全 文 ：中药新药与临床药理2005年9月第16卷第5期
机体免疫与肿瘤关系的认识,随着肿瘤研究的深 入和相关学科的发展而逐渐加深。关于免疫的监视作
罗勒胶囊对小鼠脾细胞产生IL-2和IFNγ能力的影响
张 丹 1,曲 迅 2,郑广娟 1,张 静 1,夏丽英 1(1.山东中医药大学中西医结合肿瘤防治技术实验室,济南
250014;2.山东大学齐鲁医院,济南 250012)
摘要: 目的 探讨罗勒胶囊对小鼠免疫功能的影响。方法 用罗勒胶囊含药血清孵育小鼠脾细胞而诱生 IL-2和
IFNγ,利用IL-2依赖株CTLL-2和IFNγ敏感细胞L929细胞,采用MTT法检测含药血清作用后小鼠脾细胞产生
IL-2和IFNγ的能力。结果 罗勒胶囊血清大、中剂量组及香菇多糖 (LNT)组能显著提高小鼠脾淋巴细胞IL-2
产生能力,与生理盐水对照组比较,P<0.01,但罗勒胶囊大、小剂量组作用不如香菇多糖 (P<0.05,P<0.01);
罗勒胶囊血清大、中剂量组及香菇多糖 (LNT)组能显著提高小鼠脾淋巴细胞IFNγ产生能力,与生理盐水对照组比
较,P<0.01。结论 罗勒胶囊能促进IL-2和IFNγ的产生,增强机体的免疫功能。
关键词:罗勒胶囊;血清药理学;白介素2;干扰素;免疫功能
中图分类号:R285.5 文献标识码:A 文章编号:1003-9783(2005)05-0348-03
减少(P< 0.05),脑血管灌流量提高率(与5-HT
组比)分别为34.8%和72.1%。
3讨论
偏头痛的确切发病机理目前尚不清楚,先后有人
提出血管源性和神经性两种学说,目前更倾向于三叉
神经血管学说[2]。神经血管学说认为,过多的内、外
刺激可引起血管扩张;当血管扩张时,伤害性刺激促
使三叉神经末梢释出血管活性肽类物质,如P物质、
钙基因相关肽及神经激肽,引起神经性炎症。血液中
的 5-HT对血管有收缩和扩张双重作用,通常使大
血管收缩、小动脉及毛细血管扩张,它是脑循环中最
强烈的血管收缩胺[3]。许多研究提示,5-HT与偏头
痛的发病有较密切的联系,它致大血管的异常收缩和
致小血管的异常扩张作用 (影响脑血流量)可以导致
偏头痛的发生[4,5]。
偏头痛属于中医 “头痛”、 “头风”范畴。痰、
瘀、气滞或郁火乃本病之祟,根据中医气血理论,气
为血帅,血为气母,气行顺畅则血也和畅,气逆而郁
则血也凝滞而成瘀致痛。因此,药物治疗主要包括活
血祛瘀法、祛风止痛法、调理肝胆法等[6]。芎附正天
软胶囊处方源自 《百一选方》,香附与川芎伍用;方
中川芎辛散温通,行血中之气;香附辛散苦降甘缓,
性平无寒热之偏,为治气滞证的主药,两药共用,气
血并调,共奏理气解郁,活血止痛之功。
芎附正天软胶囊由上述两味药材经二氧化碳超临
界萃取法提取的挥发油成分制成。本制剂的电刺激致
痛试验结果可以有效地反映药物的镇痛作用;两种给
药途径的福尔马林法试验均显示该制剂可同时抑制福
尔马林所致的Ⅰ相和Ⅱ相疼痛反应,提示该制剂可能
具有阿片样镇痛机制;颈总动脉注射 5-HT可明显
降低脑血管灌注量,受试物可提高该模型动物脑血管
的灌注量,而对正常动物脑血管的灌注量无影响,提
示调节异常的脑血管舒缩状态或脑血管灌注量可能是
芎附正天软胶囊镇痛作用的部分机制。
参考文献:
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(编辑:龙维富)
收稿日期:2005-03-12
作者简介:张丹(1971-),女,讲师,硕士,主要从事中西医结合抗肿瘤转移的研究。
基金项目:山东省科学技术发展计划资助项目(编号031040101)。
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中药新药与临床药理2005年9月第16卷第5期
用及 T细胞识别等细胞免疫研究有了重大突破,针
对肿瘤侵袭转移的分子免疫学研究认为,肿瘤的转
移,特别是肿瘤远处转移的关键是少数肿瘤细胞穿越
拥有大量免疫监视细胞的循环系统进入新的脏器,这
是一个典型的免疫逃逸现象。我们就其中与抗肿瘤作
用密切相关的干扰素(IFNγ)和白介素 2(IL-2)
进行实验研究,以观察抗肿瘤转移药物罗勒胶囊对小
鼠脾细胞产生 IL-2和 IFNγ 能力的影响,以进一
步阐明其抗肿瘤转移作用的机理。
1材料与方法
1.1材料
1.1.1动物 昆明种小鼠,雌性,体重 22～28g,
由山东大学实验动物中心提供。
1.1.2药物 罗勒胶囊,山东省中医药大学中西医
结合肿瘤防治技术实验室提供。
1.1.3细胞株 CTLL-2(IL-2依赖株),IFNγ敏感
细胞L929细胞,均购自上海第二军医大学免疫学教
研室,本室常规传代培养。
1.1.4试剂 HEPES(N-2-hydroxyethlPiperazine
-N-2-ethanesulfonicacid)及 1640粉末为美国
GIBCO产品 ;四甲基偶氮唑盐(3-4,5-diphenyl-
2,5-tetrazoliumbromide,MTT),Sigma公司;香菇多
糖(LNT),上海通惠生物制品有限公司。
1.2方法
1.2.1 分组及药物血清制备 将小鼠分成罗勒胶
囊大、中、小剂量组 (分别含生药量 5, 2.5,
1.25mg/kg),生理盐水对照组与香菇多糖(LNT)
对照组。罗勒胶囊组小鼠每日灌胃 1次,连续 14d;
生理盐水对照组每日给予等量的生理盐水;LNT对
照组每日腹腔注射 LNT(5mg/kg)1次,连续 14
d。以上各组于最后 1次给药后 1h在无菌条件下剖
腹,下腔静脉取血,离心分离血清(简称罗勒血清),
经56℃、30min灭活,冻存备用。
1.2.2脾淋巴细胞的制备 颈椎脱位法处死小鼠,
无菌取小鼠脾脏制成单细胞悬液,用 Hank′s液洗涤
细胞 2次后将细胞悬浮于完全 1640培养液中,调细
胞浓度至5×106/mL。
1.2.3细胞因子的诱生 于 24孔板内加入浓度为
5×106/mL的脾细胞2mL,与等体积的1∶4稀释的
药物血清共同孵育 48h,将培养上清吸出测定结果。
1.2.4IL-2检测 MTT法取对数生长期的CTLL-2
细胞,调至5×105/mL,96孔板每孔加 100μL,加
100μL待测样品及标准IL-2,设 3个复孔, 37℃、
5%CO2孵育 24h,吸出 100μL培养液,加 100μL
MTT(1mg/mL),继续培养 4h,加入 10%NP-40
100μL。混合均匀透明后,测OD570nm值。
1.2.5IFNγ 的检测 用 PRMI1640完全培养液调
整 L929细胞浓度至 2×108/mL,每孔加入 50μL
L929细胞,加入待检样品及标准品 50μL,充分混
合后,37℃ 、5%CO2过夜,将培养上清吸出,用
PRMI1640稀释病毒VSV,每孔加入100μL,37℃、
5%CO2孵育 24h,在倒置显微镜下观察细胞状态。
吸掉培养上清,每孔加100μLHank′s在振荡器上
振荡15s,弃上清及碎片,加入100μLMTT作用 4
h时,加入 100μL10%NP40μL,10min后测
OD570nm值。
2结果
罗勒胶囊大、中剂量组及香菇多糖(LNT)组能
显著提高小鼠脾淋巴细胞 IL-2产生能力,与生理
盐水对照组比较,P<0.01,但大剂量组与小剂量
组作用不如香菇多糖 (P<0.05,P<0.01);罗
勒胶囊大、中剂量组及香菇多糖组能显著提高小鼠
脾淋巴细胞 IFNγ 产生能力,与生理盐水对照组比
较,P<0.01,见表1。
表1对小鼠脾细胞产生IL-2和IFNγ能力的影响 (x±s,n=10)
注:与生理盐水组比,*P<0.05,**P<0.01;与香菇多糖组
比,△P<0.05,△△P<0.01。
3讨论
IL-2是免疫系统的重要因子,在特异性免疫调
节中处于中心统筹地位。IL-2不仅可增强 NK及
LAK细胞等非特异的免疫反应,而且可增强MHC限
制性的特异的CTL反应[1]。IL-2本身具有抗癌作用,
还可能通过诱生其他细胞因子(TNF,IFNγ 等)而
产生抗癌效应;IL-2可活化血管内皮细胞,促进 T
细胞表面黏附分子的表达,从而有助于 T细胞迁移
到肿瘤局部,更有效的诱导抗肿瘤免疫及介导肿瘤
杀伤[2]。许多动物实验证明,IL-2能抑制实验动物的
肉瘤、腺癌的肝和肺转移[3-5]。
IFNγ是活化的T淋巴细胞产生的一种具有多潜
能的细胞因子,对免疫系统具有重要的调节作用,它
分 组
罗勒大剂量组
罗勒中剂量组
罗勒小剂量组
LNT组
生理盐水组
剂量/mg·kg-1
5.00
2.50
1.25
5.00
-
IL-2/U·L-1
10.16±2.35**△
12.51±3.08**
3.49±1.02△△
15.05±3.82**
8.79±5.47*
IFNγ/U·L-1
122.77±18.52**
134.02±15.48**
31.60±3.32
141.57±20.79**
28.94±5.79
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中药新药与临床药理2005年9月第16卷第5期
不仅能有效地激活巨噬细胞 (Mφ)[6],还能维持
CTL细胞的分化[7],它除了对多种肿瘤细胞具有一定
的直接杀伤和抑制效应外,还可以通过诱导机体产生
抗肿瘤免疫功能而发挥抗肿瘤作用[8];IFNγ 还可降
低血管内皮细胞对VEGF、bEGF等血管形成因子的表
达,减少肿瘤新生血管的形成而抑制肿瘤的生长和转移[9]。
实验发现IFNγ可有效地抑制肿瘤转移[10-12]。现在临
床以IL-2与IFNγ联合应用抗转移收到很好效果[13]。
实验结果表明,罗勒胶囊可提高 IL-2和 IFNγ
水平,增强机体的免疫功能,起到抗肿瘤转移的作
用。但是,可提高机体免疫功能的药物不一定都具有
抗肿瘤转移的作用,其抗肿瘤转移的作用机理还有待
更进一步研究。
参考文献:
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(编辑:梁进权)
收稿日期:2005-03-23
作者简介:谢雁鸣(1959-),女,研究员,博士生导师,从事临床老年病学及临床评价方法学研究。
基金项目:国家 “九五”科技攻关重大疾病课题 (编号96-906-09-04)。
骨碎补中柚皮苷大鼠体内药-时过程研究
谢雁鸣 1,邓文龙 2,洪 诤 3 (1.中国中医研究院西苑医院,北京 100091;2.四川省中药研究所,成都 610041;
3.四川大学,成都 610041)
摘要:目的 初步研究骨碎补中柚皮苷的体内药-时过程。方法 通过色谱条件的优化,建立反相高效液相色谱法,
测定大鼠血清和组织中柚皮苷的含量。结果 骨碎补总黄酮灌胃给药,柚皮苷于30min已经开始吸收,90min达到
高峰,于灌胃后4h血药浓度明显下降,至 8h仍保持有一定血药浓度。组织中的浓度以胃、肠为最高,但下降迅
速;其次肝、肺、肾较高,肌肉、脂肪也有一定分布,脑组织含量甚低。结论 该方法简便、灵敏、快速,不受其
他杂质的干扰,适用于大鼠血清和组织中柚皮苷的测定。骨碎补总黄酮灌胃给药,柚皮苷的吸收较慢,能在血中保
持较长时间,消失也比较慢。
关键词:骨碎补;总黄酮;柚皮苷;高效液相法;药物动力学
中图分类号:R285.6 文献标识码:A 文章编号:1003-9783(2005)05-350-03
StudyonDrug-TimeProcessofOsteopracticAurantininRhizomaDrynariae
XIEYanming1,DENGWenlong2,HONGZheng3(1.XiyuanHospital,ChineseAcademyofTCM,Beijing100091;
2.SichuanInstituteofTCM, Chengdu640041; 3.SichuanUniversity, Chengdu640041)
Abstract: Objective Tostudythedrug-timeprocessofaurantininRhizomaDrymariaeinvivo.Methods Bytheopti-
350