全 文 ：［收稿日期］ 20100704(003)
［基金项目］ 甘肃省中医药科研项目(07-CZK-50)
［通讯作者］ * 景明，教授，从事新药研究开发工作，Tel:0931-
8765459，E-mail:jm@ gszy. edu. cn
藏药湿生扁蕾提取物治疗小鼠溃疡性结肠炎的研究
景明 * ，罗永皎，陈正君，蔺兴遥
(甘肃中医学院，兰州 730000)
［摘要］ 目的:观察藏药湿生扁蕾提取物(GTP)对小鼠实验性溃疡性结肠炎的治疗作用。方法:用三硝基苯磺酸
(TNBS)/乙醇灌肠制作小鼠实验性溃疡性结肠炎(UC)模型，小鼠 ig 给予 GTP(1. 07，2. 14，4. 28 g·kg － 1)，连续 14 d，观察对小
鼠体质量变化、腹泻、结肠黏膜组织形态学及脾脏指数的影响。结果:湿生扁蕾提取物可不同程度地改善由 TNBS 的乙醇溶液
所致 UC 小鼠体质量下降及腹泻症状，显著降低 UC 小鼠大体形态学损伤的肠黏膜粘连及其溃疡分值，明显抑制 UC 小鼠脾脏
肿大。结论:湿生扁蕾提取物对小鼠溃疡性结肠炎有较好的改善作用，能减轻结肠局部的病理性损伤。
［关键词］ 湿生扁蕾;三硝基苯磺酸;溃疡性结肠炎
［中图分类号］ R285. 5 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2011)02-0113-04
Gentianopsis paludosa Extract for Treatment of
Experimental Ulcerative Colitis in Mice
JING Ming﹡，LUO Yong-jiao，CHEN Zheng-jun，LIN Xing-yao
(Gansu College of Traditional Chinese Medicine，Lanzhou 730000，China)
［Abstract］ Objective:Therapeutic effects of the extract from Gentianopsis paludosa on experimental
ulcerative colitis were observed in mice. Method:Experimental ulcerative colitis (UC)was made by trinitrobenzene
sulfonic acid (TNBS)/ ethanol enema in mice. Animals were fed with GTP (1. 07，2. 14，4. 28 g . kg － 1) ig for
continuous 14d. Changes in body weight，diarrhea，histomorphology of colonic mucosa and spleen index of
morphology were observed. Result:The extract from G. paludosa could improve diarrhea and worsening of body
constitution to varying degrees in the animals with UC induced by trinitrobenzenesulfonic acid (TNBS)solution of
ethanol，and significantly alleviate gross morphological damage and intestinal adhesion，improve ulcer scores，and
significantly inhibit spleen enlargement. Conclusion:The extract from G. paludosa of offers beneficial function for
ulcerative colitis in mice，and can reduce pathological damage in colonic tissues.
［Key words］ Gentianopsis paludosa;trinitrobenzenesulfonic acid;ulcerative colitis
湿生扁蕾为龙胆科植物湿生扁蕾 Gentianopsis
paludosa(Mum.)Ma. 的干燥全草，在藏药属于藏茵
陈类，具有清瘟热，利胆，止泻之功效，用于黄疸型肝
炎，肝胆病引起的发烧，感冒，小儿腹泻等。目前在
藏医中广泛用于治疗和预防急慢性肝炎［1］。虽然湿
生扁蕾在民间的药用价值很大，但有关湿生扁蕾的
研究报道并不多，并且多局限于成分分析和对其抑
菌作用的研究［2-4］。对湿生扁蕾提取物对溃疡性结
肠炎治疗方面的研究，目前尚未见报道。本试验应
用三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇诱导的小鼠溃疡性结
肠炎模型，研究藏药湿生扁蕾对实验性溃疡性结肠
炎小鼠体质量、腹泻和粪便隐血、组织损伤形态学及
脾脏指数的影响，为湿生扁蕾的临床用药提供实验
依据。
1 材料
1. 1 动物 SPF 级昆明种小鼠，体重 18 ～ 22 g，雌
雄各半，由甘肃中医学院科研实验中心提供。实验
·311·
第 17 卷第 2 期
2011 年 1 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol. 17，No. 2
Jan.，2011
DOI:10.13422/j.cnki.syfjx.2011.02.006
动物质量合格证 SCXK(甘)2004 ～ 0006。动物颗粒
饲料由北京科奥协力饲料有限公司提供。
1. 2 药品与试剂 醋酸地塞米松片(DXM，浙江仙
居制药有限公司，批号 030224);三硝基苯磺酸
(TNBS，Sigma，批号 042K5002);粪便隐血试剂盒
(西 安 舟 鼎 国 生 物 技 术 有 限 责 任 公 司，批 号
061009);乙醚(分析纯，天津市光复精细化工研究
所，批号 060222)。湿生扁蕾药材采自甘肃省甘南
藏族自治州临潭县冶力关镇，经甘肃省药品检验所
宋平顺主任药师鉴定为龙胆科植物湿生扁蕾 G.
paludosa(Munro)Ma.的干燥全草。
湿生扁蕾提取物(GTP)的制备:称取湿生扁蕾
干燥全草，粉碎，过 3 号筛，加 10 倍量水煎煮 2 次，
每次 1. 5 h，滤过，滤液放冷，离心分离，上清液备用;
药渣加 10 倍量 95%乙醇回流提取 2 次，每次 1. 5 h，
滤过，滤液放冷，离心分离，上清液减压回收乙醇后
与水提液合并，减压浓缩成浸膏，给药前用 0. 5%羧
甲基纤维素钠(CMC-Na)配成 1. 0 g 生药 /mL 的混
悬液。
1. 3 仪器 Primo 高速台式冷冻离心机(德国
Heraeus 公司);R-200 旋转蒸发仪(瑞士 BUCHI 公
司);HH-601 恒温水浴锅(金坛市恒丰仪器厂);
CXT-64-01 电动离心机(北京医疗仪器厂);AE-240
电子天平(梅特勒-托利多仪器上海分公司)。
2 方法［5-6］
2. 1 造模与给药 将小鼠随机分为 6 组，分别为空
白对照组，TNBS 模型组，阳性对照组，GTP 高、中、低
剂量组，每组 12 只，禁食不禁水 12 h，阳性对照组 ig
地塞米松 0. 2 mg·kg － 1，GTP 高、中、低剂量组分别 ig
GTP 8. 8，4. 4，2. 2 g·kg － 1，TNBS 模型组及空白对照
组 ig 等容积生理盐水。1 h 后乙醚轻度麻醉小鼠，
将直径 2 mm 的灌肠器(蘸取少量液体石蜡)从肛门
轻轻插入结肠约 4 cm 处，用注射器注入 2% TNBS
(用 50%乙醇作溶媒)0. 1 mL /只，并保持小鼠水平
状态约 30 s，空白对照组注入 50% 乙醇溶液 0. 1
mL /只。7 d 后再次灌入 1% TNBS(用 50%乙醇作溶
媒)0. 1 mL /只。第 1 次造模后动物连续给药 14 d。
2. 2 GTP 对 UC 小鼠体重的影响 分别于造模前
及造模后隔日称小鼠体质量，观察各组小鼠体质量
变化。
2. 3 GTP 对 UC 小鼠腹泻的影响 腹泻和粪便隐
血的考察于第 7 天造模后 4 h 进行，在连续 6 d 内每
天给药后将各组小鼠单只放入小鼠盒内 3 h，观察各
只小鼠的粪便形状质地，连续观察 6 d。根据下列标
准划分等级评分:0 分，正常粪便;1 分，软粪便;2
分，无定形软便;3 分，无定形水样粪便;4 分，水样或
脓样便。
2. 4 GTP 对 UC 小鼠粪便潜血的影响 将 2. 3 项下
的各组小鼠采用联苯胺法检测小鼠粪便隐血。
2. 5 GTP 对 UC 小鼠结肠组织形态学损伤的影响
第 14 天，给药 2 h 后处死小鼠，取肛门上约 4 cm
的一段结肠，放大镜下观察结肠黏膜损伤情况，参照
表 1 的标准进行评分，并按总分值 = 腹腔粘连分值
+结肠溃疡及炎症分值计算各组总分值;然后测量
结肠自然长度及负荷长度(负荷质量 2 g)，用负荷长
度增加值比自然长度的百分比表示结肠弹性。
表 1 腹腔粘连及结肠溃疡评分标准
评分 腹腔粘连情况 结肠溃疡及炎症
0 无粘连 无明显异常
1 轻度粘连 结肠充血溃疡
2 重度粘连 充血、无溃疡，肠壁明显增厚
3 重度粘连 溃疡处不伴有充血或肠壁增厚(黏膜表面坏死)
4 重度粘连 肠壁有出血点
5 重度粘连 溃疡 1 处，伴有充血、炎症
6 重度粘连 溃疡 2 处，伴有充血、炎症
7 重度粘连 溃疡 2 处以上
8 重度粘连 穿孔 1 处
9 重度粘连 穿孔多于 1 处
10 重度粘连 动物死亡
2. 6 GTP 对 UC 小鼠脾重指数的影响 第 14 天，给
药 2 h 后处死小鼠，分离脾脏，滤纸吸去血液并称
重，计算脾脏指数。
脾脏指数 =脾质量 /体质量 × 100%
2. 7 数据统计学分析 试验结果用 珋x ± s 表示，采
用统计软件 SPSS13. 0 进行单因素方差分析处理，对
大体形态和组织学损伤等级资料采用秩和检验，P <
0. 05 有统计学意义。
3 结果
3. 1 GTP 对 UC 小鼠体重的影响 小鼠 TNBS 的乙
醇溶液灌肠形成溃疡性结肠炎后体重增长缓慢，随
着病程的延长，体重逐渐下降(P < 0. 05 或 P <
0. 01);阳性对照组和 GTP 高、中、低剂量组小鼠体
重的增长明显快于 TNBS 模型组(P < 0. 05 或 P <
0. 01);但阳性对照组，GTP 高、中、低剂量组组间小
鼠体重的变化均无统计意义，见表 2。
·411·
第 17 卷第 2 期
2011 年 1 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol. 17，No. 2
Jan.，2011
表 2 GTP 对 TNBS 所致 UC 小鼠体质量的影响(珋x ± s，n = 12) g
组别
剂量
/ g·kg － 1
造模前
造模后
3 d 5 d 7 d 9 d 12 d
空白对照 － 20. 3 ± 2. 1 22. 4 ± 1. 9 23. 6 ± 2. 7 25. 1 ± 2. 41) 28. 2 ± 2. 52) 30. 2 ± 3. 32)
TNBS 模型 － 20. 1 ± 1. 9 22. 3 ± 2. 2 22. 7 ± 2. 6 22. 1 ± 3. 7 20. 2 ± 3. 3 19. 6 ± 4. 0
醋酸地塞米松 2 × 10 － 4 20. 0 ± 1. 7 22. 7 ± 2. 1 22. 7 ± 2. 9 23. 4 ± 2. 6 24. 9 ± 2. 22) 24. 7 ± 4. 91)
GTP 2. 2 20. 3 ± 1. 8 22. 7 ± 2. 3 23. 9 ± 3. 1 23. 3 ± 3. 3 24. 6 ± 4. 02) 22. 7 ± 3. 41)
4. 4 20. 8 ± 1. 6 22. 0 ± 1. 9 22. 4 ± 3. 3 22. 8 ± 3. 6 23. 2 ± 3. 21) 24. 3 ± 3. 02)
8. 8 20. 4 ± 1. 8 22. 0 ± 3. 1 21. 8 ± 3. 9 22. 9 ± 4. 1 23. 7 ± 4. 51) 22. 6 ± 5. 3
注:与 TNBS 模型组比较1)P < 0. 05，2)P < 0. 01
3. 2 GTP 对 UC 小鼠腹泻的影响 除空白对照组
外，各组小鼠灌肠后 4 h 时均出现明显的腹泻症状
(P < 0. 01)，多为水样或脓血样粪便;按粪便性状评
估，醋酸地塞米松组和 GTP 高、中、低剂量组可明显
改善 UC 小鼠腹泻症状(P < 0. 05 或 P < 0. 01);但地
塞米松组，GTP 高、中、低剂量组组间比较均无统计
意义，见表 3。
表 3 GTP 对 TNBS 所致 UC 小鼠腹泻的影响(珋x ± s，n = 12)
组别
剂量
/ g·kg － 1
腹泻评分值 /分
7 d 8 d 9 d 10 d 11 d 12 d
空白对照 － 0 0 0 0 0 0
TNBS 模型 － 4. 00 ± 01) 4. 00 ± 01) 4. 00 ± 01) 4. 00 ± 01) 4. 00 ± 01) 3. 90 ± 0. 301)
醋酸地塞米松 2 × 10 － 4 4. 00 ± 01) 4. 00 ± 01) 4. 00 ± 01) 3. 90 ± 0. 371) 3. 90 ± 01) 3. 70 ± 0. 331，2)
GTP 2. 2 4. 00 ± 01) 4. 00 ± 01) 4. 00 ± 01) 3. 80 ± 0. 401) 3. 30 ± 0. 551，3) 2. 80 ± 0. 781，3)
4. 4 4. 00 ± 01) 4. 00 ± 01) 4. 00 ± 01) 4. 00 ± 01) 3. 71 ± 0. 391，2) 3. 28 ± 0. 411，3)
8. 8 4. 00 ± 01) 4. 00 ± 01) 4. 00 ± 01) 4. 00 ± 01) 4. 00 ± 01) 3. 67 ± 0. 621，2)
注:与空白对照组比较1)P < 0. 01;与 TNBS 模型组比较2)P < 0. 05，3)P < 0. 01(表 5 同)。
3. 3 GTP 对 UC 小鼠粪便潜血的影响 TNBS 模型
组小鼠粪便隐血反应呈强阳性(深蓝色)，空白对照
组隐血呈阴性(浅黄色)，GTP 中剂量、低剂量组和
阳性对照组个别小鼠粪便隐血呈阳性(蓝色)，但其
程度弱于 TNBS 模型组，表明给药组小鼠结肠出血
性损伤明显低于 TNBS 模型组。
3. 4 GTP 对 UC 小鼠结肠组织形态学损伤的影响
TNBS 诱发溃疡性结肠炎后，小鼠结肠粘连，肠壁
红肿增厚，弹性下降，有溃疡、出血点和穿孔等现象，
粘连及溃疡评分分值明显增高(P < 0. 01)，结肠弹
性明显下降(P < 0. 05);GTP 高、中、低剂量组能明
显改善小鼠结肠粘连及溃疡 (P < 0. 05 或 P <
0. 01);GTP 高剂量组能明显增强小鼠结肠弹性(P
< 0. 01)，GTP 中、低剂量组及阳性对照组小鼠结肠
弹性具有一定的增强趋势，但无统计意义。阳性对
照组，GTP 高、中、低剂量组组间小鼠结肠粘连及溃
疡评价分值的变化和结肠弹性的增加均无统计意
义，见表 4。
表 4 GTP 对 TNBS 所致 UC 小鼠结肠组织形态学的影响
(珋x ± s，n = 12)
组别 剂量 / g·kg － 1 粘连及溃疡分值 结肠弹性 /%
空白对照 － 0 32. 1 ± 6. 5
TNBS 模型 － 4. 7 ± 5. 12) 20. 1 ± 13. 31)
醋酸地塞米松 2 × 10 － 4 2. 6 ± 3. 92) 26. 9 ± 10. 7
GTP 2. 2 1. 3 ± 1. 12，4) 35. 7 ± 9. 34)
4. 4 1. 2 ± 3. 12，3) 27. 2 ± 13. 1
8. 8 1. 1 ± 1. 72，3) 25. 4 ± 6. 6
注:与空白对照组比较1)P < 0. 05，2)P < 0. 01;与 TNBS 模型组比
较3)P < 0. 05，4)P < 0. 01。
3. 5 GTP 对 UC 小鼠脾重指数的影响 造模组小
鼠脾脏明显增大(P < 0. 01);GTP 高、中、低剂量及
阳性对照药明显降低小鼠脾脏指数(P < 0. 05 或
·511·
景明，等:藏药湿生扁蕾提取物治疗小鼠溃疡性结肠炎的研究
P < 0. 01)，但阳性对照组，GTP 高、中、低剂量组组
间小鼠脾脏指数的变化均无统计意义，见表 5。
表 5 GTP 对 TNBS 所致 UC 小鼠脾脏指数的影响(珋x ± s，n = 12)
组别 剂量 / g·kg － 1 脾脏指数 /mg·g － 1
空白对照 － 35. 2 ± 5. 9
TNBS 模型 － 44. 1 ± 4. 61)
醋酸地塞米松 2 × 10 － 4 35. 8 ± 6. 13)
GTP 2. 2 37. 3 ± 7. 23)
4. 4 38. 4 ± 5. 72)
8. 8 39. 7 ± 6. 22)
4 讨论
本试验采用的 TNBS /乙醇诱发小鼠实验性 UC
模型与临床上溃疡性结肠炎的病理改变极为相似，
乙醇破坏了肠道黏膜屏障，TNBS 为一种半抗原，与
组织蛋白结合为一种抗原物质，使 T 淋巴细胞致敏，
诱发自身免疫反应，从而导致肠道炎症的发生，由于
制备简单省时而被广泛地应用于抗 UC 药物的药效
学考察。
TNBS /乙醇诱发造模后，动物出现了体质量减
轻、腹泻、便血等症状和腹腔粘连、结肠溃疡出血甚
至穿孔等病理变化。连续给药 14 d 后结肠黏膜充
血水肿、出血和溃疡的发生明显减轻，表明 GTP 具
有对抗 TNBS 所致的炎性病理损害的作用;给药组
动物肠管弹性升高，表明 GTP 对炎性渗出有抑制作
用;给药组动物腹泻、便血等较轻，且体质量增加，表
明 GTP 能改善 UC 小鼠的病理状态。
湿生扁蕾对 TNBS 模型小鼠的治疗作用是通过
多个环节发生作用，但是具体的作用机制还有待于
进一步的研究。
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［责任编辑 聂淑琴］
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