全 文 ：基金项目：国家自然科学基金项目（３０６６０２１０）；教育部留学回国人员科研启动基金
作者简介：米娜瓦尔·哈帕尔（１９８５－），女（维吾尔族），硕士，研究方向：心血管药理学。
通信作者：依巴代提·吐乎提，女（维吾尔族），教授，硕士生导师，研究方向：心血管药理，Ｅ－ｍａｉｌ：ｉｂａｄｅｔｔｏｈｔｉ＠１２６．ｃｏｍ。
维药罗勒提取物中总黄酮含量及其抗氧化活性研究
米娜瓦尔·哈帕尔１，艾尼瓦尔·吾买尔１，阿孜古丽·吐尔逊２，阿布力子·阿布杜拉３，
娜迪热·热依木４，依巴代提·吐乎提１
（新疆医科大学１基础医学院药理学教研室；２第一附属医院细胞生物学室；３新疆维吾尔自治区地方病分子生物学重点实验室，
乌鲁木齐　８３００１１；４第二附属医院内科，乌鲁木齐　８３００６３）
摘要：目的　探讨维药罗勒乙酸乙酯提取物和正丁醇提取物中总黄酮的含量及其体外抗氧化活性。方法　
采用紫外分光光度法，在３５７ｎｍ波长处测定维药罗勒乙酸乙酯提取物和正丁醇提取物中总黄酮的含量，并进行比
较；检测２种提取物对１，１－二苯基－２－三硝基苯肼（ＤＰＰＨ·）的清除作用，评价其体外抗氧化活性。结果　维药罗
勒乙酸乙酯提取物中总黄酮含量为２１．０２３　３μｇ／ｍＬ（ＲＳＤ　０．１９％，ｎ＝５），正丁醇提取物中总黄酮含量为４．７８２　９
μｇ／ｍＬ（ＲＳＤ　０．５８％，ｎ＝５）。０．５ｍｇ／ｍＬ乙酸乙酯提取物和正丁醇提取物在体外对ＤＰＰＨ·的清除率分别为
８８．８％和７２．２％。结论　维药罗勒有效提取物中所含的黄酮可能是其发挥抗炎作用的有效化学成分之一，且其体
外抗氧化活性也在一定程度上体现其体外抗炎活性。
关键词：维药罗勒；总黄酮；紫外分光光度法；ＤＰＰＨ· ；抗氧化
中图分类号：Ｒ２８２；Ｒ９６２　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１００９－５５５１（２０１２）０６－０７３６－０４
Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ａｎｄ　ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　Ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ
ａｎｔｉ－ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ　ａｃｔｉｖｅ　ｓｉｔｅ　ｉｎ　Ｏｃｉｍｕｍ　ＢａｓｉｌｉｃｕｍＬ．
Ｍｉｎａｗａｒ　Ｈａｐｐａｒ１，Ａｎｗａｒ　Ｕｍａｒ１，Ａｒｚｉｇｕｌ　Ｔｕｒｓｕｎ２，Ａｂｌｉｚ　Ａｂｄｕｌａ３，Ｎａｄｉｒａ　Ｒｅｙｉｍ４，Ｉｂａｄｅｔ　Ｔｏｈｔｉ　１
（１　Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍｃｏｌｏｇｙ；２　Ｃｅｌｌｕｌａｒ　Ｂｉｏ．Ｌａｂ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｆｉｒｓｔ　Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ；
３　Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｕｒｕｍｑｉ　８３００１１，Ｃｈｉｎａ；４　Ｔｈｅ　Ｓｅｃｏｎｄ　Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ，
Ｘｉｎｊｉａｎｇ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｕｒｕｍｑｉ　８３００６３，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｓｔｕｄｙ　ｔｈｅ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｉｎ　ｅｔｈｙｌ　ａｃｅｔａｔｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｎ－ｂｕｔａｎｏｌ　ｅｘｔｒａｃ－
ｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｕｙｇｈｕｒ　Ｏｃｉｍｕｍ　ＢａｓｉｌｉｃｕｍＬ．（ＯＢＬ）ａｎｄ　ｓｔｕｄｙ　ｉｔｓ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｔｈｅ
ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　ａｔ　３５７ｎｍ　ｂｙ　ＵＶ　Ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ　ａｎｄ　ｔｏ　ｃｏｍｐａｒｅ．Ｔｏ　ｄｅｔｅｃｔ
ｔｈｅｉｒ　ｒｅｍｏｖａｌ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｎ　１，１－Ｄｉｐｈｅｎｙｌ－２－ｐｉｃｒ－ｙｌｈｙｄｒａｚｙｌ　ｒａｄｉｃａｌ　２，２－Ｄｉｐｈｅｎｙｌ－１－（２，４，６－ｔｒｉｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｌ　ｈｙｄｒａ－
ｚｙｌ）（ＤＰＰＨ·）ｂｙ　ＵＶ　Ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ，ｔｏ　ｅｖａｌｕａｔｅ　ｔｈｅｉｒ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｙ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ
ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｉｎ　ｅｔｈｙｌ　ａｃｅｔａｔｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｎ－ｂｕｔｙｌ　ａｌｃｏｈｏｌ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｓａｍｐｌｅ　ｗｅｒｅ　２１．０２３　３μｇ／ｍＬ（ＲＳＤ
０．１９％，ｎ＝５）ａｎｄ　４．７８２　９μｇ／ｍＬ（ＲＳＤ　０．５８％，ｎ＝５）；Ｆｏｒ　０．５ｍｇ／ｍＬ　ｅｔｈｙｌ　ａｃｅｔａｔｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｎ－
　第３５卷　第６期 新 疆 医 科 大 学 学 报 Ｖｏｌ．３５　Ｎｏ．６
　２０１２年６月 Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｘｉｎｊｉａｎｇ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｊｕｎ．２０１２
ｂｕｔａｎｏｌ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ，ｔｈｅ　ｓｃａｖｅｇｉｎｇ　ｒａｔｅｓ　ｏｆ　ＤＰＰＨ·ｓａｍｐｌｅ　ｗｅｒｅ　８８．８％ａｎｄ　７２．２％．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｔｈｅ　ｆｌａ－
ｖｏｎｏｉｄｓ　ｏｆ　ＯＢＬ　ｐｏｌａｒ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｍａｙ　ｂｅ　ａ　ｃｈｅｍｉｃａｌ　ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ　ｉｎ　ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ　ｅｆｆｅｃｔｓ，ｉｎ　ｗｈｉｃｈ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ａｎ－
ｔｉ－ｏｘｉｄａｔｉｖｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｔｏ　ａ　ｃｅｒｔａｉｎ　ｅｘｔｅｎｔ　ｒｅｆｌｅｃｔ　ｔｈｅｉｒ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ａｎｔｉ－ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ　ａｃｔｉｖｉｔｙ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｕｙｇｈｕｒ　Ｏｃｉｍｕｍ　Ｂａｓｉｌｉｃｕｍ　Ｌ．（ＯＢＬ）；ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｅ；ＵＶ　Ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ；ＤＰＰＨ·；ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ
　　罗勒 （Ｏｃｉｍｕｍ　ｂａｓｉｌｉｃｕｍＬ，ＯＢＬ）为唇形科植
物罗勒的地上部分，一年生草本，全国各地都有栽
培［１］。其具有疏散解表、化湿合中、行气活血、解毒
消肿的作用，主治感冒头痛、发热咳嗽、中暑、食积不
化等［２］。罗勒主含黄酮和香豆素等成分［３］。何志琴
等［４］与古兰·托来西等［５］已通过体内及体外实验证
明维药罗勒乙酸乙酯萃取部位和正丁醇萃取部位是
其发挥抗炎作用的主要有效活性部位。帕丽达·阿
不力孜等［６］研究证明紫外分光光度法是测定罗勒黄
酮含量的有效方法之一。本研究采用紫外分光光度
法测定并比较维药罗勒乙酸乙酯提取物和正丁醇提
取物中总黄酮含量，且考察维药罗勒提取物对ＤＰ－
ＰＨ自由基（ＤＰＰＨ·）的清除能力，探讨ＯＢＬ－乙酸
乙酯和ＯＢＬ－正丁醇萃取部位的体外抗氧化活性，
现报道如下。
１　仪器与材料
１．１　仪器　ＳＫ２２００Ｈ型超声波精洗仪（上海科导
超声仪器有限公司生产）；电热恒温真空干燥箱
（ＤＺＫ８８－Ａ型，上海医疗器械七厂生产）；ＡＢ－１０４型
电子分析天平（梅特勒－托利多上海仪器有限公司生
产）；ＴＵ－１８００紫外分光光度计（北京普析通用仪器
有限公司生产）。
１．２　试剂与材料　芦丁标准品（卫生部中国药品生
物检定所），无水甲醇，分析纯，１，１－二苯基－２－三硝基
苯肼自由基（ＤＰＰＨ·，美国Ｓｉｇｍａ公司），罗勒（２０１０
年９月采自新疆吐鲁番地区托克逊县种植基地）。
２　方法与结果
２．１　对照品溶液的制备　精密称取芦丁标准品
１０ｍｇ，以适量甲醇溶液溶解后置于５０ｍＬ量瓶中并
稀释到刻度，摇匀，即得０．２ｍｇ／ｍＬ的对照品溶液。
２．２　供试品溶液的制备　将超声提取并干燥得到的
罗勒乙酸乙酯提取物和正丁醇提取物各称取０．５ｇ，
分别以适量的甲醇溶液溶解后置于５０ｍＬ量瓶中
稀释到刻度；再精密量取１ｍＬ置于２５ｍＬ量瓶中，
以甲醇稀释到刻度，制得０．５ｍｇ／ｍＬ的２种供试品
溶液。
２．３　测定波长的选择　对照品溶液及供试品溶液在
２００～７００ｎｍ进行扫描，发现均在波长２５６ｎｍ和
３５７ｎｍ附近有最大吸收峰，选择测定波长为３５７ｎｍ。
２．４　线性关系的考察　精密吸取芦丁对照品溶液
０．１、０．３、０．５、０．７、０．９、１．１、１．３ｍＬ置于５ｍＬ
量瓶中，加甲醇稀释到刻度，摇匀，制成含芦丁４～
５２μｇ／ｍＬ的系列标准溶液。以甲醇为空白，在
３５７ｎｍ波长处测定其吸光度，结果表明芦丁在４～
５２μｇ／ｍＬ浓度范围符合Ｂｅｅｒ定律，吸收度与浓度
呈良好的线性关系，其回归方程为：Ｙ ＝０．０２５　８　Ｘ
＋０．０３０　６，ｒ＝０．９９９　８。
２．５　精密度试验　分别精密量取２种供试品溶液
连续测定５次，测得吸光度的ＲＳＤ，罗勒乙酸乙酯
提取部位和罗勒正丁醇提取部位的 ＲＳＤ分别为
０．１９％和０．５８％，结果表明本法精密度良好。
２．６　稳定性试验　分别精密量取２种供试品溶液
和对照品溶液适量于室温分别放置０、２、４、６、８、１０、
１２、２４ｈ后，测定其吸光度的ＲＳＤ值，结果表明供试
品溶液和对照品溶液在２４ｈ内稳定。
２．７　样品的测定　取２种供试品溶液，于３５７ｎｍ波
长处测定吸光度，代入当日回归方程 （Ｙ＝０．０２５　８Ｘ
＋０．０３０　６，ｒ＝０．９９９　８）计算，结果ＯＢＬ－乙酸乙酯
提取物和ＯＢＬ－正丁醇提取物中所含的总黄酮含量
分别为２１．０２３　３μｇ／ｍＬ（ＲＳＤ　０．１９％，ｎ ＝５），
４．７８２　９μｇ／ｍＬ（ＲＳＤ　０．５８％，ｎ＝５），结果见表１。
２．８　加样回收率试验　分别精密量取已知总黄酮
含量的提取液３份（ＯＢＬ－乙酸乙酯提取物和 ＯＢＬ－
正丁醇提取物分别进行），分别加入一定量的芦丁标
准品，按“２．７项”下操作方法进行，用 ＵＶ法测定吸
光度，并计算回收率。结果 ＯＢＬ－乙酸乙酯提取物
７３７　第６期 米娜瓦尔·哈帕尔，等：维药罗勒提取物中总黄酮含量及其抗氧化活性研究
和ＯＢＬ－正丁醇提取物平均回收率分别为１００．４％
和９９．６％，表明本法具有良好的回收率（表２、３）。
表１　罗勒正丁醇和乙酸乙酯提取物中总黄酮含量
的测定结果 （ｎ＝５）
样品 序号 吸光度 样品含量／％ ＲＳＤ／％
１　 ０．１５３　 ０．９５
２　 ０．１５２　 ０．９４
ＯＢＬ－正丁醇 ３　 ０．１５２　 ０．９４　 ０．５８
４　 ０．１５２　 ０．９６
５　 ０．１５４　 ０．９４
１　 ０．５７２　 ４．１９
２　 ０．５７１　 ４．１９
ＯＢＬ－乙酸乙酯 ３　 ０．５７０　 ４．１８　 ０．１９
４　 ０．５７２　 ４．２０
５　 ０．５７３　 ４．１９
表２　罗勒正丁醇萃取部位加样回收率试验测定结果（ｎ＝９）
样品号
总黄酮
量／μｇ
芦丁加入
量／μｇ
测得量
／μｇ
回收率
／％
平均回收
率／％
ＲＳＤ／％
１　 ４．７８２　９　 ４０　 ４５．１２２　７　 １００．８
２　 ４．７８２　９　 ４０　 ４５．１０２　４　 １００．７
３　 ４．７８２　９　 ４０　 ４４．６９９　７　 ９９．７
４　 ４．７８２　９　 ８０　 ８４．６８４　５　 ９９．８
５　 ４．７８２　９　 ８０　 ８４．６３５　４　 ９９．８　 ９９．６　 ０．７５
６　 ４．７８２　９　 ８０　 ８３．９６２　４　 ９８．９
７　 ４．７８２　９　 １２０　 １２３．７９２　８　 ９９．１
８　 ４．７８２　９　 １２０　 １２３．６９９　３　 ９９．０
９　 ４．７８２　９　 １２０　 １２３．３４５　７　 ９８．８
表３　罗勒乙酸乙酯萃取部位加样回收率试验测定结果（ｎ＝９）
样品号
总黄酮量
／μｇ
芦丁加入
量／μｇ
测得量
／μｇ
回收率
／％
平均回收
率／％
ＲＳＤ／％
１　 ２１．０２３　３　 ４０　 ６０．７６６　５　 ９９．４
２　 ２１．０２３　３　 ４０　 ６１．１８６　４　 １００．４
３　 ２１．０２３　３　 ４０　 ６１．２２５　７　 １００．５
４　 ２１．０２３　３　 ８０　 １０１．１００　４　 １００．１
５　 ２１．０２３　３　 ８０　 １０１．２９２　４　 １００．３　 １００．４　 ０．４９
６　 ２１．０２３　３　 ８０　 １０１．８７２　６　 １０１．１
７　 ２１．０２３　３　 １２０　 １４１．５９９　７　 １００．７
８　 ２１．０２３　３　 １２０　 １４２．０５０　１　 １００．９
９　 ２１．０２３　３　 １２０　 １４１．８５６　３　 １００．５
２．９　体外抗氧化活性的测定　参照文献［７］，取
８０μｍｏｌ／Ｌ的１，１－二苯基－２－三硝基苯肼（ＤＰＰＨ·）
溶液２．０ｍＬ，分别加入０．５ｍｇ／ｍＬ的２种供试品
溶液（维药罗勒乙酸乙酯提取部位和正丁醇提取部
位），摇匀，静置３０ｍｉｎ后，在５１７ｎｍ波长处测定吸
光值（Ａｉ），以５０％的乙醇１．０ｍＬ代替样品作为空
白对照管，以５０％的乙醇２．０ｍＬ代替ＤＰＰＨ·溶
液作为样品参比管，并以等体积蒸馏水和５０％乙醇
混合液空白调零，按照同样的方法在５１７ｎｍ波长
处测定吸光值，样品对ＤＰＰＨ·的抑制作用按下列
公式计算：
清除率＝［１－（Ａｉ－Ａｊ）／Ａｃ］×１００％
Ａｉ＝Ａ（２．０ｍＬ　ＤＰＰＨ·＋１．０ｍＬ待测液）
Ａｊ＝Ａ（１．０ｍＬ待测液＋２．０ｍＬ　５０％乙醇）
Ａｃ＝Ａ（２．０ｍＬ　ＤＰＰＨ·＋１．０ｍＬ　５０％乙醇）
（式中Ａｉ为样品管的吸光值，Ａｊ为样品参比管的吸
光值，Ａｃ为空白对照管的吸光值）。结果表明维药
罗勒的乙酸乙酯提取部位和正丁醇提取部位均对
ＤＰＰＨ·有明显的清除作用，在相同实验条件下
０．５ｍｇ／ｍＬ维药罗勒乙酸乙酯提取物对 ＤＰＰＨ·
的清除率为８８．８％，０．５ｍｇ／ｍＬ维药罗勒正丁醇提
取物对ＤＰＰＨ·的清除率为７２．２％。采用ＤＰＰＨ·
法，以清除率为指标，评价２种提取物的体外抗氧化
活性，结果表明乙酸乙酯提取物作用明显强于正丁
醇提取物（表４）。
表４　维药罗勒提取物对ＤＰＰＨ·的清除率（ｎ＝３）
样品 样品管 参比管 空白对照管 对ＤＰＰＨ·的清除率／％
ＯＢＬ－乙酸乙酯 ０．５７０　 ０．２０４　 ０．３０６　 ８８．８
ＯＢＬ－正丁醇 ０．１５２　 ０．０６７　 ０．３０６　 ７２．２
３　讨论
在许多植物的叶、皮、根和果实中都含有一定量
的黄酮类化合物，它是植物在长期自然选择过程中
产生的一些次级代谢产物。在２０世纪６０年代末，
人们发现黄酮类化合物有抗炎、抗病毒、利胆、强心、
镇静和镇痛等作用。到７０年代，又发现黄酮类化合
物有抗氧化、抗衰老、免疫调节和抗肿瘤等作用［８］。
本课题组前期研究证明维药罗勒不同提取物在体外
对环氧化酶－２具有不同程度地抑制作用，ＯＢＬ－乙酸
乙酯提取物的抑制作用强于 ＯＢＬ－正丁醇提取
物［４］。罗勒主含挥发油类、黄酮及其苷类、香豆素
类，此外还含有三萜类和生物碱类等成分，本研究以
黄酮为测定目标进行了含量测定。结果表明，ＯＢＬ－
乙酸乙酯提取物和 ＯＢＬ－正丁醇提取物均含黄酮，
且ＯＢＬ－乙酸乙酯提取物所含的黄酮含量明显高于
８３７ 新 疆 医 科 大 学 学 报 第３５卷　
ＯＢＬ－正丁醇提取物，推断罗勒的抗炎作用与其所含
的总黄酮含量之间有着一定的量效关系。
黄酮类化合物在抗氧化反应中既能消除链引发
阶段的自由基，也能直接捕获自由基反应链中的自
由基，通过酚羟基阻断自由基链反应［９－１０］。本研究
结果表明，罗勒提取物在体外具有抗氧化活性，且
ＯＢＬ－乙酸乙酯提取物对ＤＰＰＨ·自由基的清除率
明显大于ＯＢＬ－正丁醇提取物。何志琴等［４］研究表
明罗勒不同提取物通过抑制ＰＧＥ２ 的生成，从而影
响花生四烯酸（ＡＡ）的代谢途径。ＡＡ 是一种重要
的炎症因子，其与氧化应激之间有着复杂的相互关
系［１１］。结合前期和这次研究不难看出罗勒在体外
具有抗炎和抗氧化作用，这２个作用均与 ＡＡ有密
切的关系，通过 ＡＡ 的桥梁作用，不仅能够将炎症
和氧化应激有机结合起来，从炎症和氧化应激两方
面系统阐述疾病发生、发展全过程，而且还能对疾病
进行治疗，对临床疾病的诊治具有重大意义。
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［收稿日期：２０１２－０１－１０］
（本文编辑　王艳
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［收稿日期：２０１２－０４－２０］
（本文编辑　王艳）
９３７　第６期 米娜瓦尔·哈帕尔，等：维药罗勒提取物中总黄酮含量及其抗氧化活性研究