全 文 :工艺与制备
作者简介:敖道夫(1979 年),女,硕士;工作单位:内蒙古民族大学
附属医院蒙药制剂室,主管蒙药师;研究方向:蒙药及蒙药复方制剂
工艺、质量标准研究;出生地:内蒙古赤峰市阿鲁科尔沁旗. 邮箱:
15004986906@ 163. com 电话:15004986906
蒙药材花锚中黄酮类提取工艺条件的研究
敖道夫 巴达拉胡
(内蒙古民族大学附属医院,内蒙古 通辽 028000)
摘 要:目的:采用 L9(34)正交实验法优选蒙药材花锚提取工艺。方法:以浸膏得率、总黄酮类提取率为评价指标,选择乙
醇浓度、乙醇量、提取次数、提取时间为考察因素,利用 L9(34)正交实验法优选乙醇提取蒙药材花锚总黄酮类的最佳工艺。
结果:最佳提取工艺条件为 70%乙醇 12 倍量提取 3 次,提取时间 0. 5h。结论:该提取工艺方法方便而结果可靠。
关键词:花锚;黄酮类;提取工艺;正交试验
中图分类号:R291. 2 文献标识码:A 文章编号:1006 - 6810(2015)11 - 0048 - 02
蒙药材花锚蒙古名为西依热地格达、库日迪克、都莫迪
克、达格木 -札德朱尔、章古图 -地格达。为龙胆科植物花
锚(Halenia sibirica Borkh.)的干燥全草。气微,味甘、苦,性
平、柔、腻。平息“协日”,清热,愈伤。用于目黄,口苦,高烧,
头痛,尿黄,“协日”热,伤热,脉热[1]。是蒙医常用药材,也
是传统方剂旺拉嘎 - 3 汤的主要组成成分。在我国除华南
和华东地区外,广布在其他地区以及蒙古、西伯利亚、远东、
欧洲等国家,生长于山沟、林缘、林下、水边湿草地[3]。据文
献报道,目前已从花锚中分离得到了口山酮、口山酮苷、黄
酮、黄酮苷、裂环烯醚萜、三萜类和生物碱等类型成分[4]。现
将对蒙药材花锚中总黄酮类成分提取工艺进行研究,以期为
该民族药资源的开发研究及临床应用提供参考。
1 仪器与材料
1. 1 仪器:ZDHW型调温电热套(北京中兴伟业仪器有限
公司),752 -紫外分光光度计(上海精密科学仪器有限公
司)HH -W600 数显三用恒温水箱(江苏省金坛市荣华仪
器制造有限公司)TG328B电光天平(福州天平仪器厂)。
1. 2 材料:芦丁标准品(由中国药品生物制品鉴定所提
供),花锚药材采自五岔沟林业局浩森沟林场;其他试剂均
为分析纯。
2 实验方法
2. 1 提取工艺条件的正交安排:对影响花锚提取物收率
的溶剂量、提取时间、乙醇浓度、提取次数 4 个因素,分别取
3 个水平进行考察。因素水平见表 1。
表 1 因素水平
因素
水平
乙醇浓度%
A
乙醇量
B
提取次数
C
提取时间
D
1 50 8 1 0. 5
2 70 12 2 1. 0
3 90 16 3 1. 5
2. 2 考察指标的确定和测定
2. 2. 1 考察指标的确定:黄酮为花锚的主要有效成分,易
溶于乙醇,故采用乙醇回流法提取花锚,并将芦丁作为考察
指标,同时结合提取率优选最佳工艺。
2. 2. 2 浸膏得率的测定:按 L9(34)正交表安排实验,取花
锚约 5. 0g在平行操作条件下加热回流、提取、过滤,滤液水
浴浓缩、蒸干,称其质量。按浸膏得率(%)= 浸膏质量 /样
品质量 100%[4]计算.其见表 2。
表 2 正交试验设计表及结果
实验号
黄酮类含量
(mg)
总浸出物
(%)
因素
A B C D
1 1 1 1 1 1. 506 10. 77
2 1 2 2 2 2. 603 23. 54
3 1 3 3 3 3. 246 33. 21
4 2 1 2 3 2. 785 25. 11
5 2 2 3 1 3. 883 24. 59
6 2 3 1 2 2. 837 23. 19
7 3 1 3 2 3. 514 23. 38
8 3 2 1 3 2. 596 21. 36
9 3 3 2 1 3. 384 21. 71
黄酮类 CT =77. 170
K17. 355 7. 805 6. 939 8. 773
K29. 505 9. 082 8. 772 8. 954
K39. 494 9. 467 10. 643 8. 627
R2. 15 1. 662 3. 704 0. 327
浸膏得率 CT =4754. 562
k167. 52 59. 26 55. 32 57. 07
K272. 89 69. 49 70. 36 70. 11
K366. 42 78. 11 81. 18 79. 68
R6. 44 18. 85 25. 86
2. 2. 3 标准曲线的绘制:精密称取芦标准 20mg,放入
100mL容量瓶中,加无水乙醇 90mL,在水浴锅上加热溶解,
冷却后,再用无水乙醇定容(0. 2mg /mL),备用。然后精密吸
取芦丁对照品溶液 0. 0、1. 0、2. 0、3. 0、4. 0 、5. 0、6. 0mL分别
置 25mL容量瓶中,分别加水至 6. 0mL ,加 5%的亚硝酸钠溶
液 1. 0mL,摇匀,放置 6min,加 10%的硝酸铝溶液 1. 0mL,摇
匀,放置 6min,加 10%的氢氧化钠溶液 10mL,再加水至刻
度,摇匀,放置 15min,依据分光光度法在 500nm波长处测定
其吸收度,以吸光度为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标准曲
线,求出回归方程。结果得到花锚浓度 Y与(下转封 3)
84 中国民族医药杂志 2015 年 11 月第 11 期
DOI:10.16041/j.cnki.cn15-1175.2015.11.027
如未见下降,考虑流入受阻,应移动肠管,必要时检查是否
粪块堵塞。有粪块阻塞肠道时,插管的过程中可能会有阻
力,此时嘱咐患者张口呼吸,不可用蛮力,以免造成损伤。
灌肠袋高度 30cm 为宜,观察灌肠液的温度及流速是否适
宜,如出现腹胀或便意,放慢滴注速度或暂停。灌肠结束后
将肛管轻轻拉出,臀部抬高,以防药液外流。灌肠后,嘱患
者先左侧卧,后右侧卧,最后平卧 30min 以上,使药液均匀
地分布在肠腔内。观察用药后大便是否通畅,腹胀腹痛减
轻情况,如腹胀腹痛加剧应及时告知医生。
3 结 果
32 例患者运用蒙西医结合的治疗方法及护理措施,蒙
药保留灌肠,使患者症状均得到改善,疗效满意。
4 讨 论
不完全肠梗阻以痛、吐、胀、闭四大主症为主要临床表
现,易引发电解质紊乱、脓毒血症等病证,为急危重症。该
病属蒙医“肠阻症”范畴,治疗以下清赫依之通道,止痛,杀
黏,清血,希拉热为原则[3]。蒙药巴特尔 - 7 中,草乌叶、麝
香、黑芸香杀粘止痛清热;翻白草燥黄水,愈伤生肌杀粘消
肿;茜草止血清热止泻;诃子解毒、调元;银朱清热。诸药配
伍具有杀粘、清热等作用。蒙西医结合治疗与护理有很好
的互补性,西医治疗能弥补蒙医抗感染、纠正水电解质紊乱
的不足,而蒙医治疗则能弥补西医治疗在防止毒素吸收、改
善肠微循环方面的缺陷。蒙药注入直肠,直达病所或经吸
收后再布散全身以发挥整体治疗作用。蒙药灌肠可使药物
通过肠壁吸收而产生全身作用,简便有效,操作方便,患者
耐受性好、易于接受,临床疗效肯定,值得推广应用。在操
作过程中,护理人员动作轻柔、态度和蔼、耐心细致的操作
可充分发挥药效,帮助患者康复。
参考文献
[1]陈灏珠.实用内科学[M]. 第 10 版.北京:人民卫生出
版社,2010:1638—1641.
[2]赵巍,薛丽强,王传堂,等.结肠清洁灌肠方法的改良与
应用[J].中国实用护理杂志,上旬版. 2004,20(4):35
- 36.
[3]中国医学百科全书编委会.中国医学百科全书蒙医学
[M]. 上海:上海科学技术出版社,1992,85.
2015 年 6 月 4 日收稿
(上接 48 页)吸光度 X关系曲线的回归方程为 Y = 0. 608X
- 0. 0023,相关系数 r = 0. 9998,所以本实验花锚浓度与吸
光度有良好的相关性。
2. 2. 4 样品含量测定:精密称取正交实验号花锚各约 5.
0g,加热回流、提取、过滤、滤液水浴浓缩、蒸干,残渣用无水
乙醇定溶至 5mL,作为供试品溶液。然后精密吸取上述提
取液各 1mL,分别加水至 6. 0mL ,加 5%的亚硝酸钠溶液 1.
0mL,摇匀,放置 6min,加 10%的硝酸铝溶液 1. 0mL,摇匀,
放置 6min,加 10%的氢氧化钠溶液 10mL,再加水至刻度,
摇匀,放置 15min,依据分光光度法在 500nm 波长处测定其
吸收度,计算黄酮含量,见表 2。
2. 3 方差分析:将正交试验结果进行方差分析,分析结果
见表 3。
表 3 方差分析表
SS f S F P
黄酮类
A 1. 022 0. 511 55. 969 < 0. 05*
B 0. 505 0. 253 27. 711 < 0. 05*
C 2. 287 1. 144 125. 301 < 0. 05*
D 0. 0183 0. 00913 1. 000 > 0. 05
浸出物
A 7. 940 3. 970 1. 000 > 0. 05
B 59. 365 29. 683 7. 477 > 0. 05
C 112. 446 56. 223 14. 162 > 0. 05
D 85. 871 42. 936 10. 815 > 0. 05
综合 2 个考察指标工艺条件,确定花锚最佳提取工艺
条件为 A2B2C3D1.
3 结 果
通过以上的 L9(34)正交实验,最终确定提取花锚中黄
酮类成分的最佳工艺条件为 A2B2C3D1。即 70%乙醇,12
倍量,提取 3 次,提取时间 0. 5h。
本研究建立的分光光度法用于测定黄酮类含量,方法
简便,实验结果可靠,最佳条件适合批量生产该药材的提
取。
参考文献
[1]中华人民共和国药典委员会. 中华人民共和国卫生部
药品标准 蒙药分册[M]. 1998:45.
[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M]. 北
京:中国医药科技出版社,2010.
[3]邰巴达拉胡,拉喜那木吉拉,桂荣,等. 蒙药材花锚的
化学成分研究进展[J]. 中成药,2015,5(37).
[4]包保全,孙启时,包巴根那,等. 花锚属植物化学成分
及生物活性研究进展[J]. 中药材,2003,5(26).
2015 年 7 月 13 日收稿