全 文 ：高效液相色谱法测定
云南产龙胆习用品头花龙胆中 3种成分的含量*
王琳，段宝忠，聂茜茜，尚飞能，朱万芸，陶汝俊
(大理学院药学院，大理 671000)
摘 要 目的 测定云南产龙胆习用品头花龙胆中龙胆苦苷、獐牙菜苦苷、獐牙菜苷的含量，并研究头花龙胆与正
品坚龙胆药材化学成分的相似性，为其作为正品龙胆使用提供科学依据。方法 采用高效液相色谱( HPLC) 法;色谱柱
为 Agilent Zorbax SB C18( 4．6 mm × 250 mm，5 μm) ;流动相为甲醇-水，梯度洗脱;流速 1．0 mL·min
－1，检测波长 238 nm;
柱温25 ℃，进样量 10 μL。结果 龙胆苦苷、獐牙菜苦苷、獐牙菜苷 3种成分在头花龙胆中均有分布。结论 头花龙胆
中含有丰富的环烯醚萜苷类成分，特别是龙胆苦苷成分含量较高，其 HPLC 色谱与正品坚龙胆药材极为相似，将头花龙
胆作为正品龙胆药材的替代品使用有一定合理性。所建立方法简单，结果准确，可用于龙胆类药材的品质评价。
关键词 头花龙胆;坚龙胆;龙胆苦苷;獐牙菜苦苷;獐牙菜苷;色谱法，高效液相
中图分类号 Ｒ282; Ｒ927．2 文献标识码 B 文章编号 1004－0781( 2015) 04－0515－03
龙胆为龙胆科植物条叶龙胆(Gentiana manshurica
Kitag．)、龙胆(G． scabra Bge．)、三花龙胆(G． triflora
Pall．)或滇龙胆(G．rigescens Franch．)的干燥根和根茎。
其中滇龙胆主产于云南、四川等地，药材又名坚龙胆。
近年来，龙胆药材产量逐年下降，而需求量却不断增
加。据笔者前期实地调查发现，云南药材市场上，特别
是滇西北地区的大理三月街、大理金贝、洱源三营等药
材市场上，正品龙胆“坚龙胆”药材的量较小，而其习
用品如头花龙胆较多，且产量大，在云南民间广泛使
用，部分制药企业也将其作为龙胆使用。现代研究表
明，龙胆属植物中含有的环烯醚萜类成分(龙胆苦苷、
獐牙菜苦苷、獐牙菜苷等)具有保肝利胆作用［1］，2010
年版《中华人民共和国药典》亦采用高效液相色谱
(HPLC)法测定龙胆药材中的龙胆苦苷作为其含量控
制指标。罗集鹏等［2］通过硅胶薄层色谱方法研究表
明，头花龙胆中含有龙胆苦苷、獐牙菜苦苷和獐牙菜苷
成分。有关头花龙胆环烯醚萜类成分含量的研究，笔
者仅见采用薄层色谱-光密度法测定其龙胆苦苷成分
含量的报道［3］，未见文献报道采用 HPLC 法测定头花
龙胆中环烯醚萜类成分。为扩大龙胆药源，探讨其与
正品龙胆化学成分的相似性，笔者建立了应用 HPLC
收稿日期 2014－01－17 修回日期 2014－07－16
基金项目 * 云南省科技计划项目(2012CG019) ;云南省
教育厅科学研究基金重点项目(20140135)
作者简介 王琳(1977－) ，女，云南丽江人，讲师，学士，主
要从事药物化学研究工作。电话:0872 － 2257420，E-mail:
wanglin1025wdx@ 163．com。
通信作者 段宝忠(1983－) ，男，云南禄丰人，副教授，硕
士，研究方向:云南优势药用植物资源开发利用和质量控制研
究。电话:0872－2257411，E-mail:bzduan@ 126．com。
同时测定头花龙胆中 3 种环烯醚萜苷类成分的方法，
对云南地区 8 个批次的头花龙胆药材含量进行了分
析，并将其与云南主产的正品坚龙胆(G． rigescens
Franch．)进行了比较，以期为头花龙胆作为正品龙胆
药材使用提供科学依据。
1 仪器与试药
1．1 仪器 Agilent 1200 型高效液相色谱系统(四元
梯度泵、自动进样器，柱温箱，G1314C /D VWD 检测
器，Agilent Chemstation 工作站) ，超声波清洗仪(昆山
市超声仪器有限公司，型号:KQ-400KDE) ，电子分析
天平(型号:AND GH-252) ，电热鼓风干燥箱(上海市
嵩明实验仪器厂，型号:01A-2B) ，中草药粉碎机(天津
泰斯特仪器有限公司，型号:FY-135)。
1．2 试药 14批龙胆药材由笔者分别采集或购于大
理三月街和洱源三营药材市场。经我院段宝忠副教授
鉴定为龙胆科植物头花龙胆(Gentiana cephalantha
Franch．ex Hemsl．)的根及根茎，凭证标本存放于大理
学院药学院中药标本馆。药材经烘干后粉碎，过筛孔
内径 0．250 mm 筛，备用。龙胆苦苷(Gentiopicroside，
批号:MUST-12081505)、獐牙菜苦苷(Swertiamarin，批
号:MUST-11012401)、獐牙菜苷 (Sweroside，批号:
MUST-11020802)3 种对照品购于成都曼思特生物科
技有限公司，对照品纯度经 HPLC 峰面积归一化法计
算均＞98%。甲醇、乙腈(Fisher Scientific，Fairlawn New
Jersey)为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2．1 色谱条件 Agilent Zorbax-SB C18柱(4．6 mm ×
250 mm，5 μm) ;流动相为甲醇(A)-水(B) ;梯度洗脱:
0 ～10 min，20%→30% A;10～17 min，30%→35% A;17
～30 min，35% A;流速 1．0 mL·min－1;柱温 25 ℃;检
·515·医药导报 2015年 4月第 34卷第 4期
测波长 238 nm;进样量 10 μL。
2．2 对照品溶液的制备 取龙胆苦苷、獐牙菜苦苷、
獐牙菜苷各对照品适量，精密称定，加甲醇制成每毫升
含 6．01，2．22，1．16 mg 的混合对照品储备液，超声溶
解，即得，对照品色谱图见图 1。
2．3 供试品溶液的制备 精密称取样品粉末 0．5 g，
置于 50 mL 锥形瓶中，精密加入 50%甲醇 20 mL，混
匀，60 ℃下超声提取 60 min(100 kHz) ，补足减失重量
后，滤过，取上清液用孔径 0．45 μm 微孔滤膜滤过，作
为供试品溶液，备用。
2．4 线性关系的考察 取上述对照品储备液，采用逐级
稀释法分别制得龙胆苦苷浓度为 26．46，132．32，661．58，
1 538．56，3 077．12，3 846．40，4 808．00，6 010．00 μg·mL－1;
獐芽苦菜苷浓度为 9．78，48．88，244．38，568．32，1 136．64，1
420．80，1 776．00，2 220．00 μg·mL－1;獐牙苦苷浓度为5．11，
25． 54，127．69，296． 96，593． 92，742． 40，928． 00，
1 160．00 μg·mL－1的对照品标准溶液。按“2．1”项下色谱
条件进行HPLC分析，以峰面积为纵坐标(Y)，浓度为横
坐标(X)，绘制标准曲线，得到回归方程和相关系数，见表
1。
2．5 精密度实验 分别精密吸取对照品混合溶液适
量，按“2．1”项下色谱条件连续进样 6 次和连续进样
3 d;计算各对照品峰面积的 ＲSD，3 个对照品的日间
和日内的 ＲSD分别＜1．6%和 1．3%，表明仪器精密度良
好。
2．6 重复性实验 取同一份头花龙胆药材(T4)粉末
6份，按“2． 3”项下方法平行制备供试品溶液，按照
“2．1”项下色谱条件进样分析。结果显示龙胆苦苷、獐
牙菜苦苷、獐牙菜苷含量的 ＲSD均＜1．9%。
2．7 稳定性实验 取“2．3”项下供试品溶液，按“2．1”
项下色谱条件，分别在 0，4，8，12，18，24，48 h 进行测
定，记录峰面积，计算龙胆苦苷、獐牙菜苦苷、獐牙菜苷
峰面积的 ＲSD。结果显示，供试品溶液中龙胆苦苷、
獐牙菜苦苷、獐牙菜苷峰面积的 ＲSD 分别为2．1%，
2．5%，3．3%，表明供试品溶液在 48 h内稳定。
2．8 加样回收率实验 取已知含量的头花龙胆药材
(T4)粉末 6份，每份约 0．5 g，精密称定，分别精密加入适
量对照品，按“2．3”项下方法制备供试品溶液，按“2．1”项
下色谱条件测定，计算各对照品的回收率和 ＲSD，结果显
示龙胆苦苷、獐牙菜苦苷、獐牙菜苷的平均加样回收率在
97．2%～102．7%之间，ＲSD为 1．3%～5．5%。
2．9 样品的含量测定 将 8 批头花龙胆药材和 6 批
坚龙胆药材按“2．3”项下方法制备，每个样品平行 2
份，按外标法计算 3个成分的含量，样品 HPLC 色谱图
见图 1，含量测定结果见表 2。
3 讨论
笔者比较了甲醇-水和乙腈-水两种流动相系统，
结果表明以甲醇-水流动相为佳，各主要色谱峰分离度
好，综合考虑保留时间、柱压、分离度及峰形，最终选择
以甲醇-水系统进行梯度洗脱。
本研究采用 HPLC 法，根据对照品保留时间鉴定
了头花龙胆样品中的 3 个环烯醚萜类成分。结果表
明，所测定的 8批头花龙胆样品中，均含有龙胆苦苷、
獐牙菜苦苷、獐牙菜苷 3 种成分。不同批次头花龙胆
药材中龙胆苦苷、獐牙菜苦苷、獐牙菜苷的含量之间存
在一定的差异，3种成分的含量范围分别为 1．35% ～9．
67%，0．08% ～ 0．18%和 0．01% ～ 0．11%。3 种成分中，
龙胆苦苷的含量最高，平均含量为 5．24%。龙胆苦苷
是龙胆的有效成分，也是 2010 年版《中华人民共和国
药典》龙胆药材含量测定的指标成分，《中华人民共和
国药典》规定坚龙胆含龙胆苦苷(Cl6H20O9)不得少于
1．5%［1］。在所检测的 8批头花龙胆样品中，7
1．獐牙菜苦苷; 2．龙胆苦苷; 3．獐牙菜苷
图 1 坚龙胆(A)、对照品(B)和头花龙胆(C)HPLC色谱图
·615· Herald of Medicine Vol. 34 No. 4 April 2015
表 1 对照品的线性关系和范围
化合物 回归方程 r
线性范围 /
(μg·mL－1)
龙胆苦苷 Y= 9．029 8X+70．619 0．999 9 26．46～6 010．00
獐牙菜苦苷 Y= 17．097X－94．772 0．999 9 9．78～2 220．00
獐牙菜苷 Y= 10．551X+43．689 0．999 9 5．11～1 160．00
表 2 14批龙胆药材中 3种成分含量测定结果 %，n= 2
编号 来源 基原
龙胆
苦苷
獐牙菜
苦苷
獐牙
菜苷
T1 云南省大理市 G．cephalantha 1．35 0．08 0．07
T2 云南省大理市 G．cephalantha 4．71 0．11 0．08
T3 云南省大理市 G．cephalantha 4．45 0．10 0．09
T4 云南省洱源县 G．cephalantha 6．90 0．12 0．07
T5 云南省大理市 G．cephalantha 6．30 0．15 0．11
T6 云南省漾濞县 G．cephalantha 9．67 0．18 0．11
T7 云南省洱源县 G．cephalantha 5．45 0．13 0．07
T8 云南省大理市 G．cephalantha 3．15 0．11 0．08
J1 云南省兰坪县 G．rigescens 2．60 0．08 0．80
J2 云南省兰坪县 G．rigescens 3．60 0．11 0．02
J3 云南省漾濞县 G．rigescens 2．34 0．07 －
J4 云南省大理市 G．rigescens 6．67 0．21 0．10
J5 云南省巍山县 G．rigescens 2．00 － －
J6 云南省洱源县 G．rigescens 4．33 0．08 －
批头花龙胆药材的龙胆苦苷含量均＞1．5%，符合 2010
版《中华人民共和国药典》对正品龙胆含量测定的要
求。从表 2可看出，与正品坚龙胆药材相比，头花龙胆
中獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、獐牙菜苷的含量普遍高于正
品坚龙胆药材。这与罗集鹏等［2］研究认为头花龙胆药
材中龙胆苦苷含量较低，药材质量较次结论相反。从
HPLC色谱图来看，头花龙胆与正品坚龙胆药材色谱
图极为相似，因此，这些地区性用药将头花龙胆作为龙
胆使用，也有一定道理，但其品质优劣程度除了化学含
量方面的评价外，还应结合药理实验进行深入研究。
参考文献
［1］ DUAN B Z，HU J Y，HUANG L F，et al． Chemical fing-
erprint analysis of Gentianae Ｒadix et Ｒhizoma by high-
performance liquid chromatography［J］． Acta Pharmaceutica
Sinica B，2012，2(1) :46－52．
［2］ 罗集鹏，楼之岑．中药龙胆的原植物与生药品质评价的研
究［J］．北京大学学报(医学版) ，1985，17(2) :96－107．
［3］ 杨智，张玉碧，杨占芬，等．头花龙胆各部位中龙胆苦苷的
含量测定［J］．白求恩医科大学学报，1985，11(5) :488－
491．
DOI 10．3870 /yydb．2015．04．026
六盘山区 5个批次土贝母栽培品的质量考察*
冯乐文1，张学良2，王霞英2
(1．宁夏回族自治区固原市原州区妇幼保健所，固原 756000;2．固原市药品检验所，固原 756000)
摘 要 目的 考察六盘山区人工种植土贝母的质量。方法 按照《中华人民共和国药典》对不同产地的 5个批次样
品进行检验。结果 浸出物平均含量为 21．6% ( 规定不少于 17．0%) ，土贝母苷甲平均含量为 1．15% ( 规定不少于1．0%) 。
结论 不同产地的 5个批次的土贝母质量均符合《中华人民共和国药典》规定，为开展该品种的规范化种植提供依据。
关键词 土贝母;种植，规范化; 质量评价
中图分类号 Ｒ282．71; Ｒ927．2 文献标识码 B 文章编号 1004－0781( 2015) 04－0517－02
土贝母为葫芦科植物土贝母［Bolbostemma
paniculatum (Maxim．)Franquet］的干燥鳞茎。主要有
效成分为土贝母苷甲、乙、丙、丁。土贝母苷甲具有较
强的抗肿瘤和抗病毒活性［1］。随着对土贝母药理作
用研究的不断深入，其药用价值逐渐被市场认可［2-4］。
由于野生资源日渐枯竭，其产量难以满足社会需求，人
收稿日期 2014－01－17 修回日期 2014－08－12
基金项目 * 固原市科技发展计划项目(2013013)
作者简介 冯乐文(1968－) ，男，甘肃兰州人，副主任药师，
研究 方 向:合 理 用 药。电 话: (0)13323549368，E-mail:
f68103w14@ 126．com。
工种植成为必然选择。固原市近几年已经大量种植土
贝母。按照《中华人民共和国药典》2010 年版一部的
要求，对固原市人工栽培的土贝母质量进行考察。
1 仪器与试药
1．1 仪器 高效液相色谱仪(岛津 LC-10ATvp 高效液
相色谱仪，SPD-10Avp紫外检测器，浙江大学 N-2000色
谱工作站) ，BP121S电子天平，ＲJM-28-10茂福炉(沈阳
市电炉厂) ;SP-4400 型积分仪(美国) ;岛津 ur-2100 型
分光光度计(日本) ;WZZ-T型旋光仪(上海光学仪器修
理厂) ;WＲZ-1型数字熔点仪(上海物理光学仪器厂) ;
7605型红外分光光度计(上海分校仪器厂)。
·715·医药导报 2015年 4月第 34卷第 4期