全 文 ：通过研究 ,在前列平胶囊原标准的基础上 ,增加了赤芍
中芍药苷的含量测定 ,本实验确定的方法简便 、快速 , 准确可
靠 , 灵敏度高 ,可用于前列平片的含量测定 , 以确保该药的安
全 、合理使用。
贵州不同产地坚龙胆药材及饮片中龙胆苦苷含量测定
韩双 ,李玮 ,席先蓉 ,王建科
(贵阳中医学院 ,贵州 贵阳 550002)
摘要:目的　测定贵州产坚龙胆中龙胆苦苷的含量 ,并评价不同产地坚龙胆药材及饮片的质量。方法　利用正交试验研
究了龙胆苦苷的最佳提取方法。结果　测定了贵州不同产地坚龙胆药材及饮片中龙胆苦苷的含量。结论　贵州不同地区间
龙胆药材及饮片质量均符合《中国药典》 2005 年版要求 , 各地区之间无明显差异。
关键词:坚龙胆　龙胆苦苷　提取工艺
中图分类号:R284.2　文献标识码:A　文章编号:1672-7738(2008)09-0597-03
Determination of gentiopicroside in Gentiana rigescens and its herbs
pieces from different areas in Guizhou Province
HAN Shuang ,LI Wei ,XI Xian-rong ,WANG Jian-ke
(Guiyang Co lleg e of T raditional Chinese Medicine, Guiyang 550002)
ABSTRACT:OBJECTIVE　To determine the content o f gentiopicroside.To eva luate the quality o f Gentiana rige scens and
its he rbs pieces of different habitats in Guizhou P rovince.METHODS　The ex tract me thods o f gentiopicro side w as sdudied by
or thogonal experiments.RESULTS　The contents of gentiopicro side in Gentiana rig escens and its herbs pieces o f 11 different
habita ts in guizhou P rov ince w ere determined.CONCLUSION　The quality o f Gentiana rigescens and its herbs pieces in differ-
ent habitats in Guizhou Province are up to the Chinese Pharmacopoeia , and the individual v aribility is significant.
KEY WORDS:Gentiana rigescens;gentiopicr oside;ex traction pr ocess
　　坚龙胆为龙胆科植物坚龙胆(Gentiana rigescens
Franch.)的根及根茎 , 主产于广西 、贵州 、四川 、云南等省。
具有保肝 、健胃 、抗炎 、利胆等作用 , 为常用中药之一[ 1] , 本实
验通过单因素比较和正交试验研究了龙胆苦苷的最佳提取
方法 ,测定了贵州不同产地坚龙胆药材及饮片中龙胆苦苷的
含量 ,评价了不同产地坚龙胆的质量。
1　仪器 、试剂与样品采集
1.1 仪器　LC-20AT 高效液相色谱仪(SPD-20A 检测器 ,
Lc-solution/ Lite 工作站);远红外干燥箱(YHG-600-S-
Ⅱ ,上海贺德实验设备有限公司);十万分之一电子天平
(AUW220D ,岛津),超声清洗机(HS10260D , 天津恒奥科技
公司)。
1.2 试药　龙胆苦苷对照品(中国药品生物制品检定所 , 批
号 110770-2005110);咖啡因对照品(中国药品生物制品检
定所 ,批号 171215 -200406);甲醇(色谱醇天津科密欧公
司);水(重蒸馏水);其余试剂均为分析纯。
1.3 样品采集　坚龙胆药材 2007 年 10 月采自贵州省不同
地区 ,经贵阳中医学院生药教研室周汉华副教授鉴定为龙胆
科植物坚龙胆。坚龙胆饮片按 05 年版药典方法炮制[ 2] , 样
品分别阴干粉碎后过 60 目筛 , 保存。
2　实验方法
2.1 色谱条件　色谱柱为 Alltima C18(4.6mm ×250mm ,
5μm);以甲醇-水(30∶70)为流动相;流速 1.0mL ·min-1 ;
检测波长为 270nm;柱温为 30℃;理论板数按龙胆苦苷峰计
算应不低于 3000;进样量为 10μL 。
图 1　色谱图
A-标准品及内标物、B-样品及内标物;1-咖啡因 、2-龙胆苦苷
·597·齐鲁药事·Qilu Pharmaceutical Af f airs 2008 Vol.27 , No.10
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液的制备:精密称取龙胆苦苷对照品 50mg ,
用甲醇定容至 25mL ,溶解即得浓度 2mg·m L-1的龙胆苦苷
对照品溶液。
2.2.2 内标溶液的制备:精密称取咖啡因对照品 125mg , 用
甲醇定容至 250m L , 溶解即得浓度为 0.5mg ·m L-1的内标
溶液。
2.2.3 样品溶液的制备:精密称取各号样品粉末(过 40 目
筛)约 0.5 g , 置于 50mL 具塞锥形瓶中 , 精密加入甲醇
15mL , 密塞 ,超声提取 30min , 提取 2 次后合并滤液 , 置 60℃
水浴真空旋转蒸干 , 残渣精密加入甲醇 10m L 溶解 , 精密吸
取样品液 ,内标溶液各 1m L 于 5mL 容量瓶中 , 用甲醇定容
至刻度 ,即得供试品溶液。
3　结果与分析
3.1 提取方法的确定
3.1.1 不同提取方法对测定结果的影响:本实验先后比较了
用回流法 、超声法 、冷浸法(药典法)提取龙胆苦苷的效率[ 3] 。
精密称定龙胆药材 0.5g , 冷浸法为精密加入甲醇 10m L , 冷
浸 12h ,时时振摇 , 精密取上清液 1mL , 置 10mL 量瓶中 , 加
甲醇稀释至刻度;超声法加入甲醇 10mL , 超声两次 ,第一次
40min , 第二次 30min。回流法加入甲醇 10m L , 回流提取两
次 ,第一次 45min , 第二次 30min。索氏提取法为加入甲醇
30mL , 水浴提取 2h , 静置 , 过滤 , 蒸干 , 精密加入甲醇 10m L
溶解。不同方法龙胆苦苷提取率依次为超声法(2.425%)>
冷浸 法(2.342%)>索氏提取法(2.229%)>回流法
(2.177%)。结果表明:超声法提取时间短 , 提取效率高 , 故
本实验采用超声提取法。
3.1.2 不同溶剂对测定结果的影响:精密称取同一样品
0.5g ,分别加甲醇 、乙醇 、水各 10mL , 超声 60min , 比较提取
龙胆苦苷的含量 , 不同溶剂龙胆苦苷提取率依次为甲醇
(2.425%)>水(1.948%)>乙醇(1.047%)。结果表明:甲
醇提取的效果最好 ,故选用甲醇作为提取溶剂 。
3.1.3 正交试验:选择提取时间 、溶剂量 、提取次数 , 每个因
素取三个水平进行考察 , 考察因素及水平见表 1。采用 L9
(34)正交试验表设计试验方案 ,以龙胆苦苷的含量作为测评
指标。
表 1 L9(34)正交试安排验表
编号 A 时间(min) B溶剂量(%) C(次数) 含量(%)
1 1(20) 1(10) 1 1.584
2 1(20) 2(15) 2 2.147
3 1(20) 3(20) 3 2.220
4 2(30) 1(10) 2 1.951
5 2(30) 2(15) 3 2.221
6 2(30) 3(20) 1 1.839
7 3(40) 1(10) 3 1.890
8 3(40) 2(15) 1 1.812
9 3(40) 3(20) 2 2.047
均值 1 1.984 1.808 1.808
均值 2 2.004 2.060 2.060
均值 3 1.916 2.035 2.035
极差 0.088 0.252 0.252
　　表 2 方差分析表
来源 离差平方和 自由度 F F临界值
A 0.013 2 1.000 19
B 0.115 2 35.608 19
C 0.229 2 70.716 19
误差 0.013 2
　注:F(2.2)=19
直观分析表明 , 影响龙胆苦苷提取率的因素依次为:提
取次数>提取时间>提取溶剂量。
方差分析见表 2 ,结果表明提取时间对龙胆苦苷的影响
最小 , 提取次数 、提取溶剂量有显著性差异。 综合直观分析
和方差分析结果 , 最佳提取方法为 A2C2B2 为最佳 , 即样品
每次用 15m L甲醇超声提取 2 次 , 每次提取 30min。
3.2 线性关系考察　分别吸取浓度为 2mg · mL-1的对照品
溶液 0.2 , 0.4 , 0.6 , 0.8 , 1.0 , 1.2 , 1.4 , 1.6m L于 5mL 的量瓶
中 ,再各向其中精密加入 1m L的内标溶液 ,用甲醇定容即得
浓度梯度 , 用上述色谱条件对各浓度进行测定。以标准品浓
度为横坐标 , 对照品和内标物的峰面积比值为纵坐标 , 进行
线性回归 , 得回归方程:Y =4.7333 X +0.0251 , r =
0.9999。表明在 0.08 ～ 0.64mg ·m L-1浓度范围内线性关
系良好。
3.3 精密度考察　精密吸取对照品溶液 1m L 于 5m L 量瓶
中 ,再向其中精密加入 1mL 内标溶液 , 用甲醇定容至刻度。
用此溶液在上述色谱条件下连续测定 6次 , 用对照品与内标
物的峰面积比值计算精密度 , 其 RSD 为 0.25%。
3.4 重复性实验　精密称取坚龙胆(水城)样品粉末 6 份 , 每
份约 0.5 g , 按供试品溶液的制备方法制得供试品溶液 , 在上
述色谱条件下进行测定。分别求出其含量 , 计算得平均含量
为 3.990%, RSD 为 2.6%。
3.5 稳定性实验　用考察精密度所用的龙胆苦苷对照品溶
液 , 分别于 0、4、8、12 、16、24h 进行测定 , 以龙胆苦苷与内标
物峰面积比值计算 RSD 为 2.5%, 结果表明龙胆苦苷至少
在 24h 内稳定。
3.6 加样回收率实验　精密称取含量为 3.990%的坚龙胆
(水城)样品粉末 5 份 , 每份约 0.25g , 精密加入龙胆苦苷标
准溶液适量 , 按供试品溶液的制备方法进行制备。用上述色
谱条件进行测定 , 计算回收率 ,结果见表 3。
表 3 龙胆苦苷的回收率测定结果
称样量
(g)
样品含量
(mg)
加入量
(mg)
测得量
(mg)
回收率
(%)
平均回收率
(%)
RSD
(%)
0.255 10.174 9.800 20.271 103.03
0.254 10.174 9.800 20.348 103.82
0.254 10.174 9.800 20.355 103.89 102.4 1.69
0.253 10.174 9.800 19.976 100.01
0.255 10.174 9.800 20.101 101.13
3.7 样品测定　取样品按上述方法制备 、测定 ,结果见表 4。
·598· 齐鲁药事 Qilu Phar maceu tical Af f ai rs 2008 Vol.27 , No.10
表 4 龙胆药材样品测定结果(n =3)
样品(药材) 龙胆苦苷含量(%)药材 饮片
龙里 4.808 5.095
乌当 2.711 3.418
六枝 3.545 3.782
沿何 2.805 3.263
安顺 2.113 2.590
兴义 2.500 4.024
遵义 3.616 2.738
花溪 3.405 3.458
大方 3.804 4.161
都匀 2.608 3.202
水城 3.997 4.502
4　结论
4.1 提取方法比较结果表明 , 以超声法处理样品所得龙胆苦
苷的含量为最高。 4 种方法所得供试品溶液中龙胆苦苷含
量的顺序为:超声法>冷浸法>索氏法>回流法。超声法和
冷浸法所制备的供试液中龙胆苦苷的含量明显高于索氏法
和回流法 ,这可能与龙胆苦苷受热不稳定有关 。超声法与冷
浸法比较无明显差异 , 但超声提取法与冷浸提取法相比 , 超
声法所得龙胆苦苷含量略高于冷浸法 ,并具有简便 、易行 、快
速的优势。
4.2 本实验还就超声法提取溶剂进行了考察 , 结果表明甲醇
提取龙胆苦苷的效率最高 , 故选用甲醇为提取溶剂 , 选择提
取时间 、溶剂量 、提取次数三个因素 , 每个因素取三个水平进
行考察 , 以龙胆苦苷的含量作为测评指标 ,进行正交试验 , 确
定了最佳的提取工艺。
4.3 测定结果表明 11 批坚龙胆药材及饮片中龙胆苦苷的含
量分别在 2.113%～ 4.808%、2.590%～ 5.095%, 均达到
《中国药典》规定的要求。有关 H PLC 法测定龙胆苦苷含
量 , 文献中流动相条件多以甲醇-水为洗脱系统。本文研究
表明 , 以甲醇-水系统为流动相测定龙胆苦苷 , 可使龙胆苦
苷的分离度 、理论塔板数 、峰的对称性及出峰时间达到满意
的结果。
参考文献
[ 1] 徐国钧 ,徐珞珊.中国药材学(上).北京:中国医药科技出版社 ,
1996:365.
[ 2] 《中国药典》2005年版(一部).北京:化学工业出版社 , 2005:64.
[ 3] 俞桂新 ,董婷霞 ,詹华强 ,等.龙胆药材中龙胆苦苷含量测定样品
制备方法比较.现代中药研究与实践 , 2004 , 18(5):38.
眼氨肽注射液中氨基酸的含量测定
马春华 ,王丽娥 ,殷馨 ,商超 ,崔宁
(济南维尔康生物化学制药有限公司 ,山东 济南 250100)
摘要:目的　测定眼氨肽注射液中氨基酸的含量。方法　运用 AccQ · Tag 方法对眼氨肽注射液中氨基酸进行衍生化处
理 ,用反相 HPLC 分离衍生产物 , 用紫外检测器以外标法在 248nm 处定量检测衍生化物。结果　各种氨基酸的含量符合规
定。结论　本方法峰分离度好 ,结果准确可靠 , 可以用于眼氨肽注射液的含量测定。
关键词:眼氨肽注射液　氨基酸　含量测定
中图分类号:R927.2　文献标识码:A　文章编号:1672-7738(2008)09-0599-02
Assaying amino acid in Ocular Extractives Injection
MA Chun-hua ,WNAG Li-e , YIN Xin , SHANG Chao ,CUI Ning
(Ji′nan Welcome Biochem.Pharma.Co., L td., Ji′nan 250100)
ABSTRACT:OBJECTIVE　To assay the content of amino acids in Ocula r Ex tr actives Injection.METHODS　Use the me th-
od o f AccQ · Tag to make the amino acid that in Ocula r Ex tractives de riv ative , and use the RP-HPLC separa tion derivativ e
product , then use the ex ternal standa rd me thod by UV detecto r to assay the derivative material at 248nm.RESULTS　After u-
sing the me thod of AccQ · Tag to make the amino acid that in Ocular Ex tractiv es derivative , the content o f every amino acid is
acceptable.CONCLUSION　After using the me thod of AccQ· Tag to make the amino acid that in Ocular Ex tractives derivativ e
, peak separation very nice , the results are reliability and accuracy , the method can be used fo r the determina tion of Ocular Ex-
tractive s Injection.
KEY WORDS:Ocula r Ex tractives Injection;amino acid;determination
　　眼氨肽注射液(Ocular Ex tractiv es Injection)为牛眼球 经消毒再以乙醇沉淀蛋白质后制得的灭菌水溶液。 1m L 相
·599·齐鲁药事·Qilu Pharmaceutical Af f airs 2008 Vol.27 , No.10