全 文 ：罗勒精油和Ｎｉｓｉｎ复配抑菌剂抑菌效果的研究
丁华１，王建清１＊，王玉峰１，姜楠楠２
（１．天津科技大学 包装与印刷工程学院，天津　３００２２２；２．河南机电高等专科学校，河南 新乡　４５３０００）
摘要：以肉制品中的致腐微生物大肠杆菌和金黄色葡萄球菌为试验菌株，采用滤纸片扩散法研究罗勒精
油及乳酸链球菌素（Ｎｉｓｉｎ）的抑菌效果，并探索二者的联合抑菌性能，采用三因子二次正交旋转设计确
定天然抑菌剂的最佳配比。结果表明：罗勒精油及 Ｎｉｓｉｎ对大肠杆菌的 ＭＩＣ分别为３．７５μＬ／ｍＬ和
７．５ｍｇ／ｍＬ，对金黄色葡萄球菌的 ＭＩＣ分别为１．８７５μＬ／ｍＬ和０．９３７５ｍｇ／ｍＬ，复配后二者联合抗菌
指数ＦＩＣ为０．７５，表现为强烈相加作用，优于罗勒精油与Ｎｉｓｉｎ的单独抑菌效果，且罗勒精油（μＬ）与
Ｎｉｓｉｎ（ｍｇ）的最佳配比为３∶１。
关键词：罗勒精油；乳酸链球菌素；天然抑菌剂；抑菌性能；复配
中图分类号：ＴＳ２０２．２　　　文献标志码：Ａ　　　 ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１０００－９９７３．２０１６．０７．００５
文章编号：１０００－９９７３（２０１６）０７－００２０－０６
Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　Ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ　Ｅｆｅｃｔ　ｏｆ　Ｃｏｍｐｏｕｎｄ　Ｂａｃｔｅｒｉｏｓｔａｔｉｃ　Ａｇｅｎｔ　ｏｆ
Ｂａｓｉｌ　Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ　Ｏｉｌ　ａｎｄ　Ｎｉｓｉｎ
ＤＩＮＧ　Ｈｕａ１，ＷＡＮＧ　Ｊｉａｎ－ｑｉｎｇ１＊，ＷＡＮＧ　Ｙｕ－ｆｅｎｇ１，ＪＩＡＮＧ　Ｎａｎ－ｎａｎ２
（１．Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｐａｃｋｉｎｇ　ａｎｄ　Ｐｒｉｎｔｉｎｇ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｔｉａｎｊｉｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｓｃｉｅｎｃｅ
ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｔｉａｎｊｉｎ　３００２２２，Ｃｈｉｎａ；２．Ｈｅ＇ｎａｎ　Ｍｅｃｈａｎｉｃａｌ　ａｎｄ　Ｅｌｅｃｔｒｉｃａｌ
Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ　Ｃｏｌｅｇｅ，Ｘｉｎｘｉａｎｇ　４５３０００，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｕｓｅ　Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ　ａｎｄ　Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ　ａｓ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　ｓｔｒａｉｎｓ，ｔｈｅ　ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ
ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｂａｓｉｌ　ｅｓｓｅｎｔｉａｌ　ｏｉｌ　ａｎｄ　ｎｉｓｉｎ　ｉｓ　ｒｅｓｅａｒｃｈｅｄ　ｂｙ　ｕｓｉｎｇ　ｆｉｌｔｅｒ　ｐａｐｅｒ　ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄ，ａｎｄ　ｅｘｐｌｏｒｅ
ｔｈｅｉｒ　ｊｏｉｎｔ　ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ　ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ．Ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍａｌ　ｒａｔｉｏ　ｏｆ　ｎａｔｕｒａｌ　ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ　ａｇｅｎｔ　ｉｓ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　ｂｙ
ｕｓｉｎｇ　ｔｈｒｅｅ　ｆａｃｔｏｒｓ　ｑｕａｄｒａｔｉｃ　ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ　ｒｏｔａｔｉｎｇ　ｄｅｓｉｇｎ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗ　ｔｈａｔ：ｆｏｒ　Ｅ．ｃｏｌｉ，ｔｈｅ　ＭＩＣ
ｏｆ　ｂａｓｉｌ　ｅｓｓｅｎｔｉａｌ　ｏｉｌ　ａｎｄ　ｎｉｓｉｎ　ｉｓ　３．７５μＬ／ｍＬ　ａｎｄ　７．５ｍｇ／ｍＬ，ｆｏｒ　Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ，ｔｈｅ　ＭＩＣ　ｏｆ
ｂａｓｉｌ　ｅｓｓｅｎｔｉａｌ　ｏｉｌ　ａｎｄ　ｎｉｓｉｎ　ｉｓ　１．８７５μＬ／ｍＬ　ａｎｄ　０．９３７５ｍｇ／ｍＬ．Ｔｈｅ　ｊｏｉｎｔ　ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ　ｉｎｄｅｘ　ｏｆ
ｃｏｍｐｏｓｉｔｅ　ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ　ａｇｅｎｔ　ｉｓ　０．７５，ｗｈｉｃｈ　ｓｈｏｗｓ　ｓｔｒｏｎｇ　ａｄｄｉｔｉｖｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ａｎｄ　ｃｏｍｐｏｓｉｔｅ　ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ
ｅｆｆｅｃｔ　ｉｓ　ｂｅｔｔｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈａｔ　ｏｆ　ａｌｏｎｅ　ａｆｔｅｒ　ｃｏｍｐｏｕｎｄｅｄ．Ｔｈｅ　ｂｅｓｔ　ｒａｔｉｏ　ｏｆ　ｂａｓｉｌ　ｅｓｓｅｎｔｉａｌ　ｏｉｌ（μＬ）ａｎｄ　ｎｉｓｉｎ
（ｍｇ）ｉｓ　３∶１．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｂａｓｉｌ　ｅｓｓｅｎｔｉａｌ　ｏｉｌ；ｎｉｓｉｎ；ｎａｔｕｒａｌ　ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ　ａｇｅｎｔ；ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ　ｐｒｏｐｅｒｔｙ；ｃｏｍｐｏｕｎｄ
　　随着生活水平的提高和绿色食品的兴起，人们对 肉类产品的安全性愈加敏感［１，２］。肉制品在贮藏
收稿日期：２０１６－０１－２１　　　　　　　　＊通讯作者
基金项目：国家科技支撑计划项目（２０１５ＢＡＤ１６Ｂ００）；天津食品安全低碳环保制造协同创新中心资助项目
作者简介：丁华（１９９１－），女，天津人，硕士，研究方向：包装材料与技术；
王建清（１９５３－），男，教授，研究方向：包装材料与技术。
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基础研究　　第４１卷 第７期
２０１６年７月
　　　　　　　　　　　　　　　中 国 调 味 品
Ｃｈｉｎａ　Ｃｏｎｄｉｍｅｎｔ
和运输过程中因微生物的生长繁殖极易腐败变质，致
使营养风味损失较为严重［３－４］。近年来，化学防腐剂
的使用因其潜在的毒副作用而受到限制，因此，迫切需
要开发安全、绿色、环保的防腐抑菌剂。目前，天然复
合抑菌剂以其毒性低、抑菌防腐效果佳及价格低廉等
特点吸引了诸多专家学者的注意［５－７］。此外，将多种
天然植物抑菌剂复配使用，不仅会降低单独使用的浓
度，还可以降低单独使用大量抑菌剂时的感官影响［８］。
因此，开发新型天然复合抑菌剂将会是防腐保鲜领域
的一大热点。
本实验采用滤纸片扩散法分别测定罗勒精油及
Ｎｉｓｉｎ对肉制品主要致腐微生物大肠杆菌和金黄色葡
萄球菌的抑制效果，确定其对两种细菌的最低抑菌浓
度和最低杀菌浓度，并探索二者的联合抑菌性能，最后
采用三因子二次正交旋转设计将罗勒精油与Ｎｉｓｉｎ进
行复配，得出最佳配比，旨在为天然复合抑菌剂在肉制
品中的应用提供参考。
１　材料与方法
１．１　实验材料与试剂
乳酸链球菌素（食品级）　天津康益生物工程有限
公司；罗勒精油（食品级）　广州和博生物科技有限公
司；氯化钠、氢氧化钠（分析纯）　天津市江天化工技术
有限公司；大肠杆菌、金黄色葡萄球菌（生化试剂）　天
津科技大学食品与生物工程学院；牛肉膏、蛋白胨（生
物试剂）　天津市英博生化试剂有限公司；琼脂（生物
试剂）　天津市珠江卫生材料厂。
１．２　仪器与设备
ＡＲ２１３０型电子天平　梅特勒－托利多仪器上海
有限公司；ＢＣＤ－２００ＡＮ型海尔电冰箱　青岛海尔股
份有限公司；超洁净工作台　苏州净化设备有限公司；
ＤＨＰ－９０５２型电热恒温培养箱　上海一恒科学仪器有
限公司；立式压力蒸汽灭菌器　上海博迅事业有限公
司。
１．３　试验方法
１．３．１　培养基的制备
细菌培养用牛肉膏蛋白胨琼脂培养基。具体配
方：牛肉膏３．０ｇ，蛋白胨１０ｇ，氯化钠５．０ｇ，琼脂
１４ｇ，水１０００ｍＬ，加热融化，调ｐＨ值７．４～７．６。分
装，高压湿热灭菌（１２０℃，２０ｍｉｎ），备用。
１．３．２　供试菌株的制备
选取的供试菌株有大肠杆菌、金黄色葡萄球菌。
将所有供试菌种移接入相对应的试管斜面培养基上，
每种菌种接多支重复。将细菌置于３７℃电热恒温培
养箱培养２４ｈ。每种菌种取２支供实验用，其余冷藏
备用。
１．３．３　菌悬液的制备
挑取各菌落接种平皿，细菌培养２４ｈ，用无菌生
理盐水洗脱，分别制成含菌约１０７　ｃｆｕ／ｍＬ的菌悬液。
具体制备方法：分别挑取少量细菌至无菌生理盐水中
洗出，玻璃珠打散，制成菌悬液，调菌悬液浓度为
１０７～１０８　ｃｆｕ／ｍＬ，备用。
１．３．４　抑菌活性研究———滤纸片扩散法
试验前，对试验所需物品进行高压灭菌消毒或者
紫外杀菌。试验时，在无菌操作台上进行。
用移液枪分别吸取各菌悬液５００μＬ均匀涂布于
营养培养基上，然后用镊子取一片滤纸片平贴于平板
中央。
用移液枪吸取２０μＬ待测精油滴加在滤纸片上，
并设２个平行组。同时，设置１个菌液空白对照，做好
区分标记。待精油被滤纸片充分吸收后，放入生化培
养箱中在３７℃恒温下培养２４ｈ，十字交叉法量取抑菌
圈直径，取平均值。
将浓度为７ｍｇ／ｍＬ乳酸链球菌素溶液滴加在滤
纸片上，并设２个平行组。同时，设置１个菌液空白对
照，做好区分标记。待液体被滤纸片充分吸收后，放入
生化培养箱中在３７℃恒温条件下培养２４ｈ，十字交叉
法量取抑菌圈直径，取平均值。
细菌培养当天为第１天，培养２４ｈ观察结果为
第２天，记录时间从第２天开始。
１．３．５　最低抑菌浓度和最低杀菌浓度的测定
采用液体培养基对倍稀释的方法，每个浓度２次
重复，同时做空白对照，在８ｍＬ固体培养基中加入
１ｍＬ　１０７　ｃｆｕ／ｍＬ的菌悬液及抑菌剂，在电热恒温培养
箱中培养。细菌置于３７℃下培养４８ｈ，观察测试菌种
的生长情况，以完全没有菌生长的最低浓度作为该精
油的最低抑菌浓度（ＭＩＣ）。把上述没有长菌的培养皿
继续培养４８ｈ后观察，以完全无菌生长的浓度为最低
杀菌浓度（ＭＢＣ）。
１．３．６　联合抑菌效果评价
将两种复配物质分别以各自最低浓度的１／４，
１／２，１倍复配后，采用三因子二次正交方法复配，得出
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第４１卷 第７期
２０１６年７月
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最优复配比例。
两种精油联合抑菌效果可用分级抑制浓度指数
（ｆｒａｃｔｉｏｎａｌ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ，ＦＩＣ）加以评价。
ＦＩＣ指数按下式计算：
ＦＩＣ指数＝ ＭＩＣ（复合）ＭＩＣ（单－Ａ）
＋ＭＩＣ（复合）ＭＩＣ（单－Ｂ）
。
ＦＩＣ指数的判断标准为：ＦＩＣ指数≤０．５，协同作
用；０．５＜ＦＩＣ指数≤１．０，相加作用；１．０＜ＦＩＣ指数＜
４．０，无相关作用；ＦＩＣ指数≥４．０，拮抗作用。
１．４　复配抑菌剂最佳比例的测定
对所需物品进行高压灭菌和紫外杀菌，在超净台
上操作。用移液枪分别吸取各菌悬液５００μＬ均匀涂
布于营养琼脂培养基上，然后用镊子取滤纸片平贴于
培养皿中央。根据罗勒与乳酸链球菌素的最低抑菌浓
度将罗勒精油和乳酸链球菌素进行配比，再用移液枪
将复配抑菌剂滴加在滤纸片上，设２个平行组和１个
菌液空白对照。将培养皿置于恒温培养箱中３７℃恒
温培养，每天进行观察，用十字交叉法测定其抑菌圈直
径，取平均值。
２　结果与讨论
２．１　 单一组分的抑菌效果研究
２．１．１　乳酸链球菌素的抑菌效果研究
乳酸链球菌素对不同细菌的抑菌效果图见图１。
大肠杆菌空白对照组 nisin 对大肠杆菌的效果
金黄色葡萄球菌空白对照组 nisin 对金黄色葡萄球菌的效果
图１　Ｎｉｓｉｎ对两种细菌的抑菌圈照片（１４４ｈ）
Ｆｉｇ．１Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｚｏｎｅ　ｐｉｃｔｕｒｅ　ｏｆ　ｎｉｓｉｎ　ｏｎ　ｔｗｏ　ｋｉｎｄｓ
ｏｆ　ｂａｃｔｅｒｉａ（１４４ｈｏｕｒｓ）
由图１可知，乳酸链球菌素对金黄色葡萄球菌的
抑菌效果很强，抑菌直径较大，在培养皿中与空白对照
比较明显。
乳酸链球菌素对不同细菌的抑菌圈直径随时间的
变化见图２。
100
90
80
70
60
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40
30
20
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0
2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
时间 （天 ）
抑
菌
圆
直
径
（
m
m
）
大肠杆菌
金黄色葡萄球菌
图２　Ｎｉｓｉｎ对大肠杆菌与金黄色葡萄球菌的抑菌
效果随时间的变化
Ｆｉｇ．２Ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｎｉｓｉｎ　ｏｎ　Ｅ．ｃｏｌｉ　ａｎｄ
Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ　ｗｉｔｈ　ｔｉｍｅ
由图２可知，其抑菌圈直径在记录的第２天为
９０ｍｍ，从第２～４天有缓慢下降的趋势，但是，从
第４天开始，抑菌圈直径一直维持在８０ｍｍ，并一直
保持稳定，并没有出现下降趋势；对大肠杆菌的抑菌效
力较差，抑菌圈明显较小，只在第２天与第３天维持在
８５ｍｍ，从第３天开始下降，且幅度较大，出现了曲线
突变；综上所述，说明乳酸链球菌素对金黄色葡萄球菌
具有长效抑菌作用，对于大肠杆菌的抑菌作用较差，因
此，需与其他的抑菌剂复配取得恰当的浓度达到抑菌
防腐作用。
２．１．２　罗勒精油抑菌效果研究
罗勒精油对不同细菌的抑菌效果图见图３。
大肠杆菌空白对照组 nisin对大肠杆菌的效果
金黄色葡萄球菌空白对照组 nisin 对金黄色葡萄球菌的效果
图３　罗勒精油对两种细菌的抑菌圈照片（１４４ｈ）
Ｆｉｇ．３Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｚｏｎｅ　ｐｉｃｔｕｒｅ　ｏｆ　ｂａｓｉｌ　ｏｎ　ｔｗｏ
ｋｉｎｄｓ　ｏｆ　ｂａｃｔｅｒｉａ（１４４ｈｏｕｒｓ）
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　　由图３可知，罗勒对细菌的抑菌效力较强，对金黄
色葡萄球菌与大肠杆菌的抑菌效果基本相当。
罗勒对细菌的抑菌效果图见图４。
100
90
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30
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10
0
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时间 （天）
抑
菌
圈
直
径
（
m
m
）
金黄色葡萄球菌
大肠杆菌
图４　罗勒精油对大肠杆菌与金黄色葡萄球菌的
抑菌效果随时间的变化
Ｆｉｇ．４Ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｂａｓｉｌ　ｏｎ　Ｅ．ｃｏｌｉ　ａｎｄ
Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ　ｗｉｔｈ　ｔｉｍｅ
由图４可知，罗勒对金黄色葡萄球菌与大肠杆菌
的抑菌效果优良。该精油在记录６天内抑菌圈率持续
为９０ｍｍ，无下降趋势，在接下来的几天，抑菌圈直径
曲线略有下降，最后趋于平稳；精油对金黄色葡萄球菌
的抑菌圈直径略小，说明其对金黄色葡萄球菌的抑菌
效果略差，但抑菌圈直径依然可以保持在８０ｍｍ。说
明罗勒精油对大肠杆菌与金黄色葡萄球菌均有抑制作
用，且效果比较显著。
２．２　罗勒精油和Ｎｉｓｉｎ的复合抑菌效果研究
２．２．１　罗勒精油与Ｎｉｓｉｎ的最低抑菌浓度（ＭＩＣ）
罗勒与Ｎｉｓｉｎ对大肠杆菌与金黄色葡萄球菌两种
鲜肉中常见的致腐微生物的最低抑菌浓度见表１。
表１　罗勒精油与Ｎｉｓｉｎ的最低抑菌浓度
Ｔａｂｌｅ　１Ｔｈｅ　ｍｉｎｉｍｕｍ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｂａｓｉｌ　ａｎｄ　Ｎｉｓｉｎ
大肠杆菌 金黄色葡萄球菌
罗勒精油（μＬ／ｍＬ） ３．７５　 １．８７５
乳酸链球菌素（Ｎｉｓｉｎ）（ｍｇ／ｍＬ） ７．５　 ０．９３７５
　　Ｎ．Ｓｏｌｏｍａｋｏｓ研究了乳酸链球菌素与百里香精
油各自以及复配对大肠杆菌的抑菌能力，研究发现：百
里香精油在０．６％浓度时对大肠杆菌有一定的抑制作
用，５００ＩＵ／ｇ或者１０００ＩＵ／ｇ效价的乳酸链球菌素单
独对大肠杆菌起作用时，其抑菌效果并不十分明显，只
有将０．６％的百里香精油和效价为５００ＩＵ／ｇ或者
１０００ＩＵ／ｇ乳酸链球菌素复配时对大肠杆菌有明显的
抑制作用。本研究中乳酸链球菌素的最低抑菌浓度结
果与上面研究报道十分接近。由表１可知，罗勒精油
对大肠杆菌与金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度基本相
当，对金黄色葡萄球菌的抑菌效果略优于对大肠杆菌
的抑菌效果。而乳酸链球菌素对两种细菌的最低抑菌
浓度差距比较明显，其对金黄色葡萄球菌的抑菌效果
明显优于对大肠杆菌的抑菌效果。
２．２．２　罗勒精油与Ｎｉｓｉｎ的最低杀菌浓度（ＭＢＣ）
罗勒精油与乳酸链球菌素对大肠杆菌和金黄色葡
萄球菌的最低杀菌浓度见表２。
表２　罗勒精油与Ｎｉｓｉｎ的最低杀菌浓度
Ｔａｂｌｅ　２Ｔｈｅ　ｍｉｎｉｍｕｍ　ｂａｃｔｅｒｉｃｉｄａｌ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｂａｓｉｌ　ａｎｄ　Ｎｉｓｉｎ
大肠杆菌 金黄色葡萄球菌
罗勒精油（μＬ／ｍＬ） ３．７５　 １．８７５
乳酸链球菌素（Ｎｉｓｉｎ）（ｍｇ／ｍＬ） １５　 ０．９３７５
　　由表２可知，罗勒精油对大肠杆菌与金黄色葡萄
球菌的最低杀菌浓度与最低抑菌浓度一致，这说明罗
勒精油对大肠杆菌与金黄色葡萄球菌具有很强的杀灭
作用，在一定时间内能够完全杀灭细菌，并保证细菌的
不可复发性。同时，乳酸链球菌素对金黄色葡萄球菌
的抑菌效果十分有效，并且其最低抑菌浓度与最低杀
菌浓度均为０．９３７５ｍｇ／ｍＬ。但是，乳酸链球菌素对
大肠杆菌的最低杀菌浓度为１５ｍｇ／ｍＬ，是其最低抑
菌浓度的２倍，这说明７．５ｍｇ／ｍＬ的乳酸链球菌素在
大肠杆菌培养２４ｈ将其抑制，但没有将大肠杆菌完全
杀灭，要完全杀灭大肠杆菌还需进一步提高乳酸链球
菌素的浓度。这一点与２．１．１的研究结果“乳酸链球
菌素对金黄色葡萄球菌的抑菌效果要好，并且其有效
抑菌时间要持久一些”相一致。
２．２．３　罗勒精油和Ｎｉｓｉｎ联合抑菌性能
将罗勒与乳酸链球菌素分别以各自最低浓度的
１／４，１／２，１倍复配后，采用三因子二次正交方法复配，
得出最优复配比例见表３。
表３　罗勒和Ｎｉｓｉｎ　ＭＩＣ及联合效果评价
Ｔａｂｌｅ　３ＭＩＣ　ｏｆ　ｂａｓｉｌ　ｅｓｓｅｎｔｉａｌ　ｏｉｌ　ｃｏｍｂｉｎｅｄ　ｗｉｔｈ　Ｎｉｓｉｎ　ｏｎ　ｔｗｏ
ｂａｃｔｅｒｉａ　ａｎｄ　ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅｉｒ　ｃｏｍｂｉｎｅｄ　ｅｆｆｅｃｔ
细菌 ＭＩＣ罗勒（μＬ／ｍＬ）
ＭＩＣＮｉｓｉｎ
（ｍｇ／ｍＬ）
ＭＩＣ罗勒复合
（μＬ／ｍＬ）
ＭＩＣＮｉｓｉｎ复合
（ｍｇ／ｍＬ）
ＦＩＣ
抑菌效果
评价
金黄色
葡萄球菌 １．８７５　 ０．９３７５　１
／４ＭＩＣ罗勒 １／２ＭＩＣＮｉｓｉｎ ０．７５ 相加作用
大肠杆菌 ７．５　 ３．７５　 １／２ＭＩＣ罗勒 １／２ＭＩＣＮｉｓｉｎ １ 相加作用
　　由表３中联合抗菌效果指标ＦＩＣ值可知，罗勒与
—３２—
第４１卷 第７期
２０１６年７月
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Ｃｈｉｎａ　Ｃｏｎｄｉｍｅｎｔ 基础研究　　
乳酸链球菌素复配后大肠杆菌的０．５＜ＦＩＣ指数≤１，
表现为相加作用。此外，复合抑菌剂对金黄色葡萄球
菌的抑菌效果０．５＜ＦＩＣ指数＜１，并且 ＦＩＣ值为
０．７５，表现为强烈相加作用，相对于罗勒精油与乳酸链
球菌素的单独抑菌效果来说效果尤为明显。
２．３　罗勒精油与乳酸链球菌素复合天然抑菌剂的研究
２．３．１　罗勒精油与乳酸链球菌素的复配抑菌作用
根据罗勒精油与 Ｎｉｓｉｎ的最低抑菌浓度，确定抑
菌剂的浓度梯度。采用三因子二次正交旋转设计进行
实验，确定最佳浓度比，见表４。
表４　罗勒精油与Ｎｉｓｉｎ的最低抑菌浓度
Ｔａｂｌｅ　４Ｔｈｅ　ｍｉｎｉｍｕｍ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
ｏｆ　ｂａｓｉｌ　ｅｓｓｅｎｔｉａｌ　ｏｉｌ　ａｎｄ　Ｎｉｓｉｎ
成分 ＭＩＣ大肠杆菌 ＭＩＣ金黄色葡萄球菌
罗勒（μＬ／ｍＬ） ７．５　 １．８７５
Ｎｉｓｉｎ（ｍｇ／ｍＬ） １．８７５　 ０．９３７５
２．３．１．１　复配抑菌剂对大肠杆菌的抑菌作用研究
根据罗勒精油与乳酸链球菌素的最低抑菌浓度，
确定罗勒精油与乳酸链球菌素的浓度配比，见表５。
表５　复配抑菌剂对大肠杆菌的抑菌浓度比
Ｔａｂｌｅ　５Ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｃｏｍｐｏｕｎｄ
ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ　ａｇｅｎｔ　ｏｎ　Ｅ．ｃｏｌｉ
实验组 罗勒精油（μＬ／ｍＬ）与Ｎｉｓｉｎ（ｍｇ／ｍＬ）的浓度比
１－１，１－２　 ３＋１
２－１，２－２　 ６＋１
３－１，３－２　 ９＋１
４－１，４－２　 ３＋２
５－１，５－２　 ６＋２
６－１，６－２　 ９＋２
　　由表５可知，第３，４，５，６组在观测的２１天内抑菌
圈一直维持在９０ｍｍ，没有下降趋势，无菌落出现，具
有较好的抑菌效果。第１组与第２组由于浓度较低，
抑菌效果表现不佳。由以上分析可知，虽然第３组中
的乳酸链球菌素浓度并未达到其对大肠杆菌的最低抑
菌浓度，但是仍然对大肠杆菌有较好的抑制作用，抑菌
圈一直维持在９０ｍｍ，并且罗勒第４组与第５组未达
到对大肠杆菌的最低抑菌浓度，但是由于乳酸链球菌
素的复配，使其抑菌效果增强，这说明将较低浓度的罗
勒精油与乳酸链球菌素两者复配，依然可以很好地抑
制大肠杆菌的生长。
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CK
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时间 （天）
抑
菌
圈
直
径
（ m
m）
图５　复配抑菌剂对大肠杆菌的抑菌效果随时间变化
Ｆｉｇ．５Ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｃｏｍｐｏｕｎｄ　ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ
ａｇｅｎｔ　ｏｎ　Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ　ｗｉｔｈ　ｔｉｍｅ
２．３．１．２　复配抑菌剂对金黄色葡萄球菌的抑菌作用
研究
根据罗勒精油与乳酸链球菌素的最低抑菌浓度，
确定罗勒精油与乳酸链球菌素的浓度配比，见表６。
表６　复配抑菌剂对金黄色葡萄球菌的抑菌浓度比
Ｔａｂｌｅ　６Ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｃｏｍｐｏｕｎｄ　ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ
ａｇｅｎｔ　ｏｎ　Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ
实验组 罗勒精油（μＬ／ｍＬ）与Ｎｉｓｉｎ（ｍｇ／ｍＬ）的浓度比
１－１，１－２　 １＋０．５
２－１，２－２　 １．５＋０．５
３－１，３－２　 ２＋０．５
４－１，４－２　 １＋１
５－１，５－２　 １．５＋１
６－１，６－２　 ２＋１
　　由表６可知，第２，３，６组在观测的２１天内抑菌圈
直径一直维持在９０ｍｍ，没有下降趋势，无菌落出现，
达到了较好的抑菌效果。其中第２组罗勒精油和乳酸
链球菌素均未达到各自对金黄色葡萄球菌的最低抑菌
浓度，但仍表现出较好的抑菌效果，说明罗勒精油与乳
酸链球菌素产生了明显的协同作用。其他组则维持在
８５ｍｍ左右，表现出较好的抑菌效果。
100
90
80
70
60
50
40
30
20
10
0
2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21
时间 （天 ）
抑
菌
圈
直
径
（ m
m
）
CK
alb0.5
a1. 5b0. 5
a2b0. 5
a1b1
a1. 5b1
a2b1
图６　复配抑菌剂对金黄色葡萄球菌的
抑菌效果随时间变化
Ｆｉｇ．６Ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｃｏｍｐｏｕｎｄ　ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ
ａｇｅｎｔ　ｏｎ　Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ　ｗｉｔｈ　ｔｉｍｅ
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基础研究　　第４１卷 第７期
２０１６年７月
　　　　　　　　　　　　　　　中 国 调 味 品
Ｃｈｉｎａ　Ｃｏｎｄｉｍｅｎｔ
２．３．２　罗勒精油与乳酸链球菌素复配抑菌的最佳比
例
复配抑菌剂对大肠杆菌与金黄色葡萄球菌的
抑菌效果实验表明：当复配比例为３∶１时，在观测
的２１天中均无菌落生长，此时的抑菌效果优于其他
组，而且也明显优于在此浓度下罗勒精油或者乳酸
链球菌素单独使用时的抑菌效果，这表明罗勒精油
与乳酸链球菌素在复配比例为３∶１时抑菌效果最
好。因此，综合考虑选取罗勒精油和乳酸链球菌素
的最佳复配比例为３∶１。
３　结论
采用滤纸片扩散法研究罗勒精油及乳酸链球菌
素对大肠杆菌与金黄色葡萄球菌的抑菌活性，得知
罗勒精油对大肠杆菌与金黄色葡萄球菌均具有强效
抑菌作用，乳酸链球菌素对金黄色葡萄球菌有较强
的抑制作用。罗勒精油对大肠杆菌的 ＭＩＣ和 ＭＢＣ
均为３．７５μＬ／ｍＬ，对金黄色葡萄球菌的 ＭＩＣ 和
ＭＢＣ均为１．８７５μＬ／ｍＬ；乳酸链球菌素对大肠杆菌
的 ＭＩＣ和 ＭＢＣ分别为７．５，１５ｍｇ／ｍＬ，对金黄色葡
萄球菌的 ＭＩＣ和 ＭＢＣ均为０．９３７５ｍｇ／ｍＬ。
将罗勒精油与乳酸链球菌素（Ｎｉｓｉｎ）进行复配，对
大肠杆菌与金黄色葡萄球菌的抑菌作用较好，且优于
罗勒精油或乳酸链球菌素单独使用，其抗菌联合指数
ＦＩＣ为０．７５，表明罗勒精油与乳酸链球菌素（Ｎｉｓｉｎ）的
复配具有协同作用。最后通过复配抑菌实验，得出罗
勒精油（μＬ）与乳酸链球菌素（ｍｇ）的最佳配比为３∶１。
以上研究结果表明：天然复合抑菌剂复配后较单
独使用抑菌效果更好，应用于肉制品保鲜领域不但能
有效延长商品的货架寿命，亦可降低抑菌剂单独使用
的浓度，提高使用的安全性。
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