全 文 ：贵州道地药材坚龙胆 HPLC特征图谱研究
李 莎1，海 市2，薛朝金1，汪 勋1，陈昆先1，王义飞1，游黔平1
( 1. 贵州省毕节地区药品检验所，贵州 毕节 551700; 2. 贵州省毕节地区食品药品监督管理局，贵州 毕节
551700)
摘要 目的:建立贵州道地药材坚龙胆 HPLC 特征图谱分析方法。方法: 采用 HPLC 法，色谱柱为 Diamonsil
C18柱( 250 mm × 4. 6 mm，5μm) ，以乙腈( A) -1%冰醋酸水溶液( B) 为流动相，梯度洗脱( 0 ～ 50 min: A 为 5%→
20%，B为 95%→80% ) ，流速: 1. 0 mL /min。检测波长为 254 nm，柱温为 30℃。以中药色谱特征图谱相似度评价系
统的操作规范( 2004 A版) 软件计算。结果:不同产地的 21 批坚龙胆样品的相似度在 0. 95 以上，确定了 7 个共有
峰。结论:该方法简单、准确、重复性好，为坚龙胆的质量控制提供了有效的方法。
关键词 坚龙胆;特征图谱; HPLC
中图分类号: R282. 5 文献标识码: A 文章编号: 1001-4454( 2011) 01-0056-03
收稿日期: 2010-06-18
基金项目:贵州省毕节地区科技局资助项目［毕科合字( 2003) 13 号］
作者简介:李莎( 1973-) ，女，副主任中药师，主要从事药品检验与研究工作; Tel: 0857-8287034，E-mail: ls5172004@ 126． com。
坚龙胆为龙胆科龙胆属植物坚龙胆 Gentiana ri-
gescens Franch的干燥根及根茎〔1〕，生于向阳山坡，
分布于湖南、广西、四川、贵州、云南等省区〔2〕。为
贵州道地中药材。其性味苦、寒，归肝、胆经。具清
热燥湿、泻肝胆火之功效。主要用于治疗湿热黄疸、
阴肿阴痒、带下、强中、湿疹瘙痒、目赤、耳聋、胁痛、
口苦、惊风抽搐等症〔3〕。坚龙胆根主要含有龙胆苦
苷〔1〕。中国药典 2005 年版一部采用高效液相色谱
法测定龙胆苦苷含量来控制其质量〔3〕。特征图谱
质量控制模式可以综合反映药材中各主要成分及其
相对含量，能提供更加全面丰富的质量评价信息。
为了更全面控制坚龙胆药材的质量，本研究收集了
21 批不同产地的坚龙胆药材，采用 HPLC 法建立了
坚龙胆药材的色谱特征图谱，该方法准确、重复性
好，操作简便，为全面控制坚龙胆的质量提供了依
据。
1 仪器与材料
1. 1 仪器 Waters1525 型高效液相色谱仪，柱温
箱，717 自动进样器，2487 双波长紫外检测器，
Breeze色谱工作站。Diamonsil C18柱( 250 mm × 4. 6
mm，5μm) 。
1. 2 材料 21 批坚龙胆药材来源见表 1。由四川
中药研究所舒光明教授鉴定为龙胆科龙胆属植物坚
龙胆 Gentiana rigescens Franch 的干燥根及根茎。乙
腈为色谱纯( 美国) ，水为Ⅰ级纯化水( 自制) ，其余
试剂均为国产分析纯。龙胆苦苷对照品 ( 批号:
110770-200207) 购自中国药品生物制品检定所。
2 方法
2. 1 供试品溶液的制备 取本品粉末( 过四号筛)
0. 5 g，精密称定，置具塞三脚烧瓶中，精密加甲醇
25 mL，称定重量，加热回流 1 h，放冷，称定重量，加
甲醇补足减失的重量，摇匀，用 0. 45 μm 的滤膜过
滤，即得。
表 1 坚龙胆样品来源
样品编号 药材产地 采集( 收购)日期
S1 四川西昌( 成都荷花池市场) 2004 年 9 月
S2 贵州平坝县 2004 年 9 月
S3 贵州威宁县 2004 年 10 月
S4 贵州凯里香炉山 2004 年 11 月
S5 贵州凯里雷公山 2004 年 10 月
S6 贵州凯里鸭塘 2004 年 11 月
S7 贵州凯里舟溪 2004 年 11 月
S8 云南( 成都荷花池市场) 2005 年 1 月
S9 贵州毕节市长春堡 2005 年 1 月
S10 贵州金沙县 2005 年 2 月
S11 贵州织金县 2005 年 2 月
S12 贵州赫章县水塘乡木箐村 2003 年 10 月
S13 贵州赫章县哲庄 2004 年 5 月
S14 贵州纳雍县( 毕节地区绿产公司) 2005 年 2 月
S15 贵州纳雍县中岭 2004 年 4 月
S16 贵州金沙县 2005 年 2 月
S17 贵州威宁县黑石头镇嘎利管理区 2005 年 2 月
S18 贵州威宁县哲角镇 2005 年 11 月
S19 云南昭通 2005 年 11 月
S20 贵州水城 2005 年 11 月
S21 贵州黔西县沙窝 2005 年 11 月
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DOI:10.13863/j.issn1001-4454.2011.01.022
2. 2 对照品溶液的制备 称取龙胆苦苷对照品适
量，加甲醇溶解，配成质量浓度为 0. 5 mg /min 的溶
液，即得。
2. 3 色谱条件 色谱柱: Diamonsil C18 ( 250 mm ×
4. 6 mm，5 μm) ，柱温为 30℃。流动相: 乙腈 ( A) -
1%冰醋酸水溶液 ( B) 梯度洗脱 ( 0 ～ 50 min: A 为
5%→20%，B 为 95%→80% ) 。流速: 1. 0 mL /min。
检测波长: 254 nm。进样量: 10 μL。采样时间: 80
min。
2. 4 精密度试验 取样品 S11 供试品溶液，连续
进样 5 次，以色谱图中的龙胆苦苷峰为参照色谱峰
( S) ，选择图中的 8 个主要色谱峰，其相对保留时间
的 RSD小于 2%，主要共有峰面积的 RSD小于 3%。
表明精密度良好。
2. 5 重复性试验 取样品 S11，按“2. 1”项下方法
操作，制备 5 份供试品溶液，在所选色谱条件下测
定，其相对保留时间的 RSD小于 1%，主要共有峰面
积的 RSD小于 3%，表明重复性良好。
2. 6 稳定性试验 取样品 S11 供试品溶液，分别
在 0、2、4、8、24 h测定，其相对保留时间的 RSD小于
2%，主要共有峰面积的 RSD 小于 3%，表明供试品
溶液在 24 h内稳定。
2. 7 样品的测定 分别取不同产地、不同批次的
坚龙胆样品，分别按“2. 1”项下方法制备供试品溶
液并测定 21 批样品的 HPLC 图谱，如图 1。比较所
有测定和记录的HPLC色谱图，并将处理结果导入
“中药色谱指纹图谱相似度评价系统 A 版”进行分
析。
3 结果
3. 1 特征峰的确定 分别测定各批坚龙胆药材的
HPLC 特征图谱，经比较分析后确定药材特征图谱
中 7 个共有峰( 包括内参照峰 S峰) 。见图 1。选择
主要特征有效成分龙胆苦苷峰为内参照峰( S峰) 。
图 1 坚龙胆药材的 HPLC典型图谱
S. 龙胆苦苷
3. 2 特征图谱相似度评价 将所得到的色谱图数
据导入国家药典委员会中药指纹图谱评价系统
( 2004A版) ，设定参照图谱，将谱峰自动匹配，然后
生成对照图谱，进行相似度评价，结果见图 2、表 2。
从表 2 可以看出，21 批药材中 S1 样品的相似度最
低，与对照特征图谱比较其相似度仅为 0. 046; 同时
也可以观察到与其他批次的坚龙胆比较，相似度也
极低，在 0. 003 ～ 0. 029 之间。说明 S1 与其他样品
存在明显差别。其他 20 批样品的相似度均在 0. 95
以上，说明其差别很小。
图 2 21 批坚龙胆样品匹配色谱图
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表 2 21 批坚龙胆药材特征图谱自动匹配的相似结果
S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 S11 S12 S13 S14 S15 S16 S17 S18 S19 S20 S21 对照指纹图谱
S1 1 0. 016 0. 003 0. 009 0 0 0. 003 0 0. 003 0. 003 0. 003 0. 004 0. 012 0. 003 0. 008 0. 013 0. 009 0. 026 0. 025 0. 029 0. 019 0. 046
S2 0. 016 1 0. 978 0. 996 0. 98 0. 98 0. 982 0. 98 0. 987 0. 987 0. 986 0. 986 0. 995 0. 987 0. 994 0. 982 0. 994 0. 973 0. 981 0. 967 0. 986 0. 989
S3 0. 003 0. 978 1 0. 987 1 1 0. 993 0. 99 0. 994 0. 994 0. 993 0. 991 0. 987 0. 993 0. 988 0. 984 0. 988 0. 984 0. 994 0. 981 0. 991 0. 994
S4 0. 009 0. 996 0. 987 1 0. 99 0. 99 0. 99 0. 99 0. 997 0. 997 0. 994 0. 996 0. 998 0. 996 0. 999 0. 992 0. 999 0. 982 0. 991 0. 977 0. 994 0. 997
S5 0. 003 0. 984 0. 998 0. 994 1 1 0. 996 0. 99 0. 999 0. 999 0. 997 0. 996 0. 992 0. 997 0. 994 0. 99 0. 993 0. 987 0. 996 0. 982 0. 996 0. 998
S6 0. 003 0. 984 0. 998 0. 994 1 1 0. 996 0. 99 0. 999 0. 998 0. 996 0. 995 0. 992 0. 996 0. 993 0. 99 0. 993 0. 987 0. 997 0. 982 0. 996 0. 998
S7 0. 003 0. 982 0. 993 0. 99 1 1 1 1 0. 995 0. 995 0. 998 0. 99 0. 985 0. 996 0. 99 0. 984 0. 987 0. 982 0. 991 0. 977 0. 995 0. 994
S8 0. 003 0. 979 0. 986 0. 985 0. 99 0. 99 0. 998 1 0. 989 0. 99 0. 995 0. 983 0. 979 0. 992 0. 984 0. 978 0. 981 0. 975 0. 984 0. 97 0. 99 0. 989
S9 0. 003 0. 987 0. 994 0. 997 1 1 0. 995 0. 99 1 1 0. 998 0. 998 0. 995 0. 998 0. 997 0. 993 0. 996 0. 986 0. 996 0. 981 0. 998 0. 999
S10 0. 003 0. 987 0. 994 0. 997 1 1 0. 995 0. 99 1 1 0. 998 0. 998 0. 994 0. 999 0. 996 0. 993 0. 996 0. 986 0. 995 0. 981 0. 998 0. 999
S11 0. 003 0. 986 0. 993 0. 994 1 1 0. 998 1 0. 998 0. 998 1 0. 996 0. 991 0. 999 0. 994 0. 989 0. 992 0. 983 0. 992 0. 977 0. 995 0. 997
S12 0. 004 0. 986 0. 991 0. 996 1 1 0. 99 0. 98 0. 998 0. 998 0. 996 1 0. 994 0. 998 0. 996 0. 993 0. 995 0. 983 0. 992 0. 978 0. 994 0. 997
S13 0. 012 0. 995 0. 987 0. 998 0. 99 0. 99 0. 985 0. 98 0. 995 0. 994 0. 991 0. 994 1 0. 993 0. 997 0. 99 0. 998 0. 981 0. 99 0. 975 0. 992 0. 995
S14 0. 003 0. 987 0. 993 0. 996 1 1 0. 996 0. 99 0. 998 0. 999 0. 999 0. 998 0. 993 1 0. 996 0. 991 0. 994 0. 983 0. 992 0. 978 0. 996 0. 997
S15 0. 008 0. 994 0. 988 0. 999 0. 99 0. 99 0. 99 0. 98 0. 997 0. 996 0. 994 0. 996 0. 997 0. 996 1 0. 992 0. 999 0. 983 0. 992 0. 979 0. 994 0. 996
S16 0. 013 0. 982 0. 984 0. 992 0. 99 0. 99 0. 984 0. 98 0. 993 0. 993 0. 989 0. 993 0. 99 0. 991 0. 992 1 0. 992 0. 981 0. 99 0. 977 0. 991 0. 993
S17 0. 009 0. 994 0. 988 0. 999 0. 99 0. 99 0. 987 0. 98 0. 996 0. 996 0. 992 0. 995 0. 998 0. 994 0. 999 0. 992 1 0. 983 0. 992 0. 977 0. 994 0. 996
S18 0. 026 0. 973 0. 984 0. 982 0. 99 0. 99 0. 982 0. 98 0. 986 0. 986 0. 983 0. 983 0. 981 0. 983 0. 983 0. 981 0. 983 1 0. 987 0. 974 0. 986 0. 989
S19 0. 025 0. 981 0. 994 0. 991 1 1 0. 991 0. 98 0. 996 0. 995 0. 992 0. 992 0. 99 0. 992 0. 992 0. 99 0. 992 0. 987 1 0. 986 0. 996 0. 996
S20 0. 029 0. 967 0. 981 0. 977 0. 98 0. 98 0. 977 0. 97 0. 981 0. 981 0. 977 0. 978 0. 975 0. 978 0. 979 0. 977 0. 977 0. 974 0. 986 1 0. 983 0. 983
S21 0. 019 0. 986 0. 991 0. 994 1 1 0. 995 0. 99 0. 998 0. 998 0. 995 0. 994 0. 992 0. 996 0. 994 0. 991 0. 994 0. 986 0. 996 0. 983 1 0. 998
对照指
纹图谱 0. 046 0. 989 0. 994 0. 997 1 1 0. 994 0. 99 0. 999 0. 999 0. 997 0. 997 0. 995 0. 997 0. 996 0. 993 0. 996 0. 989 0. 996 0. 983 0. 998 1
4 讨论
提取坚龙胆药材时，曾采用不同溶剂( 甲醇、乙
醇、50%甲醇、50%乙醇) ，不同提取方法 ( 超声 30
min、加热回流提取 1 h) 进行比较，结果以甲醇加热
回流提取 1 h所得的溶液色谱峰较多，色谱图较好。
在实验中通过对坚龙胆化学成分进行预试验，
在紫外-可见分光光度计下扫描，发现在 254、230、
270 nm 下均有较大紫外吸收峰，经过比较，在 254
nm下检出的色谱峰较多，其分离度、峰形和柱效及
出峰的稳定性较为满意，故选择检测波长为 254
nm。
实验中分别对四种流动相: 甲醇-水、甲醇-1%
乙酸、乙腈-水、乙腈-1%乙酸进行考察，结果以乙腈-
1%乙酸所得的基线平稳、色谱峰形较好。另外，还
比较了 Diamonsil C18 ( 250 mm × 4. 6 mm，5 μm) 与
Waters色谱柱( Symmetry C18，150 mm × 4. 6 mm，5
μm) 的柱效等，结果前者分离效果较好。
本实验所用的坚龙胆药材品种来源于不同地
方，种植地也不同，从所得特征图谱来看，S1、S8、S19
的产地为外省( 归为第一类) ，S2 ～ S7、S9 ～ S18、S20
～ S21 为贵州省道地药材( 归为第二类) 。第一类与
第二类存在偏差，反映了同一物种个体在不同地域
条件下化学成分含量上的差异。但各共有峰的个数
及相对保留时间差别不大，说明其 HPLC 特征图谱
在不同产地坚龙胆样品中有大的相似性，具有专属
性，可用于鉴定坚龙胆的真伪。
本文建立了坚龙胆药材特征图谱的测定方法，
为今后含坚龙胆类制剂在生产过程中有效地控制药
材的质量提供了检测依据。
参 考 文 献
［1］任仁安 . 中药鉴定学［M］. 上海: 上海科学技术出版
社，1986: 154.
［2］中国医学科学院药物研究所等 . 中药志［M］. 第二册 .
北京:人民卫生出版社，1981: 310.
［3］ 国家药典委员会 . 中华人民共和国药典［S］. 一部 .
北京: 化学工业出版社，2005: 64.
［4］ 韩双，李玮，席先蓉，等 . 贵州不同产地坚龙胆药材及
饮片中龙胆苦苷含量测定［J］. 齐鲁药事，2008，27
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