全 文 ： Journal of Pharmaceutical Analysis药物分析杂志
·500· 药 物 分 析 杂 志 Chin J Pharm Anal 2016,36(3)
Chinese
HPLC法测定姜状三七 5种皂苷含量 *
张高菊 1，2，沈勇 1，2，孟珍贵 1，2，陈军文 1，2，张广辉 1，杨生超 1**
（1.云南省优势中药材规范化种植工程研究中心，昆明 650201；2.云南农业大学农学与生物技术学院，昆明 650201）
摘要 目的：建立测定姜状三七中人参皂苷 Rg1、人参皂苷 Rb1、人参皂苷 R0、竹节参皂苷Ⅳ和竹节参皂苷Ⅳa
含量的 HPLC方法。方法：采用 Agilent ZORBAX SB-C18（150 mm×4.6 mm， 5 μm）色谱柱，以 0.1%磷酸水
溶液（A）-乙腈（B）为流动相，梯度洗脱（0~5 min， 15%B→ 20%B； 5~35 min， 20%B→ 40%B； 35~45 min，
40%B→ 90%B），流速 1.5 mL·min-1，检测波长 203 nm，柱温 20 ℃。结果：人参皂苷 Rg1、人参皂苷 Rb1、人参
皂苷 R0、竹节参皂苷Ⅳ和竹节参皂苷Ⅳa进样量分别在 0.398~7.960、0.049~1.477、1.000~12.500、0.206~5.150
和 0.200~4.000 μg范围内线性关系良好（r>0.999 9），平均回收率在 99.91%~103.41%之间，RSD≤ 1.16%。
5种皂苷总量：根茎 >块根 >须根，根皮 >木质部，六年 >五年 >四年 >三年。结论：建立的方法简便快
速，分离效果好，可用于姜状三七的质量检测；测定不同部位、不同组织和不同年限皂苷含量，便于了解姜状
三七的化学特性，为姜状三七的质量评价以及合理开发利用提供依据。
关键词：姜状三七；人参皂苷 Rg1；人参皂苷 R0；竹节参皂苷Ⅳ；竹节参皂苷Ⅳa；不同部位；不同年限；高
效液相色谱
中图分类号：R 917　　　文献标识码：A　　　文章编号：0254-1793（2016）03-0500-05
doi： 10.16155/j.0254-1793.2016.03.17
Determination of 5 saponins in Panax zingiberensis by HPLC*
ZHANG Gao-ju1，2， SHEN Yong1，2， MENG Zhen-gui1，2， CHEN Jun-wen1，2， ZHANG
Guang-hui1， YANG Sheng-chao1**
（1.Yunnan Research Center on Good Agriculture Practice for Dominant Chinese Medicinal Materials， Kunming 650201， China；
2.College of Agriculture and Biotechnology， Yunnan Agricultural University， Kunming 650201， China ）
Abstract Objective： To establish an HPLC method for determining ginsenoside Rg1， ginsenoside Rb1， ginsenoside R0， chikusetsusaponin Ⅳ and chikusetsusaponin Ⅳa in P．zinginberensis．Methods： The analysis was carried out on an analytical column Agilent ZORBAX SB-C18 （150 mm×4.6 mm， 5 μm） with gradient elution by 0.1% phosphoric acid solution（A）-acetonitrile（B） solution （0-5 min， 15%B→ 20%B；5-35 min，
20%B→ 40%B；35-45 min， 40%B→ 90%B）， at the detection wavelength of 203 nm and a flow rate of 1.5 mL·min-1．
The column temperature was 20 ℃．Results： Linearity of ginsenoside Rg1， ginsenoside Rb1， ginsenoside R0， chikusetsusaponin Ⅳ and chikusetsusaponin Ⅳa standards was established within the concentration range of 0.398-7.960 μg， 0.049-1.477 μg， 1.000-12.500 μg， 0.206-5.150 μg and 0.200-4.000
μg with r>0.999 9， respectively. The average recoveries （n=5） of the ginsenoside Rg1， ginsenoside Rb1，
　　*　 NSFC-云南联合基金 （ 编号：U1402262）
　　**　通信作者　Tel： （0871） 5227059；E-mail： shengchaoyang@163.com
　　　　第一作者　Tel： 15198782665；E- mail： zhanggaoju2665@163.com
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ginsenoside R0， chikusetsusaponin Ⅳ and chikusetsusaponin Ⅳa were between 99.91%-103.41% with RSD≤ 1.16%．The total contents of 5 saponins in different parts， different tissues and different years
were ranged as follows： rhizome>tuberous>fiberous root； root bark>xylem； 6 years > 5 years > 4 years > 3
years．Conclusion： The developed method is simple， well separated and precise， which can be used to control
the quality of P．zingiberensis．Determination of 5 saponins gave an approach to understand characteristics of
P．zingiberensis and provided a chemical basis of reasonable exploitation and utilization of P．zingiberensis．
Keywords： Panax zingiberensis； ginsengnoside Rg1； ginsenoside R0； chikusetsusaponin Ⅳ； chikusetsusaponin
Ⅳa； different parts； different years； HPLC
姜状三七（Panax zingiberensis Wu et Feng）为五加
科人参属多年生草本植物，分布于云南东南部、尼泊尔
中部、不丹高海拔地区、缅甸东枝、掸邦等地［1-4］。民间
用于治疗跌打损伤、体虚疲劳。皂苷为姜状三七的主
要活性成分，主要含有达玛烷型皂苷和齐墩果酸型皂
苷，其中以齐墩果酸型皂苷为主［1，5-6］。齐墩果酸型皂
苷具有抗肿瘤、降血脂、降血糖、保肝等药理活性［7-10］。
已有文献报道同属植物人参、三七和西洋参不同年限、
不同部位皂苷含量［11-13］，而姜状三七是濒危物种，近年
对姜状三七的研究较少。吴其国等对姜状三七根茎中
三七皂苷 R1、人参皂苷 Rg1和人参皂苷 Rb1进行了含
量测定［14］，但未见测定姜状三七不同部位、不同组织
和不同年限皂苷的报道，本试验建立高效液相色谱法
同时测定姜状三七不同部位、不同组织和不同年限达
玛烷型皂苷：人参皂苷 Rg1和人参皂苷 Rb1和齐墩果
酸型皂苷：人参皂苷 R0、竹节参皂苷Ⅳ和竹节参皂苷
Ⅳa 5个皂苷的含量，以掌握姜状三七化学品质特性，为
姜状三七后期研究以及合理开发利用提供依据。
1　仪器、试药与试验材料
Agilent 1260系列高效液相色谱仪（G1311C四
元泵、G1329B自动进样仪、G1315D光电二极管阵列
检测器）和 Agilent Chem Station 工作站；梅特勒·托
利多 NewClassic MS半微量型电子天平。
人参皂苷 Rg1对照品（批号：110703-201027，
供含量测定用）和人参皂苷 Rb1对照品（批号：110703-201027，供含量测定用）由云南省食品药品
检定所提供，人参皂苷 R0、竹节参皂苷Ⅳ和竹节参皂
苷Ⅳa由成都植标化纯生物技术有限公司提供，高效
液相色谱测定纯度大于 98%。乙腈为色谱纯，水为
超纯水，其余试剂为分析纯。
本试验材料采自云南省普洱市镇沅县及玉溪市
新平县，经云南农业大学杨生超教授鉴定为姜状三七
（Panax zingiberensis Wu et Feng）。
2　方法与结果
2.1　溶液的制备
2.1.1　混合对照品溶液 取人参皂苷 Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷 R0、竹节参皂苷Ⅳ和竹节参皂苷Ⅳa的
对照品适量，精密称定，以甲醇定容至 10 mL，摇匀，
制得质量浓度分别为 398.0、98.5、500.0、206.0、200.0
μg·mL-1的混合对照品溶液，4 ℃保存，备用。
2.1.2　供试品溶液 参照中国药典 2010年版一部［15］
中三七含量测定项下供试品溶液制备方法，取各样品
粉末（过 65目筛）0.6 g，精密称定，精密加入甲醇 50
mL，称量，放置过夜，80 ℃水浴保持微沸 2 h，冷却，
再称量，用甲醇补足减失的量，摇匀，过滤，取续滤液
作为供试品溶液。
2.2　色谱条件
采 用 Agilent ZORBAX SB-C18 （150 mm × 4.6 mm，5 μm） 色谱柱，流动相为 0.1%磷酸水溶液（A）-乙
腈（B），梯度洗脱（0~5 min， 15%B→ 20%B； 5~35
min， 20%B→ 40%B； 35~45 min， 40%B→ 90%B），
流速 1.5 mL·min-1，检测波长 203 nm，柱温 20 ℃，进
样体积 10 μL。对照品及样品色谱图见图 1。
2.3　线性关系考察
精密吸取“2.1.1”项下制得的混合对照品溶液 0.5、
1、2、5、10、15、20、25 μL，按“2.2”项下色谱条件进样
分析。以色谱峰峰面积（Y）为纵坐标，以进样量（X）
为横坐标绘制标准曲线，得标准曲线回归方程（表 1）。
2.4　仪器精密度试验
精密吸取对照品溶液 5 μL，按“2.2”项下色
谱条件，连续进样 6次；结果人参皂苷 Rg1、人参皂
苷 Rb1、人参皂苷 R0、竹节参皂苷Ⅳ和竹节参皂苷Ⅳa
峰 面 积 的 RSD分 别 为 0.6%、1.0%、0.7%、0.4%和
0.2%，表明仪器精密度良好。
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1.人参皂苷 Rg1（ginsenoside Rg1）　2.人参皂苷 Rb1（ginsenoside Rb1）　3.人参皂苷 R0（ginsenoside R0）　4.竹节参皂苷Ⅳ（chikusetsusaponin Ⅳ）
5.竹节参皂苷Ⅳ a（chikusetsusaponin Ⅳa）
图 1　4年生姜状三七根茎（A）、块根（B）、须根（C）和混合对照品（D） HPLC图
Fig. 1　HPLC chromatograms of rhizome（A）， tuberous（B）， fiberous root（C） and mixed reference substances（D） of 4-year P. zingiberensis
表 1　5个皂苷的回归方程
Tab. 1　Calibration curves of 5 saponins
化合物（compound）　　　　　　　 回归方程（regression equation） r 线性范围（linear range） /μg
人参皂苷 Rg1 （ginsenoside Rg1） Y=192.823X+3.917 0.999 98 0.398~7.960
人参皂苷 Rb1 （ginsenoside Rb1） Y=185.522X+6.273 0.999 96 0.049~1.477
人参皂苷 R0 （ginsenoside R0） Y=213.965X+11.631 0.999 95 1.000~12.500
竹节参皂苷Ⅳ （chikusetsusaponin Ⅳ） Y=193.423X+7.967 0.999 92 0.206~5.150
竹节参皂苷Ⅳ a（chikusetsusaponin Ⅳa） Y=247.340X+4.899 0.999 92 0.200~4.000
2.5　稳定性试验
取 4年生姜状三七地下部分的供试品溶液，按
“2.2”项下色谱条件分别在 0、2、4、6、12、24、48 h进
样测定；结果人参皂苷 Rg1、人参皂苷 Rb1、人参皂苷R0、竹节参皂苷Ⅳ和竹节参皂苷Ⅳa峰面积的 RSD分
别为 0.4%、0.9%、1.1%、0.3%和 0.7%，表明供试品溶
液在 48 h内稳定。
2.6　重复性试验
按“2.1.2”项下平行制得 4年生姜状三七地下部
分的供试品溶液 6份，分别按“2.2”项下色谱条件进
样测定；结果人参皂苷 Rg1、人参皂苷 Rb1、人参皂苷R0、竹节参皂苷Ⅳ和竹节参皂苷Ⅳa平均含量分别为39.03、5.90、44.47、12.85和 7.32 mg·g-1，RSD分别为
1.3%、1.1%、0.8%、1.4%和 0.6%，说明该方法有较好
的重复性。
2.7　加样回收率试验
取已知含量的 4年生姜状三七块根粉末约 0.3
g，5份，精密称定，加入人参皂苷 Rg1、人参皂苷 Rb1、
人参皂苷 R0、竹节参皂苷Ⅳ和竹节参皂苷Ⅳ a质量浓
度分别为 0.731、0.027、1.631、1.106、0.306 mg·mL-1
的混合对照品溶液 5 mL，加甲醇定容到 50 mL，再按
“2.1.2”项下方法制得供试溶液，按“2.2”项下色谱条
件进样测定。测定结果见表 2。
2.8　样品含量测定
取姜状三七不同部位（4年生姜状三七根茎、块
根、须根）、不同组织（4年生姜状三七根皮、木质部）
和不同年限（新平县：2、3年；镇沅县：3~6年）地下
部分的粉末约 0.6 g，各 3份，精密称定，按“2.1.2”项
制成供试品溶液，按“2.2”项下色谱条件测定，外标
法计算人参皂苷 Rg1、人参皂苷 Rb1、人参皂苷 R0、竹
节参皂苷Ⅳ和竹节参皂苷Ⅳ a含量，结果见表 3。
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·503· 药 物 分 析 杂 志 Chin J Pharm Anal 2016,36(3)
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表 2　加样回收率测定结果（n=5）
Tab. 2　The result of recovery rate
化合物　　
（compound）　　
样品含量
（original）/mg
对照品加入量
（spiked）/mg
测得总量
（found）/mg
平均回收率
（average recovery） /% RSD/%
人参皂苷 Rg1 　　　　　
　（ginsenoside Rg1） 3.604 3.654 7.287 100.4 0.57
人参皂苷 Rb1 　　　　　
　（ginsenoside Rb1） 0.133 0.135 0.268 99.9 1.16
人参皂苷 R0 　　　　　　
　（ginsenoside R0） 7.971 8.153 16.655 103.3 0.85
竹节参皂苷Ⅳ 　　　　　
　（chikusetsusaponin Ⅳ） 5.550 5.528 11.382 102.8 0.57
竹节参皂苷Ⅳa　　　　　
　（chikusetsusaponin Ⅳa） 1.432 1.531 3.065 103.4 1.05
表 3　姜状三七不同部位、不同组织及不同年限 5种皂苷含量测定结果（%，n=3）
Tab. 3　The content determination results of 5 saponins in different parts， different tissues and
different cultivated years of P. zingiberensis
化合物 新平县
（Xinping county）
镇沅县（Zhenyuan county）
（compound） 2年（2 years）
3年
（3 years）
3年
（3 years）
4年
（4 years）
5年
（5 years）
6年
（6 years）
根茎
（rhizome）
块根
（tuberous）
须根
（fiberous root）
根皮 #
（root bark）
木质部
（xylem）
人 参 皂 苷 Rg1　　　　
（ginsenoside Rg1） 0.03 2.30 2.11 3.76 4.11 5.07 3.87 2.01 1.15 2.64 1.35
人参皂苷 Rb1　　　　　
（ginsenoside Rb1） 0.04 0.20 0.40 0.63 0.54 0.86 0.26 0.09 0.24 0.16 0.09
人参皂苷 R0　　　　　
（ginsenoside R0） 2.52 2.37 2.88 4.55 5.43 6.22 6.82 3.54 0.05 3.5 3.16
竹节参皂苷Ⅳ 　　　　
（chikusetsusaponin Ⅳ） 0.53 0.46 0.58 1.38 0.95 2.57 1.45 1.47 0.05 1.30 1.38
竹节参皂苷Ⅳa
　（chikusetsusaponin Ⅳa） 1.07 1.16 0.90 0.71 0.97 2.16 0.84 0.67 N.D. 0.47 0.76
总量（total） 4.19 6.49 6.87 11.03 12.00 16.88 13.24 7.78 1.49 8.07 6.74
O/D* 58.86 1.60 1.74 1.51 1.58 1.85 2.21 2.67 0.07 1.88 3.68
　注（note）：*齐墩果酸型皂苷与达玛烷型皂苷的比值（the ratio of oleanolic acid saponins to dammarane saponins）； #根皮包括周皮和韧皮部（root
bark includes periderm and phloem）；N.D.：未检测到（not detected）
3　结果与讨论
3.1　姜状三七不同部位、不同组织和不同年限皂苷
含量差异
本试验采用建立的高效液相色谱法分别对姜状
三七不同部位（4年生姜状三七根茎、块根、须根）、
不同组织（4年生姜状三七根皮、木质部）和不同年
限（新平县：2、3年；镇沅县：3~6年）地下部分中人
参皂苷 Rg1、人参皂苷 Rb1、人参皂苷 R0、竹节参皂苷
Ⅳ和竹节参皂苷Ⅳa进行含量测定；结果显示：在不
同部位中 5个皂苷总量以及人参皂苷 Rg1、R0和竹节
参皂苷Ⅳa含量为根茎 >块根 >须根；根据 O/D值可
知根茎和块根中皂苷以齐墩果酸型皂苷为主，在须
根中以达玛烷型皂苷为主。在不同组织中，5个皂苷
总量：根皮 >木质部；O/D：木质部 >根皮。5个皂苷
总量随年限增加呈上升趋势，可结合农艺性状对适
宜采收年限进行评定；采自镇沅县的样本 O/D值在
1.62~1.96之间，齐墩果酸型皂苷所占比率趋于稳定，
说明随着年限增加两种类型的皂苷均在增加。从新
平县样本看，达玛烷型皂苷的积累需要的时间较齐墩
果酸型皂苷长，但由于未采集到足够多的样本，故还
需要进一步验证。
3.2　评价指标的确定
前人对云南马关、金平和景东文山三产地姜状
三七人参皂苷 Rg1、Rb1、三七皂苷 R1和竹节参皂苷
Ⅳa进行了含量测定，人参皂苷 Rg1和 Rb1含量较高，尚
含有少量三七皂苷R1，但并未检出竹节参皂苷Ⅳa［16］。
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·504· 药 物 分 析 杂 志 Chin J Pharm Anal 2016,36(3)
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本次试验另采用三七皂苷 R1和人参皂苷 Rg1、Re、Rb1、Rd的混合标样检测，并未检出三七皂苷 R1和人
参皂苷 Re、Rd。中国药典 2010年版中人参皂苷 Rg1、Rb1为三七的主要活性成分，竹节参皂苷Ⅳa为珠子
参主要质量评价指标；人参皂苷 R0和竹节参皂苷Ⅳa
均具有促纤维蛋白溶解作用［17］，同时人参皂苷 R0还
有调节免疫系统的作用［18］，故本文最终确定以人参
皂苷 Rg1、人参皂苷 Rb1、人参皂苷 R0、竹节参皂苷Ⅳ
和竹节参皂苷Ⅳa为检测指标。
3.3　供试溶液制备方法选择
本文对比了超声和回流提取 2种方法，回流提取
效率更高；对比了甲醇和 70%甲醇提取率，差异不显
著，甲醇便于回收利用，最终采用甲醇回流提取方法
制备供试品溶液。
4　总结
本次试验首次对姜状三七地下部分不同部位、不
同组织和不同年限皂苷进行含量测定，结果说明人参
皂苷 Rg1、人参皂苷 Rb1、人参皂苷 R0、竹节参皂苷Ⅳ
和竹节参皂苷Ⅳa为姜状三七主要成分，且以齐墩果
酸型皂苷为最，与文献表现一致［1，5］。
本试验色谱条件简单，方法可靠，分离效果好，可
为姜状三七的质量评价以及合理开发利用提供依据，
并为寻找人参皂苷 Rg1、Rb1和竹节参皂苷Ⅳa资源提
供基础。
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（本文于 2015年 6月 11日收到）