全 文 ：凉粉草（Mesona chinensis Benth.），又名仙草、仙人草、仙人
冻、薪草，为唇形科凉粉草属一年生草本植物[1]。在中国大陆主
产于广东、福建、广西等省份，台湾南部有较多分布，在印尼和越
南有广泛分布和较大产量。
国家卫生部在2010年3月发布公告，允许凉粉草（仙草Mes-
ona chinensis Benth.）作为普通食品生产经营[2]，这意味着凉粉草
被列入中国药食同源植物目录。
自古以来，在广西、广东、福建、台湾及东南亚区域，民众都
有在夏天饮用以凉粉草熬煮得到的仙草汁饮料或制成的凝冻甜
点的风俗习惯，仙草制品成为民间最佳消暑良品之一。
凉粉草同时还是凉茶饮料的主要原料，市面上流行的包装
凉茶饮料品牌，例如王老吉、加多宝、和其正、杨协成及晨光等品
牌凉茶饮料配料表中都含有凉粉草（仙草）成分。
由凉粉草为主要原料制成的仙草冻和龟苓膏等中式传统甜
点深受广大消费者喜欢，在华南、港台区域及东南亚国家很流
行。
干凉粉草含有约 70％碳水化合物及蛋白质、氨基酸、脂肪、
维生素、色素、酚类、三萜酸、黄酮、多糖等营养成分，同时含有
钙、锌、铁、锰、钾等矿物质元素。
苯甲酸作为一种天然有机酸化合物，在自然界植物成分中
广泛分布，是植物的活性成分之一[2]，例如半夏、马齿苋、红芽大
戟、白蒺藜、板蓝根[4-8]等中药材中均含有天然苯甲酸成分。有文
献[9]报道板蓝根中含有的苯甲酸等有机酸成分具有有较强抗内
毒素活性。
关于凉粉草中天然成分的研究已经发表过多篇文献[10-13]，主
要是对凉粉草中黄酮类、多糖、色素等开展广泛研究，但未见对
凉粉草中苯甲酸含量测定的报道。
苯甲酸的测定方法有气相色谱法[14，15]、液相色谱法[16，17]、液相
色谱-串联质谱法[18，19]等，但都是对食品中添加的苯甲酸进行测
定，对植物中本身含有的苯甲酸进行测定的方法鲜有报道。
本文通过优化凉粉草中苯甲酸的提取方法，用高效液相色
谱对凉粉草中的苯甲酸含量进行测定，表明凉粉草中天然含有
微量有机酸——苯甲酸，对凉粉草食疗机理深入研究和资源进
一步科学开发利用具有积极意义。
1 实验部分
1.1 仪器和试剂
Agilent 1200型高效液相色谱仪（配有紫外检测器，美国Ag-
ilent 公司）；Milli-Q Reference超纯水器（美国Millipore公司）；
PHS-3C型精密PH计（上海雷磁仪器厂）；KQ-400DB型数控超声
波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；Anke DL-5-B型离心机
（上海安亭科学仪器厂）。
标准品：苯甲酸（1.00mg/L，购自中国计量科学研究院）；甲
醇（色谱纯，美国Fisher公司）；其余试剂均为分析纯。
1.2 色谱条件
色谱柱：ZORBAX Eclipse XDB- C 18（5µm，4.6mm i.d. ×
250mm）；流动相：V（甲醇）∶V（20 mmol/L的乙酸铵溶液）= 5∶
95；流速：1.0 mL/min；柱温：40 ℃；进样量：10μL；检测波长：230
nm。样品测定采用色谱峰的保留时间定性，峰面积定量。
1.3 标准工作液
准确移取一定量的标准溶液，用水配制浓度为0.2、0.5、1.0、
2.0、5.0、10.0mg/L的标准系列。
1.4 样品制备
称取0.50g凉粉草试样，置于50mL离心管中。加入0.6%氢
氧化钠溶液30mL，混匀，浸泡30min，再于40℃超声提取40min，
4000rpm离心10min，将上清液转移至50mL烧杯中，用1+1的盐
酸溶液调节 pH至约 7.0，转移至 50mL容量瓶中，用水定容至刻
度。过0.45µm滤膜，待测。
【个人简介】郑玲（1972-），女，硕士，高级工程师，研究方向：食品中农药、兽药、食品添加剂检测。
高效液相色谱法测定凉粉草中的苯甲酸
郑 玲 1 ，杨 健 2 ，吕 春 秋 1 ，刘 军 义 1 ，莫 伟 媛 1 ，马 燕 娟 1
（1.广西出入境检验检疫局技术中心，广西 南宁 530021；2.桂林聚果园果汁有限公司，广西 桂林 541000）
【摘 要】 建立凉粉草中天然含有苯甲酸的高效液相色谱测定方法。通过对提取液的种类、提取液的浓度、提取时间和温度
进行优化，得到最佳提取条件为：凉粉草样品经0.6%的氢氧化钠溶液浸泡 30min后，在40℃下超声提取40min。离心后，用1+1的盐
酸调节提取液pH至约7.0，用液相色谱进行测定。色谱柱为ZORBAX Eclipse XDB-C18（5 μ m，4.6mm i.d.×250mm），以V（甲醇）∶V
（20mmol/L的乙酸铵溶液）= 5∶95为流动相，紫外检测器测定，检测波长230nm。该方法在0.2~10mg/L范围内呈良好线性关系，相关
系数为 1，定量限（S/N≥10）为 20mg/kg，在 100mg/kg、500mg/kg加标水平下的回收率均为 93%，相对标准偏差小于 3.9 %。实际检测
样品结果表明，本方法准确、简单、快速，适用于凉粉草中苯甲酸含量的测定，同时为其他植物中天然苯甲酸含量的测定提供参考。
【关键词】 凉粉草；苯甲酸；高效液相色谱
【中图分类号】 R927 【文献识别码】A 【文章编号】2095-3518（2013）06-09-02
2013年6月
第6期（总第175期）
轻工科技
LIGHT INDUSTRY SCIENCE AND TECHNOLOGY 食品与生物
9
2 结果与讨论
2.1 提取条件的优化
食品中苯甲酸的测定方法中，由于所添加的苯甲酸钠在水
中溶解度较大，常用的提取溶剂是水，但凉粉草中的苯甲酸是天
然含有，非人为添加，因此提取溶剂的选择、提取液浓度、提取时
间、提取温度等因素对凉粉草中天然苯甲酸的提取效率均有一
定的影响。
鉴于苯甲酸是一种有机酸和在水中溶解度不高等特性，本
实验选用水和碱性溶液进行提取，比较了水、1.0%碳酸氢钠溶
液、1.0%碳酸钠溶液、1.0%氢氧化钠溶液的提取效果。
结果显示：水和 1.0%碳酸氢钠溶液只能提取凉粉草中约
25%苯甲酸，1.0%碳酸钠溶液提取率约为80%，1.0%氢氧化钠溶
液提取最完全。
因此，选择提取溶剂为1.0%氢氧化钠溶液，不同的溶剂提取
结果有明显差异，提取溶剂的正确选择是本实验的关键步骤。
提取温度升高，溶剂分子的热运动增强，有利于提高组分的
扩散速度，同时减小了溶剂的表面张力和粘度，使提取物的渗透
能力增强，并迅速达到扩散平衡，从而提高提取效率。以1.0%氢
氧化钠溶液为提取剂，比较了提取温度为室温（约30℃）、40℃、
60 ℃、75 ℃时的提取效果。结果显示，温度对苯甲酸的提取有
一定的影响，40 ℃以后，提取趋向平衡，因此，选择提取温度为
40℃。
氢氧化钠溶液浓度的高低，对后面的调节pH值步骤有一定
的影响，浓度高，则需要的盐酸溶液较多，且调节时间较长。分
别以0.2%、0.4%、0.6%、0.8%、1.0%的氢氧化钠溶液为提取剂，在
40℃提取。结果显示，提取液浓度对提取结果的影响较小，最低
值与最高值相差不超过10%，但提取液浓度大于0.6%以后，提取
结果趋于稳定，因此，选择提取液浓度为0.6%。
由于是提取植物中天然含有的苯甲酸，提取时间太短则提
取不完全，提取时间长会延长实验时间。在以上优化条件下，比
较了提取时间分别为 20、40、60、80min时的提取效果。结果显
示，超过40min以后，提取结果无明显增加，因此，选择提取时间
为40min。
2.2 色谱柱的选择
由于凉粉草样品基体比较复杂，且本方法前处理比较简单，
色谱柱的正确选择对于苯甲酸的有效分离非常重要。本研究比
较样品在 ZORBAX Eclipse XDB-C18（5µm，4.6mm i.d×250mm）
和ZORBAX SB-Aq（5µm，4.6mm i.d.×250mm）两种色谱柱上的
分离效果。
结果显示：使用ZORBAX SB-Aq柱时，苯甲酸出峰较快，待
测物前后均有干扰峰，难以准确定量。使用 ZORBAX Eclipse
XDB-C 18柱时，待测物峰与干扰峰分离较好。因此，选用ZORB-
AX Eclipse XDB-C 18柱进行分析检测。凉粉草样品在不同色谱
柱上的液相色谱图见图1、图2。
图1 凉粉草样品在ZORBAX Eclipse XDB-C18柱的液相色谱图1-苯甲酸
图2 凉粉草样品在ZORBAX Eclipse XDB-C18柱的液相色谱图1-苯甲酸
2.3 线性范围、定量限、回收率与精密度
分别吸取苯甲酸标准系列 10µL在给定条件下进行测定。
以峰面积（y）为纵坐标，浓度（x，mg/L）为横坐标绘制工作曲线，
得苯甲酸的线性方程为y=31.545x-0.498、相关系数为1。
结果表明：苯甲酸在浓度 0.2~10.0mg/L范围内呈良好线性
关系。以10倍信噪比S/N=10为定量限，结合样品的称样量和最
终定容体积，得凉粉草中苯甲酸的定量限为20.0mg/kg。
在凉粉草样品中添加水平为 100mg/kg和 500mg/kg进行加
标回收实验，样品和每个添加水平均平行处理测定6个样，计算
回收率和相对标准偏差，结果见表1。
表1 样品中苯甲酸的加标回收率及相对标准偏差（n=6）
Added w/(mg.kg-1)
0
100
500
Found w/(mg.kg-1)
120，131， 19，122，119，122
201，220，218，221，217，215
581，587，586，585， 87，583
Recovery R/%
93
93
SD sr/%
3.90
3.40
0.39
2.4 实际样品的测定
取凉粉草样品 7个，用本实验方法进行测定，结果分别为：
94、110、109、138、113、78、117mg/kg。结果表明，凉粉草样品中
均含有一定量的天然苯甲酸。
3 结论
本研究用液相色谱法检测到凉粉草中天然含有苯甲酸，并
建立凉粉草中苯甲酸的高效液相色谱定量测定方法。因凉粉草
中的苯甲酸为天然含有，而非人为外来添加，苯甲酸能否完全提
取出来是关键。
通过对提取液的种类、提取液的浓度、提取时间和温度进行
优化，得到最佳提取条件为：凉粉草样品经0.6%的氢氧化钠溶液
浸泡 30min后，在40℃下超声提取40分钟；离心后，用1+1盐酸
调节提取液 pH至约 7.0，用液相色谱进行测定。该方法在 0.2~
10.0mg/L范围内呈良好线性关系，相关系数为 1，定量限（S/N≥
10）为 20.0mg/kg，在 100、500mg/kg加标水平下的回收率均为
93%，相对标准偏差小于3.9 %。
本方法准确、简单、快速，适用于凉粉草中天然苯甲酸含量
的测定，同时为其他植物中天然苯甲酸含量的测定提供参考。
参考文献
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谱,2002,20(3):245-248．
（下转第12页）10
试验结果表明，淀粉膜浓度在不低于1.5%时，经处理的鲜切
淮山至试验日起算第5天（表3中第四天）才开始有轻微胀气，比
试验中其他处理要至少晚1天时间，且在后续的2天内胀气增加
不明显，直至第8天（表3中第七天）则胀气加剧、达中度胀气，其
胀气加剧的初始时间比低浓度组要晚2天。1.0%淀粉膜处理的
样品在第二天开始有轻微胀气，第五天时气体增多。空白样品
的在第三天是有轻微的胀气，且在第七天时其胀气程度低于其
他有淀粉膜处理组。
2.3 袋内水汽状况
试验结果表明，淀粉膜处理可减缓淮山水汽的产出。无淀
粉膜处理的样品包装袋内壁在第三天时出现较多水汽，第四天
时有较多水珠，而有淀粉膜处理的样品在第二天开始出现少量
水汽，但直至第七天仍保持着较少水汽。
2.4 质地变化
试验结果表明，淀粉膜处理有利于保质鲜切淮山的质地品
质。无淀粉膜处理的淮山样品在第四天时质地开始软化、至第
六天时软化加剧；除2%淀粉膜处理的样品在第6天时组织有很
轻微的软化并保质至次日不变外，其他浓度淀粉膜处理的淮山
样品的质地在试验观察期内始终保持良好，与试验日比较未发
现明显劣化。
3 讨论
淀粉成膜主要利用了淀粉的凝沉特性[4,5]。由于淀粉是属于
一种部分结晶的天然高聚物，其聚集态结构决定了淀粉可食膜
的性质。直链淀粉分子具有抗润涨性，形成结合区，部分结晶。
支链淀粉则相反，易溶于水，形成的溶液稳定且其粘度高。加热
到一定的温度，直链淀粉与支链淀粉的分子相互接触后融为一
体，变成粘稠的淀粉糊。淀粉糊经过快速的凝沉后，直链淀粉分
子还来不及排列成束状结构，就已经相互结合成凝胶体，支链淀
粉则有助于膜的网络结构的形成。
以可溶性淀粉作为涂膜材料配制成保鲜涂膜剂，与碘化钾、
碘、氢氧化钠相混合配成1.0%、1.5%、2.0%三种不同浓度的溶液
对草莓进行膜处理试验，结果表明用1.5%浓度处理的草莓贮存
5天后，酸度、重量、可溶性固形物含量、维生素C含量的损失度
都明显降低[6]。以超微细化大米淀粉为主要原料制备涂膜液，对
草莓保鲜试验的结果表明，淀粉膜浓度为1.66%时保鲜效果最好
[7]，能形成厚度适宜的膜、有效减少水分散失、阻止病菌侵入，从
而减缓草莓的品质变化。以淀粉为涂膜保鲜材料对番茄保鲜试
验，并定期测定番茄的生理指标，认为2.5%木薯淀粉具有较好的
保鲜效果，木薯淀粉的高交联程度及加入β-环糊精均能提高木
薯淀粉的涂膜保鲜效果等[8]。可见，淀粉的种类来源、性质及果
蔬差异对果蔬保鲜的膜浓度效应具有显著影响。
笔者的以上试验中，以不同感官评价项目评价鲜切淮山保
鲜效果时淀粉膜表现出浓度效应的差异性，又考虑到鲜切淮山
以商品形式向消费者展销时，其褐变、质地等感官品项的变化更
显著影响到消费倾向，建议可按较高淀粉膜浓度处理较为合适。
参考文献
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（上接第10页）
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12