全 文 ：网络出版时间:2014 － 6 － 24 16:35 网络出版地址:http:/ /www． cnki． net /kcms /doi /10． 3969 / j． issn． 1001 －1978． 2014． 07． 031． html
◇研究简报◇
离体外翻肠囊法研究头花蓼提取物中 5 个成分的肠吸收特性
唐 丽1，刘 跃2，黄 勇2，廖尚高1，兰燕宇1
(贵阳医学院 1．民族药与中药开发应用教育部工程研究中心、2．药学院 贵州省药物制剂重点实验室，贵州 贵阳 550004)
Study on absorption characteristics of five compo-
nents from Polygonum capitatum by isolated ever-
ted intestine model
TANG Li1，LIU Yue2，HUANG Yong2，LIAO Shang-
gao1，LAN Yan-yu1
(1． Engineering Ｒesearch Center for the Development and Appli-
cation of Ethnic Medicine and TCM (Ministry of Education) ;2．
Guizhou Provincial Key Laboratory of Pharmaceutics，School of
Pharmacy，Guiyang Medical College，Guiyang 550004，Chi-
na)
doi:10． 3969 / j． issn． 1001 － 1978． 2014． 07． 031
文献标志码:A 文章编号:1001 － 1978(2014)07 － 1031 － 02
中国图书分类号:Ｒ-332;Ｒ282． 71;Ｒ284． 1;Ｒ322． 45;
Ｒ333. 3;Ｒ969． 1
关键词:头花蓼提取物;外翻肠囊法;没食子酸;原儿茶酸;杨
梅苷;陆地棉苷;槲皮苷;UPLC-MS /MS
Key words:Polygonum capitatum;in vitro everted intestinal
sac;gallic acid; protocatechuic acid;myricitrin; hirsutrin;
quercitrin;UPLC-MS /MS
收稿日期:2014 － 02 － 27，修回日期:2014 － 05 － 22
基金项目:国家自然科学基金资助项目(No 81260688，81160516) ;国
家科技支撑计划(No 2013BAI11B01) ;贵州省国际科技合
作计划(No 黔科合外 G字［2012］7040 号)
作者简介:唐 丽(1990 －) ，女，硕士，研究方向:中药药动学及质量
控制，Tel:0851-6908468，E-mail:280664845@ qq． com;
兰燕宇(1958 －) ，女，教授，研究方向:中药活性成分及新
药开发，通讯作者，Tel:0851-6908899，E-mail:yanyu626@
126． com
头花蓼(Polygonum capitatum Buch． -Ham． ex D． Don)属
于蓼科(Polygonaceae)、蓼属(Polygonum)、头状蓼组(Cepha-
lophilon)多年生草本植物，是贵州省别具特色的苗药资源之
一。目前，头花蓼是贵州省中药现代化重点培育发展的“十
大苗药”和“十大中药产业链”品种之一，收载于 2003 年版
《贵州省中药材、民族药材质量标准》［1］。具有清热解毒、利
尿通淋之效，临床上主要用于泌尿系统感染等症的治疗。
肠外翻模型是由 Wilson 和 Wiseman 于 1954 年创建，最
早用于研究葡萄糖和氨基酸在肠道的代谢与转运［2］，后经改
进，目前成为最常用的体外肠道吸收生物模型，是一种能够
快速反映药物吸收行为的体外方法。鉴于目前头花蓼的药
效物质不明确，故本实验采用“简便、快速、重复性良好”的
大鼠肠囊外翻模型［3 － 4］，应用 UPLC-MS /MS 法考察头花蓼
提取物中没食子酸、原儿茶酸，杨梅苷、陆地棉苷及槲皮苷 5
种主要成分在小肠中的吸收特性，为头花蓼的药效物质提供
实验参考。
1 材料
1． 1 仪器与试药 超高液相色谱 －三重四级杆串联质谱仪
(美国 Waters公司) ;Allegra 64Ｒ高速离心机(美国 Beckman
Coulter公司) ;自制麦氏浴管;混合气体(95% O2，5% CO2) ;
DK-98-ⅡA恒温水裕锅(天津泰斯特仪器有限公司)。
没食子酸(批号 M20 －101209，中药固体制剂制造技术国
家工程研究中心) ;原儿茶酸(批号 110306)、杨梅苷(批号
111018) ，均购自四川省维克奇生物科技有限公司;槲皮苷、陆
地棉苷(贵州省药物制剂重点实验室制备，纯度≥98%) ;葛根
素(内标，批号 0752-9605，中国药品生物制品鉴定所) ;头花蓼
提取物(自制，批号 20130407) ，乙腈、甲酸为色谱纯;Tyrode缓
冲液(NaCl 8． 0 g、KCl 0． 2 g、NaHCO3 1. 0 g、NaH2PO4 0. 05 g及
MgCl2 0. 1 g，加 500 ml蒸馏水溶解，0. 2 g CaCl2溶于 500 ml蒸
馏水，两者混匀后加入 1． 0 g葡萄糖即可)。
1． 2 试验动物 健康 SD ♂，体质量为(220 ± 20)g，由贵阳
医学院动物中心提供，批号:SCXK(黔)2002 － 0001。
2 方法
2． 1 色谱条件 色谱柱:Waters BEH C18(2． 1 mm × 50 mm，
1． 7 μm)柱，流动相:0． 1% 甲酸乙腈(A)－ 0. 1% 甲酸水
(B) ，梯度为 0 ～ 1. 5 min:5% ～ 35%(A) ，1. 5 ～ 3min:35%
～ 95% (A) ，3 ～ 4 min:95% ～ 5% (A) ;流速 0. 35 ml·
min －1;柱温 45℃，进样体积 1 μl。
2． 2 质谱条件 电喷雾离子化(ESI) ，毛细管电离电压:3
kV，离子源温度 120 ℃ ;喷雾气与反吹气:N2，去溶剂气流
速:650 L /hr，去溶剂气温度:350 ℃，反吹气流速为 50 L /hr;
扫描方式为多反应离子监测(MＲM) ，没食子酸:m/z(－)
169→125、原儿茶酸:m/z(－)152． 9→109、杨梅苷:m/z(+)
465． 3→319、陆地棉苷:m/z(+)465． 2→303、槲皮苷:m/z
(+)449． 2→303． 1 及葛根素:m/z(+)417→267。
2． 3 供试药液制备 取头花蓼药材(购自贵州施秉头花蓼
GAP种植基地)1 000 g，加水煎煮 2 次，每次 1． 5 h，煎液滤
过，合并滤液，浓缩干燥后得头花蓼提取物。没食子酸、原儿
茶酸、杨梅苷、陆地棉苷及槲皮苷在提取物中的百分含量分
别为:1. 445%、0. 042%、0. 025%、0. 055%、0. 208%。称取头
花蓼提取物适量溶解于 Tyrode 液中，10 000 r·min －1离心
5min，配制成低、中、高浓度分别为 18. 73、37. 45、74. 90 g·
L －1的头花蓼提取物肠吸收液。
2． 4 外翻肠囊实验 同参考文献［5］，本实验根据其进行适
当修改，将制备的肠管放入盛有 10 ml 37℃恒温 Tyrode液的
麦氏浴管中，开始供混合气体(95% O2，5% CO2)。在肠管中
注入2 ml Tyrode液平衡10 min，将Tyrode液换成低、中、高
·1301·中国药理学通报 Chinese Pharmacological Bulletin 2014 Jul;30(7) :1031 ～ 2
Tab 1 The Ka of five ingredients of Polygonum capitatum in different concentrations at duodenum and jejunum (珋x ± s，n = 3)
Group
Duodenum
High
concentration
Middle
concentration
Low
concentration
Jejunum
High
concentration
Middle
concentration
Low
concentration
Gallic acid 0． 618 ± 0． 845 0． 438 ± 0． 043* 0． 229 ± 0． 022* 0． 845 ± 0． 103 0． 672 ± 0． 090* 0． 297 ± 0． 070* #
Protocatechuic acid 0． 479 ± 0． 117 0． 430 ± 0． 061 0． 184 ± 0． 010* # 0． 635 ± 0． 139 0． 552 ± 0． 067* 0． 239 ± 0． 032* #
Quercitrin 0． 356 ± 0． 015 0． 339 ± 0． 112* 0． 182 ± 0． 058* # 0． 576 ± 0． 248 0． 451 ± 0． 102 0． 186 ± 0． 074* #
Hirsutrin 0． 282 ± 0． 030 0． 271 ± 0． 099* 0． 231 ± 0． 163* # 0． 388 ± 0． 080 0． 316 ± 0． 172* 0． 210 ± 0． 038*
Myricitrin 0． 045 ± 0． 011 0． 034 ± 0． 008 0． 007 ± 0． 002* # 0． 055 ± 0． 016 0． 044 ± 0． 003 0． 008 ± 0． 003* #
* P ＜ 0． 05 vs high concentration;#P ＜ 0． 05 vs middle concentration
Tab 2 The Ka of five ingredients of Polygonum capitatum in different concentrations at ileum and colon(珋x ± s，n = 3)
Group
Ileum
High
concentration
Middle
concentration
Low
concentration
Colon
High
concentration
Middle
concentration
Low
concentration
Gallic acid 0． 706 ± 0． 126 0． 616 ± 0． 039* 0． 291 ± 0． 072* # 0． 527 ± 0． 131 0． 412 ± 0． 061 0． 175 ± 0． 071* #
Protocatechuic acid 0． 580 ± 0． 072 0． 576 ± 0． 054 0． 250 ± 0． 035* # 0． 412 ± 0． 057 0． 301 ± 0． 073 0． 135 ± 0． 046* #
Quercitrin 0． 542 ± 0． 051 0． 377 ± 0． 074* 0． 200 ± 0． 116* # 0． 259 ± 0． 022 0． 172 ± 0． 043* 0． 106 ± 0． 050* #
Hirsutrin 0． 445 ± 0． 016 0． 346 ± 0． 047* 0． 230 ± 0． 147* # 0． 217 ± 0． 036 0． 179 ± 0． 088* 0． 089 ± 0． 028* #
Myricitrin 0． 056 ± 0． 008 0． 048 ± 0． 025 0． 008 ± 0． 005* # 0． 032 ± 0． 007 0． 018 ± 0． 004* 0． 004 ± 0． 002* #
* P ＜ 0． 05 vs high concentration;#P ＜ 0． 05 vs middle concentration
3 个浓度的含药 Tyrode 液，分别在 15、20、45、60、90、120 min
取样 200 μl，同时补充等体积的 37℃ Tyrode 液。样品放入
Eppendorf管中，－ 20 ℃保存。实验后将各肠管纵向剖开，自
然摊于滤纸上测量其长度和宽度，记录吸收面积 A。取肠外
翻样品溶液 100 μl，加 10μl、20 mg·L －1内标溶液 300 μl
15%乙腈及 50 μl 1%的甲酸，涡混 1 min，15 000 r·min －1离
心 5 min，取上清液进样 UPLC-MS分析。
2． 5 统计学处理 同参考文献［6］。
3 结果
3． 1 不同肠段中 5 个成分的单位肠管面积累计吸收量(Q)
比较 比较 5 个成分在不同肠段的单位肠管面积累积吸收
量(Q) ，在 120 min时，空肠对没食子酸、原儿茶酸及槲皮苷
的累积吸收量最高，其次为回肠、十二指肠与结肠。5 个成分
中没食子酸、原儿茶酸与槲皮苷的累积吸收量较大，杨梅苷
累计吸收量最小，5 个成分在各肠道的吸收趋势为空肠、回肠
＞十二指肠 ＞结肠。
3． 2 不同浓度头花蓼提取物中 5 个成分在不同肠段中的 Ka
比较 对头花蓼提取物不同浓度时没食子酸等 5 个成分的
吸收速率常数(Ka)进行方差分析比较，结果显示，在各肠段
中没食子酸等 5 个成分的 Ka 随着头花蓼提取物浓度增加而
增加(P ＜ 0. 05) ，表明没食子酸、原儿茶酸、杨梅苷、陆地棉苷
及槲皮苷的吸收可能为被动吸收，见 Tab 1、2。
4 讨论
本实验结果显示，没食子酸、原儿茶酸、槲皮苷、陆地棉
苷及杨梅苷在小肠均有吸收，5 个成分在各肠道的吸收趋势
为空肠、回肠 ＞十二指肠 ＞结肠，5 个成分在相同肠段中的吸
收差异较大，且同一个成分在不同部位和在相同部位不同浓
度的吸收也存在差异，说明小肠对中药成分具有选择性吸
收，而并不是简单的半透膜被动吸收过程。且对 5 个成分的
Ka 及 Q进行比较，发现这 5 个成分均具有浓度依赖，即 5 个
化合物的 Ka 均随着头花蓼提取物药液浓度的增加而增加(P
＜ 0． 05) ，符合被动吸收。但是通过统计发现 5 个成分的浓
度依赖却有强有弱，因此，推测其中有的成分除了被动扩散
还有其他的转运方式，有待下一步实验对其进行考察。
参考文献:
［1］ 贵州省药品监督管理局 DB52 /YC001 ～ 420-2003． 贵州省中药
材、民族药材质量标准［S］． 贵州省中药材、民族药材质量标准
编审委员会汇编．贵州:贵州科技出版社，2003:147．
［1］ Food and drug administration of Guizhou province DB52 /YC001 ～
420-2003． The quality standard of medicinal herbs， traditional
medicines of Guizhou province［S］． The editorial committee of the
quality standard of medicinal herbs、traditional medicines of
Guizhou province． Guizhou:Guizhou Science and Technology
Press，2003:147．
［2］ Wilson TH，Wiseman G． The use of sacs of everted small intestine
for the study of the transference of substances from the mucosal to
the serosal surface［J］． J Physiol，1954，123(1) :116．
［3］ 董 宇，杨 庆，朱晓新，等．黄连提取物在大鼠肠外翻实验中
的吸收研究［J］．中国中药杂志，2008，33(9) :1056 － 60．
［3］ Dong Y，Yang Q，Zhu X X，et al． Absorption of extractive Ｒhizo-
ma Coptidis in rat everted gut scas［J］． China J Chin Mat Med，
2008，33(9) :1056 － 60．
［4］ Wilson T H，Wiseman G． The use of sacs of evened small intestine
for the study of the transference of substances from the mucosal to
the serosal surface［J］． Physiology，1954，123(1) :116．
［5］ 陈宝婷，徐福平，林爱华，等．翻转肠囊法研究芒果苷在大鼠的
肠吸收动力学［J］．中国药理学通报，2012，28(5) :691 － 4．
［5］ Chen B T，Xu F P，Lin A H，et al． Study on intestinal absorption
of mangiferin by everted gut sacs model［J］． Chin Pharmacol Bull，
2012，28(5) :691 － 4．
［6］ 陈振华，管咏梅，张 妮，等．白头翁总皂苷在大鼠肠外翻试验
中吸收特性考察［J］． 中国实验方剂学杂志，2012，18(18) :30
－ 3．
［6］ Chen Z H，Guan Y M，Zhang N，et al． Investigation of absorption
characteristics of total saponins from pulsatilla chinensis in rat in-
testinal valgus test［J］． Chin J Exp Tradit Med Formul，2012，18
(18) :30 － 3．
·2301· 中国药理学通报 Chinese Pharmacological Bulletin 2014 Jul;30(7)