全 文 ：� 2909 �中华中医药杂志(原中国医药学报)2013年 10 月第28卷第10期 CJTCMP , October 2013, Vol .28, No. 10
·论著·
通讯作者：张建军，北京市朝阳区北三环东路11号北京中医药大学68号信箱，邮编：100029，电话：010-64286993
E-mail：zjj59@163.com
分清肾茶片对角叉菜胶致大鼠前列腺炎的治疗作用
及对肿瘤坏死因子-α、前列腺素E2的影响
张建军，杨琦，王淳，李伟，黄银峰，屈胜胜，朱映黎
（北京中医药大学，北京 100029）
摘要：目的：研究分清肾茶片对慢性非细菌性前列腺炎的治疗作用及其抗炎镇痛机制。方法：采用角叉菜胶
直接注射的方法制作大鼠慢性非细菌性前列腺炎急性发作模型，以大鼠前列腺组织的病理形态、白细胞（WBC）
数量、卵磷脂小体（SPL）密度、前列腺组织中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和前列腺素E2（PGE2）的表达为检
测指标，观察分清肾茶片对模型大鼠的作用和影响。结果：与模型对照组比较，分清肾茶片能明显改善角叉菜胶
所诱发大鼠前列腺病理形态的变化，显著性减少大鼠前列腺组织中的WBC数量（P<0.05），提高SPL密度，并能
够显著性降低大鼠前列腺组织中TNF-α和PGE2的阳性表达（P<0.05）。结论：分清肾茶片对角叉菜胶引起的慢性
非细菌性前列腺炎急性发作有明显的预防治疗作用，其机制可能与分清肾茶片降低前列腺组织中TNF-α、PGE2含
量，减轻TNF-α、PGE2介导的多种炎症因子激活效应，从而抑制炎症和疼痛有关。
关键词：分清肾茶片；前列腺炎；肿瘤坏死因子-α；前列腺素E2
Therapeutic effects of Fenqing Shencha Tablet and its effects on levels of TNF-α and
PGE2 in the rats for prostatitis caused by carrageenan
ZHANG Jian-jun, YANG Qi, WANG Chun, LI Wei, HUANG Yin-feng, QU Sheng-sheng, ZHU Ying-li
( Beijing University of Chinese Medicine, Beijing 100029, China )
Abstract: Objective: To investigate the therapeutic eff ects of Fenqing Shencha Tablet on chronic abacterial prostatitis
in rats and the possible anti-infl ammatory and anti-nociceptive mechanisms. Methods: The modle was established by injecting
carrageenan into the prostate in rats. After treatment, pharmacological investigation was carried out to explore the impact of
Fenqing Shencha Tablet on the prostatitis of rats by pathologic changes, the number of white blood cell, the density of lecithin
corpuscle, the levels of TNF-α and PGE2. Results: Compared with the model group, Fenqing Shencha Tablet had signifi cant eff ects
of improving the prostate pathological changes, decreasing the number of white blood cell (P<0.05), increasing the density of
lecithin corpuscle in secretion, reducing the contents of TNF-α and PGE2 in prostate tissue (P<0.05). Conclusion: The mechanism
of Fenqing Shencha Tablet on chronic abacterial prostatitis may relate to the reducing level of TNF-α, PGE2, which relieved the
activation eff ect of infl ammatory mediator to suppress infl ammation.
Key words: Fenqing Shencha Tablet; Prostatitis; Tumor necrosis factor-α; Prostaglandin E2
现代医学认为，前列腺炎是前列腺受到病原体
感染或非感染因素刺激而产生的炎性反应[1]，实验
室检查可以见到前列腺液中白细胞（white blood cell，
WBC）数量增加和卵磷脂小体（SPL）密度降低等改
变。目前对该病的病因病机尚未完全明确，许多研
究显示可能与部分炎症因子的异常表达有关。分清
肾茶方是在中医学理论基础上，结合临床医师多年
经验组方而成，功善清热解毒利湿，活血化瘀止痛，
临床用于湿热下注、气滞血瘀型慢性前列腺炎，具有
显著疗效。分清肾茶片是以分清肾茶方为组方基础，
经现代制剂工艺研制而成的中药复方制剂。本实验
研究以角叉菜胶直接注射大鼠前列腺致炎的方法，
模拟临床慢性非细菌性前列腺炎的急性发作，观察
实验大鼠前列腺组织病变改善情况，检测前列腺组
织中与炎症和疼痛密切相关的炎症因子肿瘤坏死
因子（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、前列腺素E2
（prostaglandin E2，PGE2）的表达，验证分清肾茶片
对前列腺炎的治疗效果并探讨其抗炎镇痛机制。
材料
1. 动物　清洁级健康雄性Wistar大鼠，体质量
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220-240g，由北京维通利华有限公司提供，合格证
号：SCXK（京）2006-0009。
2. 药物　受试药：分清肾茶片（苦参3.75g，肾茶
2.50g，土茯苓3.75g，川牛膝2.50g，丹参2.50g，延胡
索2.50g），4.55g生药/g，由厦门中药厂有限公司提
供，样品批号：110202-B。对照药：前列康又称普乐
安片（成分为油菜花粉），60粒/盒，0.57g/片，由浙江
康恩贝制药股份有限公司提供，产品批号：110841。
3. 试剂　TNF-α免疫组化一抗（北京博奥森生
物技术有限公司提供，货号：bs-2081R）
PGE2免疫组化一抗（北京博奥森生物技术有限
公司提供，货号：bs-2639R）；兔一步超敏（即用型）
检测试剂盒（北 京西雅金桥生物技术有限公司提
供，货号PO-7001）；角叉菜胶（上海晶纯试剂有限公
司，批号：1126650）。
4. 主要仪器　日本OLYMPUS光学显微镜；TGL-
16A台式高速冷冻离心机（长沙仪器仪表有限公
司）。
方法
1．动物分组与给药　动物适应性饲养后，随机
分为空白对照组、模型对照组、前列康组、分清肾茶
片（FQSCP）高、中、低剂量组，共6组。前列康组灌服
前列康水溶液，剂量为0.9g药粉/kg（相当于60kg成人
临床剂量的8倍），FQSCP高、中、低剂量组分别灌服
相应浓度的分清肾茶片中试提取物水溶液，剂量为
1.32、0.66、0.33g/kg，各组动物按1mL/100g体质量灌
胃，空白对照组和模型对照组动物灌服同等剂量溶
剂0.5%羧甲基纤维素（CMCNa），1次/d，连续7d。
2. 模型建立　参考文献[2]造模方法进行造模：
末次给药1h后，大鼠用10%水合氯醛腹腔注射麻醉，
局部消毒后，在大鼠下腹正中切开1.0cm左右的切
口，暴露前列腺，模型对照组、前列康组、分清肾茶
片高、中、低剂量组于前列腺左右两叶各注入含1%角
叉菜胶的0.9%氯化钠溶液0.1mL/只，空白对照组大
鼠相同部位注射同等剂量无菌0.9%氯化钠溶液，注
射后复位前列腺，逐层缝合大鼠腹壁肌肉和皮肤，放
回鼠笼，自由饮食。术后次日灌胃给药1次，药后1h大
鼠腹主动脉取血处死，细心剥离大鼠前列腺组织待
测各项指标。
3. 指标观察
3.1 大鼠前列腺组织病理形态　剪取部分前列
腺用10%多聚甲醛固定，常规脱水，二甲苯透明，石
蜡包埋，切片，HE染色。光学显微镜下主要观察大鼠
前列腺腺体管腔形态、管腔内容物、上皮变性坏死、
炎细胞浸润和纤维组织增生5项形态变化情况。以相
关参考文献[3-4]为依据，按照前列腺腺体病变情况，
将各项形态学变化均分为四级：0级为正常形态，记
作0分；Ⅰ级为轻度病变，记作1分；Ⅱ级为中度病变，
记作2分；Ⅲ级为重度病变，记作3分。其中由于炎症
细胞浸润是前列腺炎最为重要的病理表现，因此在
分级评分中给予双倍权重，即0、Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级评分分
别为0、2、4、6分。最后将各项病理改变评分之和作
为总体评分。
3.2 大鼠前列腺中WBC数量和SPL密度　WBC数
量计数[3]：用电子天平称取大鼠相同部位的部分前列
腺组织，按4μL/mg加无菌0.9%氯化钠溶液研磨，制
成匀浆液。准确吸取0.02mL匀浆液，加WBC稀释液
0.78mL，充分混匀后，用微量移液器吸取10μL混合液
滴至WBC计数池中，静置2-3min后，显微镜下计数四
角4个大方格内的WBC总数。WBC数/μL=4个大方格
内WBC数/4×稀释倍数×10（÷4表示0.1mm3内WBC均
数，×10表示1mm3内WBC均数）；各组大鼠前列腺SPL
密度观察：取10μL匀浆液涂片，镜下观察SPL密度，并
按临床标准分级[3]：4级：SPL满视野；3级：SPL 3/4视
野；2级：SPL 1/2视野；1级：SPL 1/4视野。
3.3 大鼠前列腺组织中TNF-α、PGE2表达　使
用免疫组化辣根酶（HRP）标记抗体的方法观测各
组织大鼠前列腺组织中的TNF-α、PGE2的阳性表
达。步骤如下：①石蜡切片二甲苯脱蜡至水。②蒸
馏水冲洗，采用高压法修复抗原150s，后自然冷却。
③3%H2O2室温孵育5min，以灭活内源性过氧化物酶
活性。PBS冲洗，2min×3次。④滴加适当比例稀释的
一抗，4℃冰箱过夜。⑤PBS冲洗，2min×3次，滴加二
抗，37℃孵育30min。⑥PBS冲洗，2min×3次，显色剂
显色（DAB）。⑦自来水充分冲洗，苏木素复染，酒精
脱水，二甲苯透明，封片。⑧显微成像系统中拍片，每
剂量组显色组织切片40倍物镜，10倍目镜下随机选
取8个视野进行拍照存档，测量时使用Image-Pro Plus
进行图像分析，以前列腺组织阳性呈色区域IOD和
Area为有效测量指标计算平均光密度值，平均光密度
值=IOD/Area。
4. 统计学方法　运用SPSS 16.0进行统计分析，其
中计量资料运用方差分析检验，以x-±s表示；等级资
料采用非参数检验方法，以平均秩次（Mean Ranks）表
示。以 P<0.05为差异具有统计学意义。
结果
1. 分清肾茶片对角叉菜胶致非细菌性前列腺炎大
鼠前列腺病理形态的影响 见图1，表1。病理形态结
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果显示，空白对照组大鼠前列腺腺体松散分布，腺上
皮表面有很多皱襞，呈乳头状向腺腔内突出，腺腔内
可见大量粉染分泌物，间质疏松，无或少有炎细胞浸
润，纤维量少。模型对照组大鼠腺体极度扩张，腺腔
内大量炎细胞浸润，腺上皮脱落、坏死，间质充血水
肿，大量炎细胞浸润，纤维组织增生明显。各治疗组均
能不同程度改善模型大鼠前列腺病理形态学改变。
其中前列康组、分清肾茶片高、中剂量能显著性减少
大鼠前列腺中的WBC数量（P<0.01，P<0.001）。结果
见表2。
表2　分清肾茶片对角叉菜胶致前列腺炎大鼠前列腺组织WBC
和SPL的影响（x-±s，n=10）
组别 WBC数目（/μL）
SPL密度分级
+ ++ +++ ++++ Mean Ranks
空白对照组 14 960.00±2 761.72*** 0 2 3 5 39.95
模型对照组 29 270.00±8 110.90 5 4 1 0 15.15
前列康组 21 570.00±5 550.39** 3 2 1 4 30.05
FQSCP高剂量组 15 550.00±3 301.94*** 1 2 2 5 37.20
FQSCP中剂量组 22 480.00±4 222.11 ** 1 2 4 3 33.90
FQSCP低剂量组 24 880.00±5 574.70 3 2 3 2 26.75
注：与模型对照组比较，**P<0.01，***P<0.001。下表同。
3. 分清肾茶片对角叉菜胶致非细菌性前列腺炎
大鼠前列腺组织中TNF-α、PGE2的影响 与模型对
照组比较，分清肾茶片高、中剂量能显著降低大鼠前
列腺中TNF-α光密度值，差异有统计学意义（P<0.01，
P<0.001）；分清肾茶片高、中、低剂量能显著降低大
鼠前列腺中PGE2光密度值，与模型对照组比较，差
异有统计学意义（P<0.01，P<0.001）。结果见表3。
表3　分清肾茶片对角叉菜胶致前列腺炎大鼠前列腺组织中
TNF-α、PGE2的影响（x-±s，n=8）
组别 TNF-α平均光密度
PGE2
平均光密度
空白对照组 0.230±0.064*** 0.168±0.042***
模型对照组 0.324±0.036 0.284±0.044
前列康组 0.240 ±0.064** 0.224±0.015**
FQSCP高剂量组 0.210±0.033*** 0.224±0.022**
FQSCP中剂量组 0.239±0.029** 0.209±0.031***
FQSCP低剂量组 0.316±0.300 0.225±0.026**
讨论
慢性前列腺炎病因及发病机制复杂，目前主要通
过综合分析患者的临床症状、体格检查结果、尿液及
前列腺按摩液常规检查等结果进行诊断和分型[5]，其
中前列腺液中WBC数量和SPL密度分级在临床中常用
来判断前列腺是否存在炎症以及炎症的严重程度，并
通过治疗前后WBC计数的减少及SPL的增加来评价
疗效。本实验结果显示，分清肾茶片能够显著性降低
大鼠前列腺组织中的WBC含量，同时升高SPL密度，并
能够明显改善角叉菜胶诱发的实验性非细菌性前列
腺炎大鼠前列腺病理形态改变，证明分清肾茶片具有
明显的抑制前列腺炎的作用。
表1　分清肾茶片对角叉菜胶致前列腺炎大鼠前列腺病理形态
的影响（Mean Ranks，n=10）
组别
管腔
形态
管腔内
容物
上皮变
性坏死
炎细胞
浸润
纤维组
织增生
总分
空白对照组 8.65 12.75 12.25 14.50 5.50 5.95
模型对照组 40.25 39.00 45.40 42.65 43.50 46.05
前列康组 29.70 30.75 31.50 30.45 26.00 29.10
FQSCP高剂量组 32.25 30.75 28.75 20.15 28.50 21.70
FQSCP中剂量组 32.25 33.50 26.00 34.25 38.50 34.45
FQSCP低剂量组 39.90 36.25 39.10 41.00 41.00 45.75
注：各组大鼠评分之间比较差异有统计学意义（P<0.01）。
图1 各组大鼠前列腺病理形态（HE×100）
注：A.空白对照组；B.模型对照组；C.前列康组；D.FQSCP高剂量
组；E.FQSCP中剂量组；F.FQSCP低剂量组。
A B
D
FE
C
2. 分清肾茶片对角叉菜胶致非细菌性前列腺炎
大鼠前列腺组织中WBC和SPL的影响 模型对照组大
鼠较空白对照组大鼠前列腺组织中WBC显著性增多，
具有极显著性差异（P<0.001），SPL密度显著性降
低。与模型对照组相比，各治疗组均能不同程度降低
模型大鼠前列腺组织中的WBC数量，提高SPL密度，
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炎性表现和疼痛是慢性前列腺炎的典型临床症
状，TNF-α、PGE2对疾病过程中炎症和疼痛症状的
发生和发展具有重要作用，Alexander R B等[6]研究发
现，TNF-α含量在慢性前列腺炎患者前列腺液中明
显升高。TNF-α作为一种重要的促炎症细胞因子，能
够诱导上皮细胞及淋巴细胞表达多种黏附分子，诱
导趋化因子产生，介导炎性细胞向炎症局部聚集，造
成炎症、纤维细胞增生、组织损伤等病理变化[7]。另
外TNF-α能够提高中性粒细胞的吞噬能力，增加超
氧阴离子产生，使细胞毒作用（ADCC）增强；TNF-α
还能够通过活化单核细胞和巨噬细胞，使其杀伤活
性提高，增强LAK细胞、T细胞、NK细胞及TIL的细
胞毒活性，释放超氧和NO，产生IL-1、IL-6、IL-8等
细胞因子[8]，使炎性反应进一 步扩大。
TNF-α除了能够引起炎症的发生、扩大还与
疼痛密切相关。通过环加氧酶途径，TNF-α可以诱
PGE2的合成，PGE2浓度仅达到105mol/L即可直接致
痛，到达108mol/L时可增强组织对缓激肽、白三烯、P
物质等致痛物质的敏感性。镇痛因子β-内啡肽（β-
EP）能够减轻炎症部位的疼痛，而高浓度的PGE2却
具有抑制前列腺组织中的免疫细胞产生β-EP的作
用，从而抑制β-EP抑制疼痛的功能[9]。PGE2除造成
疼痛外，还具有极强的致炎作用，主要通过对其他
炎性介质如组胺的作用造成局部炎症水肿[10]，而炎
症和水肿同时又是前列腺炎尿路刺激症状产生的重
要原因[11]。神经生长因子（NGF）参与炎性疼痛和痛
觉敏感化的形成，TNF-α还能通过作用于神经胶质
细胞引起NGF的升高，NGF又可以反过来刺激炎性介
质、细胞因子产生，形成正反馈调节[12]。
传统中医古籍中并没有关于慢性前列腺炎的记
载，根据其临床表现推断，多数医家认为慢性前列腺
炎属中医“精浊”范畴，为精室之疾[13]。精室位居下
焦，具有贮藏精液、生育繁衍功能。前列腺炎多发于
成年男性，或因性欲旺盛，所愿不遂，或因劳逸失度，
房室不节，或因饮食失节，恣食醇酒及辛辣之物等不
良因素刺激或因患者素体亏虚，外感湿热导致精室之
精藏泄失度，败精瘀阻，阻碍气血运行，蕴久化热，前
列腺长期充血，瘀血难消，最终形成湿热浊毒瘀滞精
室之证，治疗当以清热解毒利湿、理气活血化瘀为主。
分清肾茶片是由苦参、丹参、肾茶、延胡索、土茯苓、
川牛膝组成的口服片剂，方中以苦参、肾茶、土茯苓
清热解毒，除湿利尿药为主，使湿热去，浊毒解，淋浊
清；辅以丹参、川牛膝活血通经，延胡索活血行气止
痛，使瘀血散，肿痛消，气血行，全方共奏清热解毒，
活血止痛，利湿通淋之功。综合全方，分清肾茶片与慢
性前列腺炎湿热浊毒瘀滞精室病机环环相扣，用治湿
热下注，气滞血瘀型慢性前列腺炎。
现代药理研究证明分清肾茶片中苦参、肾茶、土
茯苓、川牛膝均有不同程度的抗炎作用；延胡索、土
茯苓、川牛膝对疼痛均有抑制作用。苦参，味苦性寒，
具有清热燥湿功效，含有大量生物碱及黄酮类化合
物，药理研究表明：氧化苦参碱能通过影响机体的抗
体水平、免疫细胞的变化、细胞因子及其他炎性调节
因子发挥其抗炎作用，对多种致炎剂所引起的炎症反
应有明显的抑制作用[14]；黄酮类成分槐黄烷酮对小鼠
巴豆油所致耳廓肿胀和大鼠角叉菜胶所致足趾肿胀
显示抗炎活性。肾茶，味苦，性凉，功能清热除湿，散
结止痛，药理研究表明[15]：肾茶能够明显抑制巴豆油
诱发的小鼠耳壳肿胀，其抗炎作用可能与其化学成分
迷迭香和熊果酸有关；土茯苓甘淡性平，功能清热解
毒，药理研究表明[16]：土茯苓注射液能够明显抑制皮
下注射右旋糖酐导致的大鼠足肿胀，还能明显抑制
二甲苯所致的小鼠耳壳肿胀和蛋清所致的小鼠足趾
炎症反应。川牛膝苦、甘、酸、平，归肝、肾经，能够导
热下泄，引火下行，药理研究表明[17]：川牛膝能够明显
抑制大鼠蛋清性足肿胀，具有明显抗炎作用。延胡索
辛散温通，为活血理气止痛之良药，被誉为中药中的
“吗啡”，药理研究表明[18]：延胡索提取液能够明显
抑制醋酸致小鼠扭体次数、提高热板法实验中小鼠
痛阈值，其中延胡索乙素为延胡索镇痛最强的有效成
分。土茯苓注射液能够明显减少冰醋酸导致的小鼠扭
体次数，起效成分可能是其主要化学成分落妇新苷。
川牛膝既能活血祛瘀，又能补肝肾，强筋骨，可以用治
肝肾亏虚所致腰腿疼痛，药理研究表明[19]：川牛膝主
要化学成分牛膝皂苷对醋酸致小鼠疼痛模型、热刺激
致小鼠疼痛模型有明显镇痛作用，且其镇痛作用与剂
量呈现一定的量效关系。
综上所述，结合传统中医理论与现代药理研究
分析，分清肾茶片具有热清解毒利湿、活血祛瘀止痛
功效，方中药味具有抗炎镇痛的药理作用。本实验
研究表明本品对前列腺炎大鼠有明显的 治疗作用；
减少促炎症细胞因子TNF-α异常表达，抑制炎症细
胞因子级联反应进一步扩大，减少刺激具有 致痛致
炎作用的PGE2和其他炎性细胞因子的产生，有可能
是该药物治疗慢性前列 腺炎的机制之一。
参 考 文 献
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（收稿日期：2013年3月26日）