德科技发展有限公司,批号 20301151) ,肝素钠(Solar-
bio公司,批号 H8060)。
1. 1. 2 实验仪器 旋转蒸发器 RE-52AA,恒温水浴锅 B-
220(上海亚荣生化仪器厂,新疆医科大学中药-生药学实验
室提供) ,冷冻干燥机(北京博医康实验仪器有限公司,FD-
1) ,ODA-LO2510102 酶标分析仪(BIO-RAD 公司) ,LXJ-IIB
低速大容量多管离心机。
1. 1. 3 实验动物 雄性 SD 大鼠 108 只,清洁级,体质量
(200 ± 20)g,均由新疆医科大学动物中心提供。
1. 2 实验方法
1. 2. 1 药材的提取 新疆托克逊县采集的罗勒地上部分粉
碎后用 8 ~ 10 倍量水浸泡,用回流法回流提取 3 次,合并 3
次滤液,进行减压浓缩至浸膏状,置 - 70 ℃冷藏 1 h,取出后
放入冷冻干燥机 24 h 后得罗勒水提物的固体粉末;乙酸乙
酯,正丁醇部分从乙醇提取液中分别萃取得到的(乙醇提方
法采用 95%乙醇溶液,其余方法完全相同)罗勒乙酸乙酯,
正丁醇萃取物的固体粉末。
实验时罗勒水提取物和正丁醇萃取物固体粉末加蒸馏
水溶解,乙酸乙酯萃取物在 5%的 CMC-Na 溶液溶解至所需
浓度。本实验前期定性实验结果表明水提物主要含糖类,乙
酸乙酯提取部分含黄酮类、皂苷类、萜类,正丁醇提取部分含
黄酮苷类。
1. 2. 2 雄性 SD大鼠 108 只,随机分为 9 组,每组 12 只:正
常组,模型对照组,阳性对照组(地塞米松 7. 5 mg /kg) ,罗勒
水提物高,低剂量组(400 mg /kg,100 mg /kg) ,罗勒乙酸乙酯
萃取物高,低剂量组(400 mg /kg,100 mg /kg) ,罗勒正丁醇萃
取物高,低剂量组(400 mg /kg,100 mg /kg)。每组动物连续
灌胃 7 d,每日 1 次,正常组与模型组给予等体积的生理盐
水,末次给药 30 min后,模型对照组及各给药组动物分别用
乙醚轻度麻醉后向胸腔内注入角叉菜胶(0. 2 mL /100
g)[1,5-7],正常组注入等体积生理盐水,致炎 12 h 后,大鼠摘
除眼球取血后,戊巴比妥钠麻醉处死,打开胸腔,用玻璃吸管
将胸腔内全部渗出液吸出,然后以 PBS 溶液(含肝素 5 U /
mL)2 mL冲洗胸腔 2 次,冲洗液和渗出液合并,将渗出液和
血液 3 000 r /min离心 15 min,取上清液,按试剂盒说明书操
作。
1. 3 统计学方法 数据用 SPSS16. 0 统计软件处理,所有结
果用 x ± s表示,采用多组之间单因素方差分析和 SNK 两两
比较,P < 0. 05 为有统计学意义。
2 结果
2. 1 罗勒不同提取物对各组胸膜炎大鼠胸腔渗出液中
TNF-a,Pro量的影响 与正常组比较,模型组大鼠胸腔渗出
液中 TNF-a,Pro量显著升高。与模型组比较,阳性对照组大
鼠胸腔渗出液中 TNF-a,Pro量显著降低(P < 0. 001) ,罗勒提
取物水溶性部位高、低剂量组,乙酸乙酯高、低剂量组,正丁
醇高、低剂量组均有显著降低 TNF-a 量(P < 0. 001,P <
0. 01)。水提物高剂量与乙酸乙酯,正丁醇高剂量比较,与正
丁醇高剂量有明显差异(P < 0. 01) ,乙酸乙酯高剂量与正丁
醇高剂量比较也有差异,水提物与乙酸乙酯高剂量的相互接
近,无差别。水提物低剂量与乙酸乙酯,正丁醇低剂量比较,
与正丁醇低剂量有显著性差别(P < 0. 05) ,乙酸乙酯低剂量
与正丁醇低剂量比较也有明显的差别(P < 0. 01)。结果见
表 1。
表 1 罗勒不同提取物对各组胸膜炎大鼠胸腔渗出液中 TNF-a,Pro质量的影响 (x ± s)
组别 剂量 /(mg /kg) 动物数 /只 TNF-a /(ng /L) Pro /(μg /L)
正常组 — 10 11. 86 ± 2. 55*** 9. 09 ± 4. 18
模型组 — 9 27. 99 ± 8. 34 17. 33 ± 2. 18***
地塞米松组 7. 5 9 11. 61 ± 2. 22*** 9. 90 ± 4. 21###
罗勒水提物高剂量组 400 10 11. 97 ± 1. 02*** 15. 26 ± 4. 75###
罗勒水提物低剂量组 100 10 13. 47 ± 2. 23*** 16. 33 ± 3. 30**
罗勒乙酸乙酯高剂量组 400 10 12. 33 ± 1. 39*** 10. 92 ± 3. 75###
罗勒乙酸乙酯低剂量组 100 10 13. 85 ± 2. 71*** 13. 54 ± 4. 36#
罗勒正丁醇高剂量组 400 10 17. 04 ± 3. 21**##▲▲ 10. 70 ± 3. 39###
罗勒正丁醇低剂量组 100 10 17. 32 ± 2. 64 **△ 10. 72 ± 2. 48###
注:与模型组比较,* P < 0. 05,**P < 0. 01,***P < 0. 001;与水提物高剂量比较,##P < 0. 01;与乙酸乙酯高剂量比较,▲▲P < 0. 01;与水提
物低剂量比较,△P < 0. 05;与乙酸乙酯低剂量比较,P < 0. 05。
2. 2 罗勒不同提取物对各组胸膜炎大鼠血清中 IL-8,PGE2
的影响 与正常组比较,模型组大鼠胸腔渗出液中 IL-8,
PGE2 的量显著升高。与模型组比较,阳性对照组大鼠血清
中 IL-8,PGE2 的量显著降低(P < 0. 001) ,罗勒提取物水溶性
部位高、低剂量组,乙酸乙酯高、低剂量组,正丁醇高、低剂量
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组均有显著降低血清中 IL-8,PGE2 的量(P < 0. 001,P <
0. 01)。与地塞米松组比较,乙酸乙酯低剂量,正丁醇低剂量
有显著性差异(P < 0. 05) ,水提物低剂量与乙酸乙酯低剂量
也有显著性差异(P < 0. 05)。结果见表 2。
表 2 罗勒不同提取物对各组胸膜炎大鼠血清中 IL-8,PGE2 的影响 (x ± s)
组别 剂量 /(mg /kg) 动物数 /只 IL-8 /(ng /L) PGE2 /(ng /L)
正常组 — 10 139. 51 ± 18. 91*** 38. 08 ± 4. 41***
模型组 — 9 215. 78 ± 39. 19 77. 33 ± 3. 59
地塞米松组 7. 5 9 126. 10 ± 15. 63*** 45. 92 ± 3. 82***
罗勒水提物高剂量组 400 10 140. 21 ± 18. 42*** 47. 65 ± 4. 47***
罗勒水提物低剂量组 100 10 142. 88 ± 7. 79*** 51. 36 ± 4. 23**
罗勒乙酸乙酯高剂量组 400 10 155. 38 ± 5. 23*** + 47. 82 ± 4. 37***
罗勒乙酸乙酯低剂量组 100 10 159. 47 ± 8. 08*** +△ 48. 90 ± 4. 81***
罗勒正丁醇高剂量组 400 10 143. 33 ± 30. 88*** 44. 27 ± 2. 66***
罗勒正丁醇低剂量组 100 10 154. 10 ± 18. 91*** + 47. 60 ± 6. 22***
注:与模型组比较,**P < 0. 01,***P < 0. 001;与地塞米松组比较,+ P < 0. 05;与水提物低剂量比较,△P < 0. 05。
3 讨论
角叉菜胶诱导的大鼠胸膜炎模型是常用的急性炎症模
型[9],该模型在炎症反应时,巨噬细胞,中性粒细胞,血小板
等炎细胞激活,释放大量的炎症介质,如 TNF-a,PGs,组胺,
纤维蛋白裂解物等,本研究罗勒不同提取物对胸腔渗出液的
炎症因子,炎性介质以及蛋白质量的影响作了相关研究。
TNF-a是一种重要的由激活的单核-巨噬细胞系统产生,
并具有广泛生物学功能的促炎性因子和免疫调节因子,可通
过对血管内皮细胞的作用,引起肺部损伤和胸膜炎,能增加
中性粒细胞的黏附,指导胸腺细胞的成熟,并可刺激增强中
性多核白细胞的浸润,吞噬活性与氧化自由基的产生,启动
单核-巨噬细胞释放 IL-6,IL-8,PGE2 等炎症介质
[9]。急性炎
症过程中涉及体内 TNF,IL-1,IL-6,IL-8 水平增加。本实验
预防性给予罗勒不同提取物可抑制炎症时细胞因子 TNF-a
大量产生,从而进一步抑制 IL-6,IL-8,PGE2 的释放,罗勒不
同提取物对 TNF-a 有显著地抑制作用(P < 0. 001)。其中笔
者还测了 IL-8,PGE2 的含量,罗勒不同提取物对血清中 IL-8,
PGE2 有显著地抑制作用(P < 0. 001)。
通过本次实验,初步发现罗勒不同提取物对胸膜炎有抑
制作用,其作用机制可能是通过抑制细胞因子 TNF-a 和 IL-8
的升高,抑制炎性介质 PGE2 的生成,从而达到抗炎效果。
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