全 文 ：·药品质量控制 ·
贵州不同地区坚龙胆中龙胆苦苷含量测定＊
韩　双 ,李　玮 ,席先蓉
(贵阳中医学院药学系 , 550002)
[摘　要 ] 　目的　测定贵州产坚龙胆中龙胆苦苷的含量 ,并评价不同产地坚龙胆的质量。方法　采用高效液相色
谱 , AltimaC18(4.6mm×250 mm, 5 μm)色谱柱 , 以甲醇-水(30：70)为流动相;流速 1.0mL· min-1;检测波长为 270 nm;
柱温为 30℃。利用正交实验以龙胆苦苷含量为指标研究了坚龙胆的最佳提取方法。 结果　龙胆苦苷在 0.08 ～
0.64 mg· mL-1(r=0.999 9)范围内与峰面积线性关系良好;平均回收率为 102.4%, RSD为 1.69%(n=5)。测定了 11
个产地坚龙胆中龙胆苦苷的含量在 2.113% ～ 4.808%间。结论　贵州不同地区间龙胆质量均符合《中华人民共和国药
典》 2005年版要求 , 各地区之间无明显差异。
[关键词 ] 　坚龙胆;龙胆苦苷;提取工艺
[中图分类号 ] 　R282.71;R927.4　　　[文献标识码 ] 　A　　　[文章编号 ] 　1004-0781(2009)06-0783-03
ContentsDeterminationofGentiopicrosideinGentianaRigescensfromDifferentHabitas
inGuizhouProvince
HANShuang, LIWei, XIXian-rong(DepartmentofPharmacy, GuiyangColegeofTraditionalChinese
Medicine, Guiyang550002, China)
ABSTRACT　Objective　TodeterminethecontentofgentiopicrosideandevaluatethequlityofGentianarigescensfrom
diferenthabitatsinguizhouprovince.　Methods　HPLCwasusedwithAlltimaC
18
(4.6 mm×250 mm, 5 μm), methanol-
water(30：70)asmobilephase, detectorwavelengthat270 nmandcolumntemperatureat30℃.Theoptimalextractionmethod
forgentiopicrosidewassdudiedbyorthogonalexperiments.　Results　Thecalibrationcurvewaslinearwithgentiopicrosidein
therangeof0.08～ 0.64mg· mL-1(r=0.999 9), theaveragerecoverywas102.4% withRSDof1.69%(n=5).Thecontents
ofgentiopicrosideinGentianarigescensfrom 11 habitswerebetween2.113% ～ 4.808%.　Conclusion　Thequalityof
GentianarigescensfromdiferenthabitatsofguizhouprovinceareconsistentwiththechinesePharmacopoeia2005, andthereisno
notabledifferenceamongthem.
KEYWORDS　Gentianarigescens;Gentiopicroside;Extractionprocess
　　坚龙胆为龙胆科植物坚龙胆 (Gentianarigescens
Franch.)的根及根茎 ,主产于广西 、贵州 、四川 、云南
等省。具有保肝 、健胃 、抗炎 、利胆等作用 ,为常用中药
之一。其主要成分为裂环环烯醚萜类 、生物碱以及挥
发油等 ,其中龙胆苦苷含量较高 [ 1] 。笔者在本实验中
通过单因素比较和正交实验研究了龙胆苦苷的最佳提
取方法 ,测定了贵州不同产地坚龙胆中龙胆苦苷的含
量 ,评价了不同产地坚龙胆的质量。
[收稿日期 ] 　2008-06-18　　　[修回日期 ] 　2008-09-17
[基金项目 ] 　＊教育部春晖计划基金资助项目(基金编
号:Z2005-1-52001)
[作者简介 ] 　韩　双(1983 -), 男 , 安徽阜阳人 , 在读硕
士 , 从事中药化学及新药研究。电话:0851 -8116462, E-mail:
hans220@126.com。
[通讯作者 ] 　李　玮(1964 -), 男 , 副教授 , 从事中药炮
制方向研究。电话:(0)13985177779。
1　仪器 、试剂与样品采集　
1.1　仪器　LC-20AT高效液相色谱仪(SPD-20A检测
器 , LCsolution/Lite工作站 );远红外干燥箱 (型号
YHG-600-S-Ⅱ ,上海贺德实验设备有限公司);十万分
之一电子天平(型号 AUW220D, 岛津),超声清洗机
(型号 HS10260D,天津恒奥科技公司)。
1.2　试药　龙胆苦苷对照品(中国药品生物制品检
定所 ,批号:110770-2005110),咖啡因对照品(中国药
品生物制品检定所 ,批号 171215-200406);甲醇(色谱
醇 ,天津科密欧公司);水(重蒸馏水);其余试剂均为
分析纯 。
1.3　样品采集　坚龙胆药材 2007年 10月采自贵州
省不同地区 ,经贵阳中医学院生药教研室魏升华老师
鉴 定为 龙 胆 科 植 物 坚 龙胆 (Gentianarigescens
Franch.)。样品阴干粉碎后过筛孔内径 0.250mm(60
目)筛 ,保存 。
·783·医药导报 2009年 6月第 28卷第 6期
2　实验方法　
2.1　色谱条件 　色谱柱为 AltimaC18 (4.6 mm×
250mm, 5 μm);以甲醇-水(30：70)为流动相;流速
1.0mL·min-1;检测波长为 270 nm;柱温为 30 ℃;理
论板数按龙胆苦苷峰计算应不低于 3 000;进样量为
10 μL。
2.2　溶液的制备　
2.2.1　对照品溶液的制备　精密称取龙胆苦苷对照
品 50 mg, 用甲醇定容至 25 mL, 溶解即得浓度
2 mg· mL-1的龙胆苦苷对照品溶液 。
2.2.2　内标溶液的制备　精密称取咖啡因对照品
125 mg, 用甲醇定容至 250 mL, 溶解即得浓度为
0.5mg·mL-1的内标溶液 。
2.2.3　样品溶液的制备　精密称取各号样品粉末
(过孔径 0.425 mm药筛)约 0.5 g,置于 50mL具塞锥
形瓶中 ,精密加入甲醇 15mL,密塞 ,超声提取 30min,
提取 2次后合并滤液 , 60℃水浴 ,真空旋转蒸发至干 ,
精密加入甲醇 10 mL溶解。精密吸取样品液 、内标溶
液各 1 mL置于 5mL量瓶中 ,用甲醇定溶至刻度 ,即得
供试品溶液 。
3　结果　
3.1　提取溶剂及方法的选择　
3.1.1　不同溶剂对测定结果的影响　龙胆苦苷为裂
环环烯醚萜苷类成分 ,易溶于甲醇 、水 ,可溶于乙醇 ,故
分别以甲醇 、乙醇 、水为溶剂 , 精密称取同一样品
0.5g,加入溶剂 10 mL,超声 60min,比较提取龙胆苦
苷的含量。不同溶剂龙胆苦苷提取率依次为甲醇
(2.425%)>水(1.948%)>乙醇(1.047%)。结果表
明:甲醇提取的效果最好 ,故选用甲醇作为提取溶剂 。
3.1.2　不同提取方法对测定结果的影响　本实验先
后比较了用冷浸法(《中华人民共和国药典》法)、超声
法 、回流法 、索氏提取法提取龙胆苦苷的效率。精密称
定龙胆药材 0.5 g,冷浸法为精密加入甲醇 10 mL,冷
浸 12h,时时振摇 ,精密取上清液 1mL,置 10 mL量瓶
中稀释至刻度;超声法加入甲醇 10 mL,超声两次 ,第 1
次 40min,第 2次 30 min。回流法加入甲醇 10 mL回
流两次 ,第 1次 45 min,第 2次 30 min;索氏提取法为
加入甲醇 30 mL,水浴提取 2h,静置 ,过滤 ,蒸干 ,精密
加入甲醇 10mL溶解 。不同方法龙胆苦苷率依次为超
声法(2.425%)>冷浸法 (2.342%)>索氏提取法
(2.229%)>回流法(2.177%)。结果表明:超声法提
取时间短 ,提取效率高 ,故本实验采用超声提取法。
3.1.3　正交实验　选择提取时间 、溶剂量 、提取次数 ,
每个因素取 3个水平进行考察 ,考察因素及水平见表
1, 2。采用 L9(34)正交实验表设计实验方案 ,以龙胆
苦苷的含量作为测评指标 。
表 1　L9(34)正交实验因素水平表　
水平 溶剂量(A)/mL
提取时间(B)/
min
提取次数
(C)
1 5 15 1
2 10 30 2
3 15 45 3
表 2　L9(34)正交实验安排表　
编号 A B C 含量 /%
1 1 1 1 1.584
2 1 2 2 2.147
3 1 3 3 2.220
4 2 1 2 1.951
5 2 2 3 2.221
6 2 3 1 1.839
7 3 1 3 1.890
8 3 2 1 1.812
9 3 3 2 2.047
均值 1 1.984 1.808 1.808
均值 2 2.004 2.060 2.060
均值 3 1.916 2.035 2.035
极差 0.088 0.252 0.252
　　直观分析表明 ,影响龙胆苦苷提取率的因素依次
为:提取次数 >提取时间 >提取溶剂量。
方差分析见表 3。结果表明 ,可见提取时间对龙
胆苦苷的影响最小 ,提取次数 、提取溶剂量差异有显著
性 。综合直观分析和方差分析结果 ,最佳提取方法为
A2D2B2为最佳 ,即样品每次用 15 mL甲醇超声提取 2
次 ,每次提取 30min。
表 3　方差分析表　
来源 离差平方和 自由度 F 显著水平
A 0.013 2 1.000 -
B 0.115 2 35.608 ＊1
C 0.229 2 70.716 ＊1
误差 0.013 2
　　F0.05(2.2)=19
3.2　线性关系考察　分别吸取浓度为 2 mg· mL-1的
对照品溶液 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1.0, 1.2, 1.4, 1.6 mL
置于 5 mL量瓶中 ,再各向其中精密加入 1 mL的内标
溶液 ,用甲醇定溶即得浓度梯度 ,用上述色谱条件对各
浓度进行测定。以标准品浓度为横坐标 ,以对照品和
内标物的峰面积比值为纵坐标 ,进行线性回归 ,得回归
方程:Y=4.733 3X+0.025 1, r=0.999 9。表明在
0.08 ～ 0.64 mg·mL-1浓度范围内线性关系良好 。
3.3　精密度考察　精密吸取对照品溶液 1 mL置于
·784· HeraldofMedicineVol.28 No.6June2009
5 mL量瓶中 ,再向其中精密加入内标溶液 1 mL,用甲
醇定溶至刻度。用此溶液在上述色谱条件下连续测定
6次 ,用对照品与内标物的峰面积比值计算精密度 ,其
RSD为 0.25%。
3.4　重复性实验　精密称取坚龙胆样品粉末 6份 ,每
份约 0.5 g,按供试品溶液的制备方法提取供试品溶
液 ,在上述色谱条件下进行测定 。分别求出其含量 ,计
算得平均含量为 4.259%, RSD为 2.6%。
3.5　稳定性实验　用考察精密度所用的龙胆苦苷对
照品溶液 ,分别于 0 , 4, 8, 12, 16, 24 h进行测定 ,计算
其 RSD为 2.5%,结果表明龙胆苦苷至少在 20 h内稳
定 。
3.6　加样回收率实验　精密称取已知含量的龙胆样
品粉末 5份 ,每份约 0.25 g,加入龙胆苦苷适量 ,按供
试品的制备方法进行制备 。用上述色谱条件进行测
定 ,计算回收率 ,结果见表 4。
表 4　龙胆苦苷的回收率测定结果　
称样量 /
g
样品
含量 /mg
加入量 /
mg
测得量 /
mg
回收率 /
%
平均回收
率 /%
RSD/
%
0.255 10.174 9.800 20.271 103.03
0.254 10.174 9.800 20.348 103.82
0.254 10.174 9.800 20.355 103.89 102.4 1.69
0.253 10.174 9.800 19.976 100.02
0.255 10.174 9.800 20.101 101.13
3.7　样品测定　取贵州龙里 、乌当 、六枝朗代 、沿何 、
安顺 、兴义 、六枝堕脚乡(家种)、六枝堕脚乡 、大方 、都
匀 、水城等 11地的龙胆药材样品共 11份 ,按上述方法
制备 , 测定 , 测得龙胆苦苷含量分别为 4.808%,
2.711%, 3.545%, 2.805%, 2.113%, 2.500%,
2.640%, 3.539%, 3.804%, 2.608%, 3.997%。
4　讨论　
提取方法比较结果表明 , 4种方法制备供试品溶
液所得液相色谱图和组分基本一致 ,以超声法处理样
品所得龙胆苦苷的含量为最高 。 4种方法所得供试品
溶液中龙胆苦苷含量的顺序为:超声法 >冷浸法 >索
氏法 >回流法。超声法和冷浸法所制备的供试液中龙
胆苦苷的含量明显高于索氏法和回流法 ,这可能与龙
胆苦苷受热不稳定有关。超声法与冷浸法比较无明显
差异 ,但超声提取法与冷浸提取法相比 ,超声法所得龙
胆苦苷含量略高于冷浸法 ,并具有简便 、易行 、快速的
优势 ,使实施样品处理的操作更便捷 。
本实验还就超声法提取溶剂进行了考察 ,结果表
明甲醇提取龙胆苦苷的效率最高 ,故选用甲醇为提取
溶剂 ,选择提取时间 、溶剂量 、提取次数 3个因素 ,每个
因素取 3个水平进行考察 ,以龙胆苦苷的含量作为测
评指标 ,进行正交实验 ,确定了提取的最家工艺 。
结果表明 , 11批坚龙胆药材龙胆苦苷的含量在
2.113% ～ 4.808%,均达到《中华人民共和国药典 》规
定的标准[ 2] ,由于单一的成分的测定 ,并不能反映药
材质量的全貌。因此 ,对坚龙胆质量的评价还有待进
一步研究。有关 HPLC法测定龙胆苦苷含量 ,文献中
流动相条件多以甲醇 -水为洗脱系统[ 3, 4] 。本文研究表
明 ,以甲醇-水系统为流动相测定龙胆苦苷 ,可使龙胆
苦苷的分离度 、理论塔板数 、峰的对称性及出峰时间达
到满意的结果。
[ DOI] 　10.3870/yydb.2009.06.046
[参考文献 ]
[ 1] 　徐国钧 , 徐珞珊.中国药材学(上)[ M] .北京:中国医药
科技出版社 , 1996:365.
[ 2] 　国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[ Z] .北
京:人民卫生出版社 , 2005:72.
[ 3] 　俞桂新 , 董婷霞 ,詹华强 ,等.龙胆药材中龙胆苦苷含量测
定样品制备方法比较 [ J] .现代中药研究与实践 , 2004, 18
(5):38.
[ 4] 　黄　海 , 金惠敏 , 孙文基 , 等.龙胆药材中龙胆苦苷的
HPLC法测定 [ J] .西北药学杂志 , 1998, 13(3):140.
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·785·医药导报 2009年 6月第 28卷第 6期