全 文 ：◇ 定量药理学 ◇
中国临床药理学与治疗学
中国药理学会主办
ＣＮ　３４－１２０６／Ｒ，ＩＳＳＮ　１００９－２５０１
ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｊｃｐｔ．ｃｏｍ
２０１４Ｏｃｔ；１９（１０）：１１２６－１１３１
２０１３－０４－０３收稿　２０１４－０９－０２修回
国家重点基础研究发展计划项目（２０１０ＣＢ７３５６０２）
蔡悠悠，女，硕士研究生，研究方向：药代动力学。
Ｔｅｌ：０２２－８４８４５２４３　Ｅ－ｍａｉｌ：ｎｏｒｍａｃａｉ＠１６３．ｃｏｍ
司端运，通信作者，男，研究员，硕士研究生导师，研究方向：药代
动力学。
Ｔｅｌ：０２２－８４８４５２６１　Ｅ－ｍａｉｌ：ｓｉｄｙ＠ｔｊｉｐｒ．ｃｏｍ
ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ同时测定犬干血浆样品中栀子苷、
山栀苷及京尼平龙胆双糖苷的浓度
蔡悠悠１，２，谷 元２，王新刚１，魏广力２，刘昌孝２，司端运２
１天津中医药大学，天津３００１９３；２天津药物研究院释药技术与药代动力学国家重点实验室，天津３００１９３
摘要　目的：建立ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ法同时测定犬干
血浆样品中栀子苷、山栀苷及京尼平龙胆双糖苷
浓度的分析方法，并应用于犬药代动力学研究中。
方法：采用Ｅｃｏｓｉｌ　Ｃ１８（４．６ｍｍ×１５０ｍｍ，５μｍ）
色谱柱，流动相为甲醇 －２０ｍｍｏｌ／Ｌ 甲酸铵
（０．１％甲酸），梯度洗脱；使用电喷雾离子源
（ＥＳＩ），正离子多反应监测模式检测。应用干血
浆采样技术收集犬静脉输注栀子提取液后的血浆
样品，超声提取后进行ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ分析。结果：
３种环烯醚萜苷类成分在线性范围内的相关性良
好（ｒ＞０．９９），日内、日间变异均＜１５％，绝对回收
率在７９．９％～９１．４％之间，４℃ 放置和室温放置
２４ｈ、７５ｄ稳定性良好。药代动力学参数显示栀
子苷、山栀苷、京尼平龙胆双糖苷的ｔ１／２分别为
６．８６、０．６８７、２．１１ｈ，ＡＵＣ０→ｔ分别为１５８、９．１６、
３４．０μｇ·ｍＬ
－１·ｈ。结论：建立的同时检测干血
浆样品中栀子苷、山栀苷、京尼平龙胆双糖苷浓度
的液相色谱－串联质谱分析法，灵敏度好、专属性
强。干血浆样品室温放置稳定性好，易于储存运
输，适用于药代动力学研究中。
关键词　干血浆采样法；ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ；环烯醚萜
苷；药代动力学
中图分类号：Ｒ９６５．２
文献标志码：Ａ
文 章 编 号：１００９－２５０１（２０１４）１０－１１２６－０６
干血浆采样法（ｄｒｉｅｄ　ｐｌａｓｍａ　ｓｐｏｔｓ，ＤＰＳ），即
将血浆样品收集于特制卡纸上，并用于化合物分
析测定的一种方法，是近年来新兴的一种采样技
术［１－２］。收集于特制纸片上的样品，易于储存运
输，适合用于多中心试验研究［３］和药物浓度监测
中［４－５］。查阅文献得知［６］，目前干血浆采样技术在
小分子化学药物药代动力学研究中的应用报道较
多，但还未见此项技术在中药药代动力学研究中
应用。栀子苷、山栀苷和京尼平龙胆双糖苷为茜
草科植物栀子提取物中的主要有效成分［７－９］，均为
环烯醚萜苷类化合物。本文采用药物浓度法［１０］，
建立同时测定干血浆样品中栀子苷、山栀苷和京
尼平龙胆双糖苷含量的ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ分析方法，
并研究各化合物在犬体内药代动力学行为特征。
１　材料与方法
１．１　仪器　日本 Ｓｈｉｍａｄｚｕ公司 Ｐｒｏｍｉｎｅｎｃｅ
３０Ａ液相色谱仪，配有 ＬＣ－３０ＡＤ二元梯度泵，
ＣＴＯ－３０Ａ柱温箱，ＳＩＬ－３０ＡＣ自动进样器，ＤＧＵ－
２０Ａ５脱气机；美国Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ公司Ｓｃｉ－
ｅｘ　ＴＲＩＰＬＥ　ＱＵＡＤＴＭ　ＡＰＩ　５５００型三重四级杆
串联质谱仪，配备有ＥＳＩ离子源及Ａｎａｌｙｓｔ１．５．２
数据处理系统。
１．２　药品与试剂　栀子提取物（每１０ｍＬ含栀
子苷２７３．７ｍｇ、山栀苷１０．９ｍｇ、京尼平龙胆双
糖苷４６．５ｍｇ），栀子苷、桃叶珊瑚苷对照品（中国
药品生物制品检定所，含量依次为 ９９．７％、
１００％），山栀苷、京尼平龙胆双糖苷对照品（山东
新时代药业有限公司，含量依次为 ９８．３６％、
·６２１１·
９８．２５％）；甲醇（天津市康科德科技有限公司，色
谱纯）；甲酸铵（天津市光复精细化工研究所，分析
纯）；无水甲酸（天津市光复精细化工研究所，色谱
纯）；超纯水（电阻率为１８．２兆欧，ＢＭ－４０型科诺
纯水制备系统制备）；Ｗｈａｔｍａｎ　ＦＴＡ卡（欧洲ＧＥ
医疗集团）。
１．３　色谱条件　色谱柱为Ｅｃｏｓｉｌ　Ｃ１８柱（４．６ｍｍ
×１５０ｍｍ，５μｍ），柱温４０℃。流动相：Ａ为甲
醇，Ｂ 相为 ２０ｍｍｏｌ／Ｌ 甲酸铵（含１０％甲醇，
０．１％甲酸）。梯度洗脱，０～７ｍｉｎ，８５％→６０％
Ｂ；７～９ｍｉｎ，６０％→２０％ Ｂ；９～１１ｍｉｎ，２０％ Ｂ；
１１～１１．１ｍｉｎ，２０％→８５％ Ｂ；１１．１～１５ｍｉｎ，
８５％Ｂ；流速为０．５ｍＬ／ｍｉｎ。
１．４　质谱条件　ＥＳＩ电喷雾离子源，正离子检
测；离子喷雾电压：４５００Ｖ；离子源温度：５００℃。
气帘气、雾化气、辅助气及碰撞气均为氮气；气帘
气：１４ｐｓｉ；雾化气：８０ｐｓｉ；辅助加热气：４０ｐｓｉ。
入口电压：１０Ｖ；碰撞出口电压：１０Ｖ；去簇电压
８０Ｖ。多重反应监测（ＭＲＭ）：栀子苷 ［Ｍ＋
ＮＨ４］＋ｍ／ｚ４０６．１→ｍ／ｚ２０９．１，碰撞能２２Ｖ；山
栀苷［Ｍ＋ＮＨ４］＋ｍ／ｚ　４１０．１→ｍ／ｚ　１７７．１，碰撞
能１６Ｖ；京尼平龙胆双糖苷［Ｍ＋ＮＨ４］＋ｍ／ｚ
５６８．２→ｍ／ｚ２０９．１，碰撞能２４Ｖ；桃叶珊瑚苷（内
标）［Ｍ＋ＮＨ４］＋ｍ／ｚ　３６４．１→ｍ／ｚ　１４９．１，碰撞
能２０Ｖ。
１．５　血浆标准曲线　精密配制以上３种待测物
贮备液（浓度均为１ｍｇ／ｍＬ），用Ｂｅａｇｌｅ犬空白
血浆稀释，获得栀子苷／山栀苷／京尼平龙胆双糖
苷 浓 度 依 次 为 ０．０２／０．０１／０．０１、０．０４／０．０２／
０．０２、０．１／０．０５／０．０５、０．５／０．２５／０．２５、２／１／１、１０／
５／５、２５／１２．５／１２．５μｇ／ｍＬ 的系列标准血浆样
品。称取桃叶珊瑚苷（内标）适量，配制浓度为
３２０ｎｇ／ｍＬ（甲醇∶水＝７０∶３０）的内标溶液。
１．６　ＤＰＳ样品处理方法　精密吸取血浆２０μＬ，
点于 ＦＴＡ 卡上，室温干燥 ２ｈ 后，中心打孔
６ｍｍ，加 入 ４００μＬ 内 标 工 作 液，超 声 提 取
１５ｍｉｎ，４℃１２　０００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ，取上清
液 ３００μＬ，４０℃ 水浴中氮气流吹干后，加入
０．１ｍＬ（甲醇∶水＝５０∶５０）复溶，１２　０００ｒ／ｍｉｎ
离心５ｍｉｎ，进样１０μＬ，进行 ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ分析
测定。
１．７　精密度与准确度　取Ｂｅａｇｌｅ犬空白血浆，
按照“１．５”项下制备方法，获得栀子苷、山栀苷、京
尼平龙胆双糖苷浓度依次为０．０４／０．０２／０．０２、１／
０．０５／０．０５、２０／１０／１０μｇ／ｍＬ 的 血 浆 样 品，按
“１．６”项下ＤＰＳ样品处理方法处理后，进行ＬＣ－
ＭＳ／ＭＳ分析测定，每个浓度６样本，连续测定
３ｄ，根据当日随行标准曲线计算样品浓度，并计
算日内、日间精密度与准确度。
１．８　基质效应和回收率　按照“１．７”项下配制
低、中、高３个浓度的含药血浆，各取１０μＬ 于
ＦＴＡ卡上，室温干燥２ｈ后，取出卡片上全部样
品，并按“１．６”项下处理后分析测定，计算峰面积
为Ａ。取空白血浆同法处理，获得空白基质提取
液，氮气流下吹干后，加入同等浓度待测物溶液复
溶后分析测定，计算峰面积为Ｂ。取１０μＬ水替
代血浆，配制为同等浓度的待测物溶液直接进样，
计算峰面积为Ｃ。以同一浓度下样品Ａ与样品Ｃ
的比值为回收率，样品Ａ与样品Ｂ的比值为基质
效应。
１．９　干血浆纸片负载量及稳定性考察　负载量
考察：当干血浆纸片负载不同体积的血浆（１５～
２５μＬ）时，使用同一直径的打孔器取下的纸片样
品分析，通过计算测定值的精密度和准确度，考察
不同的血浆负载量对测定值是否存在影响。取
低、高浓度的质控样品１５、２０、２５μＬ（ｎ＝６）置于
卡纸上，按“１．６”项下处理后，与随行曲线进行
ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ分析测定。稳定性考察：将低、高浓
度的质控样品收集于卡纸上后，分别于室温放置
２４ｈ、处理后进样器放置 ２４ｈ、４℃ 放置 ７５ｄ
后、室温放置７５ｄ，与随行曲线进行ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ
分析测定。
１．１０　动物实验　健康Ｂｅａｇｌｅ犬６只（雌雄各
半，体重１０～１２ｋｇ），普通级。由北京玛斯生物
技术有限公司提供，生产单位许可证编号：ＳＣＸＫ
（京）２０１１－０００３。
每只Ｂｅａｇｌｅ犬静脉输注２０ｍＬ栀子提取液
（加入０．９％生理盐水适当稀释），使用恒速注射
泵于０．５ｈ结束输注，分别于静脉输注前和静脉
输注开始后０．１７、０．３３、０．５、０．６、０．７５、１、１．２５、
１．５、２、２．５、３．５、４．５、６．５、８．５、１２．５、２４．５ｈ采集
血样，肝素抗凝，４０００ｒ／ｍｉｎ离心 １０ｍｉｎ，吸取
２０μＬ 收集于 ＦＴＡ 卡纸上，室温干燥 ２ｈ 后，
４℃ 保存。
·７２１１·中国临床药理学与治疗学２０１４Ｏｃｔ；１９（１０）
２　结果
２．１　标准曲线与最低定量限（ＬＬＯＱ）　按照
“１．５”项下制备标准曲线样品，以血浆浓度为横坐
标，峰面积为纵坐标，线性回归得校正曲线Ｙ＝Ａ
＋ＢＸ（权重１／ｘ２），得到典型的回归曲线方程为：
栀子苷：ｙ＝０．２２５＋２．７２×１０－４，ｒ＝０．９９９；山栀
苷：ｙ＝０．５０２－２．３２×１０－５，ｒ＝０．９９８；京尼平龙
胆双糖苷：ｙ＝０．１８１＋４．６８×１０－４，ｒ＝０．９９７。栀
子苷的最低定量下限为０．０２μｇ／ｍＬ，山栀苷、京
尼平龙胆双糖苷的最低定量限为０．０１μｇ／ｍＬ，
信噪比均大于５，见图１－Ｂ。其中，Ｂｅａｇｌｅ犬空白
血浆样品色谱图见图１－Ａ，Ｂｅａｇｌｅ犬给药后色谱
图见图１－Ｃ，如图所示，血浆中无内源性干扰，内
标与待测化合物间未见相互干扰。

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Max933.0 cps
Max 660.0 cps
Max 80.0 cps
Max 393.0 cps
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Max1232.9 cps
Max 2.4e5 cps
Max 123.4 cps
Max 428.0 cps
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　　　图１　ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ法测定犬血浆中三种待测物的 ＭＲＭ色谱图
Ａ：空白血浆样品；Ｂ：最低定量限样品；Ｃ：Ｂｅａｇｌｅ犬静注脑络泰注射液３ｈ后的干血浆样品；ａ：栀子苷；ｂ：
山栀苷；ｃ：京尼平龙胆双糖苷甲酯；ｄ：内标
２．２　精密度及准确度　试验结果表明，低、中、高
三个浓度的栀子苷、山栀苷和京尼平地龙双糖苷
批内、批间精密度均小于１５％，准确度介于９１％
～１０５％之间。
２．３　基质效应与回收率　基质效应与回收率结
果显示，栀子苷基质效应介于１０１％～１０３％之
间，回收率介于７９．９％～９０．２％之间；山栀苷基
质 效 应 介 于
１０１％～１０４％之
间，回收率介于
８０．２％～９１．４％
之间；京尼平地
龙双糖苷基质效
应介于９８．６％～
１０２％之间，回收
率介于８０．３％～
８７．４％之间。以
上数据表明在此
方法下，生物基
质对测定基本没
有影响，回收率
良好。
２．４　干血浆纸
片血浆负载量的
影响及稳定性结
果　按“１．９”项
下方法对干血浆
纸片负载量考察
结果 如 表 １ 所
示，在同一浓度下，不同
的 负 载 体 积 （１５ ～
２５μＬ）对化合物浓度
测定的精密度及准确度
符合相关要求［１１］。稳定性结果：栀子苷、山栀苷、
京尼平龙胆双糖苷在室温放置２４ｈ的精密度在
０．８６４％～４．２９％，准确度在９９．１％～１１４％，处
理后进样器放置 ２４ｈ 的精密度在 １．８６％～
９．２３％，准确度在 ９４．９％ ～１１０％，４℃ 放置
７５ｄ的精密度在 １．２１％～７．５２％，准确度在
·８２１１· Ｃｈｉｎ　Ｊ　Ｃｌｉｎ　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ　Ｔｈｅｒ　２０１４Ｏｃｔ；１９（１０）
９７．３％～１０２％，室温放置 ７５ｄ 的精密度在
０．６２％～６．７１％，准确度在９８．８％～１０６％。结
果显示栀子苷、山栀苷、京尼平龙胆双糖苷经干血
浆采样法处理后，在４℃ 及室温短期、长期放置
均稳定。
２．５　药时曲线与药代动力学参数　Ｂｅａｇｌｅ犬静
脉滴注栀子提取液后３个环烯醚萜苷类化合物的
平均药时曲线对数图见图２。选择 ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ　６．
３软件中的非房室模型统计矩法计算药代动力学
参数，主要的药代动力学参数结果见表２。
图２Ｂｅａｇｌｅ犬静脉滴注栀子提取液后３个环烯醚萜苷类
化合物血药浓度－时间半对数曲线图（ｘ±ｓ，ｎ＝５）
表１　干血浆纸片不同血浆负载量的精密度和准确度考察结果（ｎ＝５）
化合物
标定浓度
（μｇ／ｍＬ）
点卡体积
（μＬ）
测定浓度
（μｇ／ｍＬ）
精密度
（％）
准确度
（％）
相对偏差
（％）
栀子苷 ０．０４　 １５　 ０．０３８１　 ４．２７　 ９５．１ －５．１１
２０　 ０．０４０１　 ５．０９　 １００
２５　 ０．０４２５　 ４．０４　 １０６　 ５．８６
２０　 １５　 ２１．６　 １．７４　 １０８ －３．９３
２０　 ２２．５　 １．０８　 １１２
２５　 ２２．４　 １．５４　 １１２ －０．１４８
山栀苷 ０．０２　 １５　 ０．０２０１　 ７．６６　 １０１ －０．８２２
２０　 ０．０２０３　 ６．５４　 １０１
２５　 ０．０２０４　 ４．８１　 １０２　 ０．６５７
１０　 １５　 １０．７　 ０．７０２　 １０７ －３．１６
２０　 １１．１　 １．６８　 １１１
２５　 １１．４　 ０．７１４　 １１４　 ３．３１
京尼平地龙双糖苷 ０．０２　 １５　 ０．０１９７　 ７．８１　 ９８．６ －０．５８８
２０　 ０．０１９８　 ６．３０　 ９９．２
２５　 ０．０２０４　 ３．９５　 １０２　 ２．８６
１０　 １５　 １０．３　 ２．８３　 １０３ －３．６８
２０　 １０．７　 ２．５５　 １０７
２５　 １１．３　 １．７２　 １１３　 ５．１２
注：相对偏差＝（Ｃ１５μＬｏｒ　２５μＬ－Ｃ２０μＬ）／Ｃ２０μＬ×１００％。
表２　Ｂｅａｇｌｅ静脉滴注栀子提取物后的药代动力学参数（ｘ±ｓ，ｎ＝６）
参数 栀子苷 山栀苷 京尼平龙胆双糖苷
ｔ１／２（ｈ） ６．８６±０．５３８　 ０．６８７±０．０７４　 ２．１１±０．４４１
ｔｍａｘ（ｈ） ０．５００±０．０００　 ０．５３３±０．０５１６　 ０．５００±０．０４０８
Ｃｍａｘ（μｇ／ｍＬ） １５８±２１．３　 ７．４９±１．２１　 ３０．５±３．３８
ＡＵＣ０→ｔ（ｈ·μｇ／ｍＬ） １５８±２３．４　 ９．２０±１．４７　 ３４．０±４．７７
ＡＵＣ０→∞（ｈ·μｇ／ｍＬ） １５９±２３．６　 ９．１８±１．４７　 ３４．１±４．７９
Ｖｄ（Ｌ） ３４．９±７．２２　 ２．４０±０．４４６　 ８．３３±１．７１
ＣＬ（Ｌ／ｈ） ３．５１±０．５１６　 ２．４２±０．３４８　 ２．７７±０．３８１
ＭＲＴ０→ｔ（ｈ） ０．９７８±０．１０２　 ０．８９３±０．０９８３　 ０．９１７±０．１０１５
ＭＲＴ０→∞（ｈ） １．１０±０．１２０　 ０．９０７±０．０９７０　 ０．９３８±０．１０６
·９２１１·中国临床药理学与治疗学２０１４Ｏｃｔ；１９（１０）
３　讨论
本研究建立的结合 ＤＰＳ采样技术及 ＬＣ－
ＭＳ／ＭＳ分析技术同时测定犬血浆中栀子苷、山
栀苷、京尼平龙胆双糖苷的方法的特点：灵敏度
高，专属性强，精密度好（＜１５％），样品需求量少
（２０μＬ）；干血浆纸片室温放置７５ｄ稳定性良好，
存放于纸片上易于储存运输，适用于多中心试验
研究中；血浆负载量对测定值无明显影响，采样体
积在１５～２５μＬ时，使用６ｍｍ 直径的打孔器取
得的样品，测定值的精密度＜１５％；样品存于纸片
上，前处理时无需解冻（减少影响稳定性的因素）。
与直接采集血浆样品进行测定的分析方法相比，
干血浆采样技术在药代动力学研究中的应用较
少，认知有限且存在局限性，如何更好的将此项技
术应用于药代动力学研究中，实现生物样品在线
分析，是此项技术的发展前景。
栀子苷、山栀苷、京尼平龙胆双糖苷的药代动
力学结果显示，３种环烯醚萜苷类化合物均在静
滴结束时（０．５ｈ）达到峰值，栀子苷的ｔ１／２最长为
６．８６ｈ，体内浓度最高，山栀苷的ｔ１／２最短为
０．６８７ｈ，体内浓度最低。根据药物浓度－时间半
对数图可以看出，山栀苷在体内的消除最快，在
６．５ｈ左右即达到浓度最低点。
参 考 文 献
［１］　刘勇，魏广力，谷元，等．干血点采样技术和干血浆
采样技术在麦考酚酸药动学分析中的应用［Ｊ］．药
物评价研究，２０１２，３５（０６）：４０１－４０７．
［２］　Ｋｏｌｏｃｏｕｒｉ　Ｆ，Ｄｏｔｓｉｋａｓ　Ｙ，Ｌｏｕｋａｓ　ＹＬ．Ｄｒｉｅｄ　ｐｌａｓ－
ｍａ　ｓｐｏｔｓ　ａｓ　ａｎ　ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ　ｓａｍｐｌｅ　ｃｏｌｅｃｔｉｏｎ　ｔｅｃｈ－
ｎｉｑｕｅ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ　ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ
ｏｆ　ｇａｂａｐｅｎｔｉｎ［Ｊ］．Ａｎａｌ　Ｂｉｏａｎａｌ　Ｃｈｅｍ，２０１０，３９８
（３）：１３３９－１３４７．
［３］　Ｔｕｒｐｉｎ　ＰＥ，Ｂｕｒｎｅｔｔ　ＪＥ，Ｇｏｏｄｗｉｎ　Ｌ，ｅｔ　ａｌ．Ａｐｐｌｉ－
ｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ＤＢＳ　ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ　ｔｏ　ａ　ｔｏｘｉｃｏｋｉｎｅｔｉｃ
ｓｔｕｄｙ　ｉｎ　ｒａｔｓ　ａｎｄ　ｔｒａｎｓｆｅｒａｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｂｅｔｗｅｅｎ
ｂｉｏａｎａｌｙｔｉｃａｌ　ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ［Ｊ］．Ｂｉｏａｎａｌｙｓｉｓ，２０１０，２
（８）：１４８９－１４９９．
［４］　Ｖｕ　ＤＨ，Ｋｏｓｔｅｒ　ＲＡ，Ａｌｆｆｅｎａａｒ　ＪＷ，ｅｔ　ａｌ．Ｄｅｔｅｒｍｉ－
ｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍｏｘｉｆｌｏｘａｃｉｎ　ｉｎ　ｄｒｉｅｄ　ｂｌｏｏｄ　ｓｐｏｔｓ　ｕｓｉｎｇ
ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｉｍｐａｃｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｈｅｍａｔｏｃｒｉｔ　ａｎｄ
ｂｌｏｏｄ　ｖｏｌｕｍｅ［Ｊ］．Ｊ　Ｃｈｒｏ　Ｂ　Ａｎａｌｙｔ　Ｔｅｃｈ　Ｂｉｏ　Ｌｉｆｅ
Ｓｃｉ，２０１１，８７９（１５／１６）：１０６３－１０７０．
［５］　李琴．高效液相色谱－串联质谱法检测干血滤纸片
上他克莫司血药浓度的研究［Ｄ］．上海，复旦大学，
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［６］　Ｂａｒｆｉｅｌｄ　Ｍ，Ｗｈｅｌｅｒ　Ｒ．Ｕｓｅ　ｏｆ　ｄｒｉｅｄ　ｐｌａｓｍａ　ｓｐｏｔｓ
ｉｎ　ｔｈｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ　ｉｎ　ｃｌｉｎｉｃａｌ
ｓｔｕｄｉｅｓ：ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａ　ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ　ｂｉｏａｎａｌｙｔｉｃａｌ
ｍｅｔｈｏｄ［Ｊ］．Ａｎａｌ　Ｃｈｅｍ，２０１１，８３（１）：１１８－１２４．
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望［Ｊ］．中国临床药理学与治疗学，２００２，７（３）：
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［１１］Ｓｐｏｏｎｅｒ　Ｎ，Ｌａｄ　Ｒ，Ｂａｒｆｉｅｌｄ　Ｍ．Ｄｒｉｅｄ　ｂｌｏｏｄ　ｓｐｏｔｓ
ａｓ　ａ　ｓａｍｐｌｅ　ｃｏｌｅｃｔｉｏｎ　ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａ－
ｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ　ｉｎ　ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｓｔｕｄｉｅｓ：ｃｏｎｓｉｄ－
ｅｒａｔｉｏｎｓ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａ　ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ　ｂｉｏａｎａ－
ｌｙｔｉｃａｌ　ｍｅｔｈｏｄ［Ｊ］．Ａｎａｌ　Ｃｈｅｍ，２００９，８１（４）：１５５７－
１５６３．
Ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｇｅｎｉｐｏｓｉｄｅ，ｓｈａｎｚｈｉｓｉｄｅ　ａｎｄ　ｇｅｎｉｐｉｎ
ｇｅｎｉｏｂｉｏｓｉｄｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｉｎ　ｄｏｇ　ｄｒｉｅｄ　ｐｌａｓｍａ　ｓｐｏｔｓ　ｂｙ　ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ
ＣＡＩ　Ｙｏｕ－ｙｏｕ１，２，ＧＵ　Ｙｕａｎ２，ＷＡＮＧ　Ｘｉｎ－ｇａｎｇ１，ＷＥＩ　Ｇｕａｎｇ－ｌｉ　２，ＬＩＵ　Ｃｈａｎｇ－ｘｉａｏ２，ＳＩ
Ｄｕａｎ－ｙｕｎ２
１　Ｔｉａｎｊｉｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｔｉａｎｊｉｎ　３００１９３，Ｃｈｉｎａ；２　Ｓｔａｔｅ　Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａ－
ｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｄｒｕｇ　Ｄｅｌｉｖｅｒｙ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ，Ｔｉａｎｊｉｎ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｒｅ－
ｓｅａｒｃｈ，Ｔｉａｎｊｉｎ　３００１９３，Ｃｈｉｎａ
ＡＢＳＴＲＡＣＴ　ＡＩＭ：Ｔｏ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈ　ａ　ｍｅｔｈｏｄ　ｔｈａｔ
ｃｏｍｂｉｎｅ　ｄｒｉｅｄ　ｐｌａｓｍａ　ｓｐｏｔｓ　ａｎｄ　ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ　ｆｏｒ
ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｇｅｎｉｐｏｓｉｄｅ，ｓｈａｎｚｈｉ－
ｓｉｄｅ　ａｎｄ　ｇｅｎｉｐｉｎ　ｇｅｎｉｏｂｉｏｓｉｄｅ　ｉｎ　ｄｏｇ　ｐｌａｓｍａ　ａｎｄ
ｓｔｕｄｙ　ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃ　ｉｎ　ｄｏｇｓ． ＭＥＴＨＯＤＳ：
Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ　ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｗａｓ　ａｃｈｉｅｖｅｄ　ｏｎ　ａｎ
·０３１１· Ｃｈｉｎ　Ｊ　Ｃｌｉｎ　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ　Ｔｈｅｒ　２０１４Ｏｃｔ；１９（１０）
Ｅｃｏｓｉｌ　Ｃ１８（４．６ｍｍ×１５０ｍｍ，５μｍ）ｃｏｌｕｍｎ　ａｎｄ
ｔｈｅ　ｍｏｂｉｌｅ　ｐｈａｓｅ　ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ　ｏｆ　ｍｅｔｈａｎｏｌ　ａｎｄ　２０
ｍｍｏｌ／Ｌ　ａｍｍｏｎｉｕｍ　ｆｏｒｍａｔｅ（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ　０．１％
ｆｏｒｍｉｃ　ａｃｉｄ），ｇｒａｄｉｅｎｔ　ｅｌｕｔｉｏｎ．Ａｎ　ｅｌｅｃｔｒｏｓｐｒａｙ
ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ（ＥＳＩ）ｓｏｕｒｃｅ　ｗａｓ　ａｐｐｌｉｅｄ　ａｎｄ　ｏｐｅｒａｔｅｄ
ｉｎ　ｔｈｅ　ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｍｕｌｔｉｐｌｅ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ
（ＭＲＭ）ｍｏｄｅ．Ｕｓｉｎｇ　ｄｒｉｅｄ　ｐｌａｓｍａ　ｓｐｏｔｓ　ｔｅｃｈ－
ｎｏｌｏｇｙ　ｃｏｌｅｃｔ　ｐｌａｓｍａ　ｓａｍｐｌｅｓ　ａｆｔｅｒ　ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ
ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｚｈｉｚｉ．Ｔｈｅ　ａｓｓａｙ　ｅｍｐｌｏｙｅｄ
ｓｉｍｐｌｅ　ｓｏｌｖｅｎｔ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｓｏｎｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ
ＤＰＳ　ｓａｍｐｌｅ，ｆｏｌｏｗｅｄ　ｂｙ　ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ　ｓｙｓｔｅｍ　ｆｏｒ
ａｎａｌｙｓｉｓ．ＲＥＳＵＬＴＳ：Ｇｏｏｄ　ｌｉｎｅａｒｉｔｙ　ｗａｓ　ａｃｈｉｅｖｅｄ
ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｔｈｒｅｅ　ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ（ｒ＞０．９９），ｔｈｅ　ｉｎｔｒａ－
ｄａｙ　ａｎｄ　ｉｎｔｅｒ－ｄａｙ　ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ（ＲＳＤｓ）ｗｅｒｅ　ｂｅｌｏｗ
１５％，ｔｈｅ　ａｂｓｏｌｕｔｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｉｅｓ　ｗｅｒｅ　ｂｅｔｗｅｅｎ
７９．９％－９１．４％．Ｔｈｅ　ｍａｉｎ　ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃ　ｐａ－
ｒａｍｅｔｅｒｓ　ｏｆ　ｇｅｎｉｐｏｓｉｄｅ，ｓｈａｎｚｈｉｓｉｄｅ，ｇｅｎｉｐｉｎ　ｇｅ－
ｎｉｏｂｉｏｓｉｄｅ　ａｓ　ｆｏｌｏｗｓ：ｔｈｅ　ｔ１／２ ｗｅｒｅ　６．８６，０．６８７，
２．１１ｈ ，ｔｈｅ　ＡＵＣ０→ｔ　ｗｅｒｅ　１５８，９．１６，３４．０
μｇ·ｍＬ
－１·ｈ．ＣＯＮＣＬＵＳＩＯＮ：Ｔｈｅ　ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ
ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ　ｍｅｔｈｏｄ　ｉｓ　ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ　ａｎｄ　ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ｆｏｒ
ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ　 ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　 ｏｆ　 ｇｅｎｉｐｏｓｉｄｅ，
ｓｈａｎｚｈｉｓｉｄｅ　ａｎｄ　ｇｅｎｉｐｉｎ　ｇｅｎｉｏｂｉｏｓｉｄｅ　ｉｎ　ｄｒｉｅｄ
ｐｌａｓｍａ　ｓｐｏｔｓ．Ｔｈｅ　ｄｒｉｅｄ　ｐｌａｓｍａ　ｓｐｏｔｓ　ｗｅｒｅ　ｓｔａ－
ｂｌｅ　ａｔ　ｒｏｏｍ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ，ｅａｓｙ　ｔｒａｎｓｐｏｒｔａｔｉｏｎ
ａｎｄ　ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ，ａｎｄ　ｉｔ　ｃａｎ　ｂｅ　ｕｓｅｄ　ｆｏｒ　ｐｈａｒｍａ－
ｃｏｋｉｎｅｔｉｃ　ｒｅｓｅａｒｃｈ．
ＫＥＹ　ＷＯＲＤＳ　ｄｒｉｅｄ　ｐｌａｓｍａ　ｓｐｏｔ；ＬＣ－ＭＳ－ＭＳ；
ｉｒｉｄｏｉｄ　ｇｌｙｃｏｓｉｄｅｓ；ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃ
本文编辑：
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钟正灵
上接第１０８５页
Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｓａｌｖｉａｎｏｌｉｃ　ａｃｉｄ　Ｂ　ｏｎ　ＴＧＦ－β１－ｉｎｄｕｃｅｄ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｄｉｆ－
ｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｉｎ　ｌｕｎｇ　ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ
ＺＨＡＮＧ　Ｍｉｎ，ＣＡＯ　Ｓｈｕ－ｒｅｎ
Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｉｎｔｅｎｓｉｖｅ　Ｃａｒｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（ＩＣＵ），Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ　Ｒｅｄ　Ｃｒｏｓｓ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｊｉｎａｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，
Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ　５１０２２０，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ，Ｃｈｉｎａ
ＡＢＳＴＲＡＣＴ　ＡＩＭ：Ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ
ｓａｌｖｉａｎｏｌｉｃ　ａｃｉｄ　Ｂ　ｏｎ　ＴＧＦ－β１－ｉｎｄｕｃｅｄ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａ－
ｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｉｎ　ｌｕｎｇ　ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ．
ＭＥＴＨＯＤＳ：Ｔｈｅ　ｈｕｍａｎ　ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ　ｌｕｎｇ　ｆｉｂｒｏ－
ｂｌａｓｔｓ（ＭＲＣ－５）ｗｅｒｅ　ｒａｎｄｏｍｌｙ　ｄｉｖｉｄｅｄ　ｉｎｔｏ　ｓｉｘ
ｇｒｏｕｐｓ　ａｓ　ｆｏｌｏｗｓ：ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ（ｃｅｌｓ　ｃｕｌｔｕｒｅｄ
ｗｉｔｈ　ＤＭＥＭ　ｗｉｔｈｏｕｔ　ＴＧＦ－β１ｏｒ　Ｓａｌ　Ｂ）；Ｓａｌ　Ｂ
ｇｒｏｕｐｓ （ｃｅｌｓ　ｃｕｌｔｕｒｅｄ　ｗｉｔｈ　１μｍｏｌ／Ｌ　ｏｒ　１０
μｍｏｌ／Ｌ　Ｓａｌ　Ｂ）；ＴＧＦ－β１ ｇｒｏｕｐ （ｃｅｌｓ　ｃｕｌｔｕｒｅｄ
ｗｉｔｈ　１０ｎｇ／ｍＬ　ＴＧＦ－β１）；ＴＧＦ－β１（１０ｎｇ／ｍＬ）
ｗｉｔｈ　１ｏｒ　１０μｍｏｌ／Ｌ　ｏｆ　Ｓａｌ　Ｂ　ｔｒｅａｔｅｄ　ｇｒｏｕｐｓ．
Ｔｈｅ　ｃｅｌ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｒａｔｅｓ　ｗｅｒｅ　ａｎａｌｙｚｅｄ　ｂｙ
ＭＴＴ　ａｓｓａｙ．Ｔｈｅ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｌｅｖｅｌｓ　ｏｆα－ＳＭＡ　ｗｅｒｅ
ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ｂｙ　Ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ　ｏｆ
α－ＳＭＡ　ｍＲＮＡ　ｗｅｒｅ　ｅｖａｌｕａｔｅｄ　ｂｙ　ＲＴ－ＰＣＲ．Ｔｈｅ
ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　Ｆ－ａｃｔｉｎ　ｗａｓ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ｂｙ　ｉｍｍｕｎｏ－
ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ．ＲＥＳＵＬＴＳ：ＴＧＦ－β１ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｏｆ
ｌｕｎｇ　ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ　ｉｎｃｒｅａｓｅｄ　ｃｅｌ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｒａｔｅｓ
ａｎｄα－ＳＭＡ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ｃｈａｎｇｅｄ　ｃｅｌ　ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ
ｆｒｏｍ　ａ　ｓｐｉｎｄｌｅ　ｓｈａｐｅ　ｔｏ　ａ　ｓｔｅｌａｔｅ　ｓｈａｐｅ，ａｎｄ　ｉｎ－
ｄｕｃｅｄ　Ｆ－ａｃｔｉｎ　ｒｅｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ　ｔｏ　ｆｏｒｍ　ａｂｕｎｄａｎｔ
ｌｏｎｇ　ｓｔｒｅｓｓ　ｆｉｂｅｒｓ（Ｐ＜０．０１ａｓ　ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ
ｃｏｎｔｒｏｌ）．Ｔｈｅ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｗｉｔｈ　ｏｎｌｙ　Ｓａｌ　Ｂ　ｄｉｄ　ｎｏｔ
ａｆｆｅｃｔ　ｔｈｅ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ，α－ＳＭＡ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ｃｅｌ
ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　Ｆ－ａｃｔｉｎ　ｒｅｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｌｕｎｇ
ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ（Ｐ＞０．０５ａｓ　ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｃｏｎ－
ｔｒｏｌ）．Ｓａｌ　Ｂ　ｗａｓ　ｆｏｕｎｄ　ｔｏ　ｉｎｈｉｂｉｔ　ＴＧＦ－β１－ｉｎｄｕｃｅｄ
ｃｅｌ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ，α－ＳＭＡ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ｃｅｌ　ｍｏｒ－
ｐｈｏｌｏｇｙ　ｃｈａｎｇｅ，ａｎｄ　Ｆ－ａｃｔｉｎ　ｒｅｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ　ｉｎ
ｌｕｎｇ　ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ （Ｐ＜０．０５ａｓ　ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ
ＴＧＦ－β１ｇｒｏｕｐ）．Ｔｈｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　Ｓａｌ　Ｂ　ｏｎ
ＴＧＦ－β１－ｉｎｄｕｃｅｄ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ
ｉｎ　ｌｕｎｇ　ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ　ｗａｓ　ｍｏｒｅ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ
ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｏｆ　ｈｉｇｈ－ｄｏｓｅ　Ｓａｌ　Ｂ（１　ｖｓ　１０μｍｏｌ／Ｌ，Ｐ
＜０．０５）．ＣＯＮＣＬＵＳＩＯＮ：Ｓａｌ　Ｂ　ｃｏｕｌｄ　ｉｎｈｉｂｉｔ
ＴＧＦ－β１－ｉｎｄｕｃｅｄ　ｃｅｌ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａ－
ｔｉｏｎ　ｉｎ　ｌｕｎｇ　ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ　ｉｎｖｉｔｒｏ．
ＫＥＹ　ＷＯＲＤＳ　ｓａｌｖｉａｎｏｌｉｃ　ａｃｉｄ　Ｂ；ｐｕｌｍｏｎａｒｙ　ｆｉ－
ｂｒｏｂｌａｓｔ；ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ－β１；ｐｒｏｌｉｆ－
ｅｒａｔｉｏｎ；ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ
本文编辑：余文涛
·１３１１·中国临床药理学与治疗学２０１４Ｏｃｔ；１９（１０）