全 文 ：湿生扁蕾中不同部位 3种药用成分
的反相高效液相色谱测定
张海涛1 , 冯丽娟1 , 李生萍2 , 纪兰菊 1
(1.中国科学院西北高原生物研究所 , 西宁 810001;2.青海普兰特藏药研究所 , 西宁 810007)
摘　要:建立了同时测定湿生扁蕾中不同部位 3 种有效成分即獐牙菜苦苷
(S1)、獐牙菜苷(S2)、1 ,7-二羟基-3 ,8-二甲氧基口山酮(S3)的反相高效液相色谱
定量分析方法 , 并进一步考察 2005和 2006年 20批样品中不同部位的 S1 、 S2 、
S3 分布状态 。检测波长 260 nm , 流动相乙腈-0.4%磷酸水溶液 , 梯度洗脱 , 洗脱
条件为 0 min※40 min※55 min;流动相乙腈 10%※30%※100%;0.4%H3PO4
90%※70%※0%, 流速 1 mL min , 柱温:25 ℃。S1 、S2 、S3 线性范围分别为 2.8
～ 14 μg 、 12 ～ 20.6 μg 、 2.64 ～ 13.2 μg 。回收率分别为 99.89%、 99.52%、
99.42%。该方法具有很好的线性关系和回收率 , 且不同样品不同部位的 S1 、
S2 、S3中含量分布有明显的差异 。
关键词:湿生扁蕾;不同部位;HPLC;獐牙菜苦苷;獐牙菜苷;1 ,7-二羟基-3 ,8-
二甲氧基口山酮
　　湿生扁蕾(Gentianopsis paludosa Ma.)属龙胆科
(Gentianaceae)扁蕾属植物的干燥全草 。具有清热
解毒 、利湿消黄之功效。主治热病发斑 、高血压 ,
疮疥肿毒肝炎 、胆囊炎及多种炎症 , 已被列入青
海重要的开发藏草药项目[ 1] 。由湿生扁蕾制成的
冲剂可以清热燥湿 , 对小儿腹泻有显著的疗效[ 2] 。
现代医学证明 , 其有效成分獐牙菜苦苷能明显抑
制中枢神经系统 , 具有镇静和镇痛作用;獐牙菜
苷有稳定肝细胞膜作用 , 从而防止肝细胞损伤[ 3] ;
体外细胞毒性实验表明 1 , 7-二羟基-3 ,8-二甲氧基
口山酮对卵巢癌细胞 HO28910都有较强的细胞毒
作用[ 4] 。王焕弟等[ 5] 在对湿生扁蕾有效成分抑菌
作用的研究中发现 , 1 , 7-二羟基-3 , 8-二甲氧基口
山酮的抑菌作用最强 。
本文针对湿生扁蕾药效成分即獐牙菜苦苷
(S1)獐牙菜苷(S2)1 ,7-二羟基-3 , 8-二甲氧基口山
酮(S3)在全草 、根 、茎 、叶 、花各部位进行了含量
测定 , 为湿生扁蕾的含量分析提供依据。
1　实验部分
1.1　仪器 、试剂
Class-VP液相色谱工作站(岛津公司);LC-10-
ATVP 二元泵(岛津公司);Rheodyne7725 进样器
(美国);SPD-M10AVP 二极管阵列检测器(岛津公
司);Milli-Q 超纯水装置;AT-130柱温箱(天津);
AB104-N 电子天平(Mettler-toledo 公司);ZM 震动
超微 粉 碎 机;C18 硅 胶 小 柱 (1 mL , Waters
P0274A1)。
乙腈(自山东禹城禹王试剂厂 , 色谱纯);甲
醇 、H3PO4(分析纯 , 天津市百世化工公司化学试
剂厂);水为娃哈哈纯净水并经 0.45 μm 滤膜过
滤;獐牙菜苦苷 、獐牙菜苷和 1 , 7-二羟基-3 , 8-二
甲氧基口山酮对照品由中国科学院西北高原生物
研究所孙洪发教授提供 , 纯度均在 96%以上。
1.2　材料
湿生扁蕾样品的采集:本实验所用材料 , 分
别采集了 2005年 8批和 2006年 12批青海不同地
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第 27卷增刊
2008 年 12 月　　　　　　　　　　　　 分析试验室Chinese Journal of Analysis Laboratory　　　　　　　　　　　　Vol.27.Suppl.2008-12
基金项目:青海龙胆科主要药用植物指纹图谱研究(2004-N-142)项目资助
作者简介:张海涛(1983-), 女 , 硕士研究生;E-mail:Jilanju@sina.com
DOI :10.13595/j.cnki.issn1000-0720.2008.0522
区的湿生扁蕾样品 , 经西北高原生物研究所陈桂
琛研究员鉴定为湿生扁蕾(Gentianopsis paludosa
Ma.), 2005年样品和 2006年样品的采集时间和采
集地分别如表 1 、表 2所示。
表 1　2005 年样品来源
样品编号 采集时间 采集地点
1 2005.08.19 宝库乡寺堂村
2 2005.08.25 互助北山口
3 2005.08.25 青沙山哑口
4 2005.09.04 尕楞乡度寺
5 2005.09.04 泽库县
6 2005.08.25 互助十二盘
7 2005.08.12 大黑沟
8 2005.09.12 扎曲河大桥
表 2　2006 年样品来源
样品编号 采集时间 采集地点
1 2006.09.16 青沙山
2 2006.09.16 麦秀林场
3 2006.09.19 互助北山
4 2006.09.01 玉树州军民林
5 2006.08.05 垃圾山口
6 2006.08.31 玉树觉隆大峡谷
7 2006.08.26 互助北山口
8 2006.09.16 麦秀林场
9 2006.08.27 化隆至西宁路边
10 2006.09.19 互助十二盘山
11 2006.09.19 仙米乡
12 2006.09.01 出玉树州 20 km
2　方法与结果
2.1　色谱条件
色谱柱:VP-ODS C18柱(5 μm , 150 mm ×4.6
mm);流动相为乙腈-0.4%磷酸水溶液 , 梯度洗
脱 , 洗脱条件为 0 min※40 min※55 min;流动相乙
腈10%※30%※100%;0.4%H3PO4 90%-70%
-0%, 流速 1 mL min , 检测波长 260 nm;柱温:
25 ℃。
2.2　溶液的制备
2.2.1　供试品溶液　分别将 2005年和 2006年 20
批样品置震动超微粉碎机中粉碎 , 精密称取 1 g ,
置100 mL 锥形瓶中 , 加甲醇 25 mL , 称重 , 置 80
℃水浴锅上回流 1 h , 放冷至室温 , 再称定重量 ,
用甲醇补重 , 摇匀 , 过 0.45 μm 滤膜 , 弃去初滤
液 , 收集续滤液为供试品溶液。
2.2.2　对照品溶液　精确称取 S1 、 S2 、 S3 各标准
品适量 , 加甲醇配成浓度分别为 0.7 、 1.03 、 0.66
mg mL的标准品溶液 。
2.3　方法学实验
2.3.1　线性实验　精密吸取已配制好的各对照品
溶液 2 , 4 , 8 , 12 , 16 , 20 μL , 按上述色谱条件测
定。以相应组分的色谱峰面积(Y)对其含量(X ,
μg)进行线性回归 , S1 、 S2 及 S3 的回归方程依次
为:
Y =33100.8X +178572.5 , r=0.9990 , 线性范
围为 2.8 ～ 14 μg;Y =18268X +321963.10 , r =
0.9997 , 线性范围为 4.12 ～ 20.6 μg;Y = -
535451X+1483826 , r=0.9994 , 线性范围为 2.64
～ 13.2μg 。
2.3.2　精密度实验　精确吸取已配制好的各对照
品溶液 , 进样 20 μL , 重复 5次 , 根据所得峰面积
值计算 , 测得3种药效成分峰面积的 RSD分别为:
1.02%, 1.10%, 1.33%。表明仪器精密性良好。
2.3.3　重复性实验　取上述供试品溶液 , 分别间
隔 2 h进样 , 每次 20μL , 重复 5次 , 进行测定方法
的稳定性实验 , 求得 RSD 值分别为:4.1%,
0.9%, 1.3%。表明该方法重复性良好。
2.3.4　稳定性实验　取上述供试品溶液 , 分别间
隔 2 h进样 , 每次 20μL , 重复 5次 , 进行测定方法
的稳定性实验 , 求得獐牙菜苦苷 、獐牙菜苷和 1 ,
7-二羟基-3 ,8-二甲氧基口山酮峰面积的 RSD分别
为 3.0%, 3.3%, 1.9%, 表明样品溶液在8 h内基
本稳定。
2.3.5　加样回收率实验　精确称取已知含量的湿
生扁蕾样品各 5份 , 加入一定量的对照品 , 按样品
处理方法制备并进样 20 μL , 计算各标准品的平均
加样回收率及 RSD。结果 S1 为 99.89%, RSD =
1.3%;S2 为 99.52%, RSD = 1.7%;S3 为
99.42%, RSD=1.9%。结果见表 3。
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表 3　回收率测定
成分 峰面积
1 2 3 4 5
RSD
%
回收率
%
S1 2614382 2642523 2613719 2554094 2627063 1.3 99.89
S2 5198882 5104800 5038143 5250018 5088356 1.7 99.52
S3 23648754 23390884 23130204 24203231 24087561 1.9 99.42
2.3.5　样品测定　按“2.2.1”项下方法制备各样
品的供试品溶液 , 精密吸取 20μL进样 , 按上述色
谱条件测定峰面积积分值 , 代入回归方程计算样
品不同部位的有效成分的含量结果见表 4。
表 4　2005 和 2006年不同样品含量测定结果(%)
年份 成分 根 茎 叶 花 全草
S1 5.19 3.63 5.73 3.26 2.08
05 年 S2 13.61 16.54 12.84 6.81 7.91
S3 9.33 6.18 7.61 8.98 4.76
S1 5.41 7.60 8.91 5.67 6.01
06 年 S2 19.40 17.92 19.27 15.10 12.08
S3 11.36 7.58 10.00 13.25 6.90
图 1　2005年湿生扁蕾中不同部位 3种成分总百分含量
1-獐牙菜苦苷;2-獐牙菜苷;3-1 , 7-二羟基-3 , 8-二甲氧
基口山酮
图 2　2006年湿生扁蕾中不同部位 3种成分总百分含量
1-獐牙菜苦苷;2-獐牙菜苷;3-1 , 7-二羟基-3 , 8-二甲氧
基口山酮
3　结果与讨论
实验结果显示 , 不同采集地 、不同时间 , 3种
药效成分的含量分布也存在差异。由表 4可知 S1 、
S2 、S3 3种药效成分在样品各部位含量的分布状
态。2005年样品中 , S1 在各部位的总含量的分布
状态为叶>根>茎>花>全草 , S2 在各部位总含
量的分布状态为茎>根>叶>全草>花 。S3 在各
部位的总含量的分布状态为根>花>叶>茎>全
草。2006年样品中 , S1 在各部位的总含量的分布
状态为叶>茎>花>全草>根 , S2 在各部位总含
量的分布状态为根>叶>茎>花>全草 。S3 在各
部位的总含量的分布状态为花>根>叶>茎>全
草。
为了在最短的分析时间内获得最佳的分离效
果 , 本实验首次用梯度洗脱方法对湿生扁蕾不同
部位的獐牙菜苷 、獐牙菜苦苷和 1 , 7-二羟基-3 , 8-
二甲氧基口山酮含量进行测定 , 结果较好。经方
法学评价 , 表明重现性好 , 方法简单 、可靠。为湿
生扁蕾的的深度开发提供科学依据 , 也为中藏药
材的定量分析 、品质评价和含量分布提供了简便 、
准确 、快速 、有效的分析方法 。
参考文献
[ 1] 　中科院植物研究所.西藏常用中草药 , 西宁:西藏人
民出版社.1971
[ 2] 　宣诗孝 , 孙家冀 , 郭鹏举等.青海省药品标准.青海
省卫生厅 , 1992.64
[ 3] 　胡若琪 , 张　禄.云南中医学院学报 , 1991 , 14(1):
35
[ 4] 　邸多隆 , 刘烨伟 , 马志刚等.藏药湿生扁蕾有效成分
研究 , 2003 , 28(12):12
[ 5] 　王焕弟 , 谭成玉等.时珍国医国药 , 2006 , 17(10):
1901
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