全 文 ：基金项目:广西科学研究与技术开发计划项目(编号:桂科攻 11107010-2-13);广西壮药质量标准(第二卷)标准研究项目(编号:MZY2010058)
通讯作者:王海华 Tel:(0771)3132340 E-mail:
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化［8］。通过质量研究发现，该制剂中的阿魏酸含量
并不算高，远远低于单味药材，下一步将进行生产工
艺的优化，对药材提取进行研究，希望达到更好地临
床疗效。
参 考 文 献
1 宋佳希，汪俊军．军队人员心血管疾病危险评估的研究进展［J］．
医学研究生学报，2013，26(10):1088-1091
2 中国药典［S］． 2010 年版．一部． 38
3 胡益勇，徐晓玉． 阿魏酸的化学和药理研究进展［J］． 中成药，
2006，28(2):253-255
4 刘海涛，雷鹏，唐涛，等． ＲP-HPLC法同时测定补阳还五汤中 3 种
指标成分的含量［J］．中国药房，2013，24(3):232-234
5 兰顺，叶东梅． HPLC测定复方川芎胶囊中阿魏酸的含量［J］． 中
成药，2004，26(10):18-20
6 周军，尚强．通塞益脑口服液质量标准研究［J］．中国实验方剂学
杂志，2010，16(15):58-60
7 张晓丽．延胡索的化学成分研究［D］．沈阳:沈阳药科大学硕士学
位论文，2008
8 刘晓芳，刘养清，赵平，等． ＲP-HPLC法测定 7 种药材中反式阿魏
酸和顺式阿魏酸的含量［J］．现代中药研究与实践，2009，23(2):
34-37
(2014-03-05 收稿 2014-05-14 修回)
不同凉粉草中天然苯甲酸的含量测定
王海华1 覃丽萍2 (1．南宁食品药品检验所 南宁 530001;2． 广西右江民族医学院)
摘 要 目的:建立不同产地和存放时间的凉粉草中天然苯甲酸的含量测定方法。方法:采用高效液相色谱法，色谱柱为
Agilent ZOＲBAX SB-C18 ( 250 mm × 4． 6 mm，5 μm) ，以甲醇-0． 02 mol·L
－1的乙酸铵溶液为流动相 ( 5 ∶ 95 ) ; 流速: 1． 0 ml·
min －1 ;柱温: 35 ℃ ;检测波长: 230 nm;进样量: 10 μl。结果:苯甲酸在0． 1 ～ 10． 0 μg·ml －1范围内线性关系良好，r = 0． 999 9;
平均回收率在99． 59% ( ＲSD为1． 57%，n = 9) 。数据表明不同产地凉粉草所含苯甲酸的含量不同; 1 号凉粉草的苯甲酸含量最
多，为141． 8 mg·kg －1，3 号凉粉草的苯甲酸含量最少，为73． 8 mg·kg －1，凉粉草打粉存放两年后苯甲酸的含量均明显下降。
结论:该方法操作简单，准确性和重复性良好，为凉粉草资源的进一步深入研究提供依据，同时为其他植物中天然苯甲酸含量
测定提供参考。
关键词 凉粉草;苯甲酸;含量测定; 高效液相色谱法
中图分类号:Ｒ927． 2 文献标识码:A 文章编号:1008-049X(2014)09-1493-03
Determination of Natural Benzoic Acid in Different Mesona Chinensis Benth．
Wang Haihua1，Qin Liping2(1． Nanning Institute for Food and Drug Control，Nanning 530001，China;2． Guangxi Youjiang Medical
College for Nationalities)
ABSTＲACT Objective:To develop a method for the determination of natural benzoic acid in Mesona chinensis Benth． with different
production places and storage time． Methods:HPLC was adopted，the column was an Agilent ZOＲBAX SB-C18(250 mm ×4． 6 mm，
5 μm)column，the mobile phase was methanol-0． 02 mol·L －1 ammonium acetate (5∶ 95)at the flow rate of 1． 0 ml·min －1，the col-
umn temperature was 35 ℃，the detection wavelength was 230 nm，and the injection vocume was 10 μl． Ｒesults:Benzoic acid showed
good linearity over the concentration range of 0． 1-10． 0 μg·ml －1(r = 0． 999 9)． The average recovery was 99． 59%(ＲSD = 1． 57%，
n = 9)． Natural benzoic acid in powered Mesona chinensis Benth． was different because of various production places． The maximum
content of natural benzoic acid in Mesona chinensis Benth． was 141． 8 mg·kg －1，while the minimum content was 73． 8 mg·kg －1 ．
The content of natural benzoic acid in Mesona chinensis Benth． stored for two years was declined obviously． Conclusion:The method
with simple operation is accurate and reproducible． It can provide a basis for the further study of Mesona chinensis Benth． resources，
and provide a reference for the content determination of natural benzoic acid in other plants．
KEY WOＲDS Mesona chinensis Benth．;Benzoic acid;Determination;HPLC
凉粉草又名仙草、仙人草、仙人冻、黑豆腐草、薪
草等，为唇形科凉粉草属植物凉粉草(Mesona
chinensis Benth．)的全草，主要分布于我国的广东、
广西、福建、江西、海南、浙江、台湾和云南等地，其他
国家如越南、印度、印度尼西亚、马来西亚也有分
布［1］。凉粉草是一种重要的药食两用植物资源，在
我国以及东南亚地区已经有悠久的应用历史，据
《中药大辞典》记载，凉粉草具清暑、解渴、除热毒的
作用，用于治疗中暑、消渴、高血压、肌肉关节疼痛等
症。
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中国药师 2014 年第 17 卷第 9 期 China Pharmacist 2014，Vol． 17 No． 9
苯甲酸，又名安息香酸，广泛用作食品防腐剂，
目前常用的防腐剂均属于化学合成物，有一定的毒
性。一方面，国家标准［2］对食品添加剂尤其是防腐
剂添加量的控制越来越严格，在标准中对各类食品
中苯甲酸的最大添加量作了明确规定，且在有些食
品中不得检出;另一方面，由于苯甲酸天然存在于一
些植物中，若采用这些植物作原料，制成的食品也必
然或多或少含有苯甲酸。标准规定的检出限量值或
不得检出也曾引起广泛争议，如乳制品中的苯甲酸。
因此，对植物等天然存在苯甲酸的研究将有利于相
关食品行业标准的制定，同时对食品加工工艺的改
进也具有重要指导意义，在当今人类回归自然，对食
品安全天然防腐剂的研究也应成为发展方向。
此外，苯甲酸及其衍生物普遍存在于天然植物
中，是植物的次级代谢产物，具有调节植物生长和代
谢、抵御病害虫入侵等多方面功效，并大多具有确切
的药理活性和药用价值［3］。邱凌［4］在其博士学位
论文中报道，植物中的苯甲酸对酪氨酸酶有显著的
抑制作用，从而抑制黑色素的合成，可用于美白化妆
品的开发、昆虫的生物防治等领域。张汉明［5］在板
蓝根中所分得的四种有机酸则具有较强的抗内毒素
活性，其中苯甲酸和水杨酸的作用最强。本文对凉
粉草中天然苯甲酸的含量进行测定，现报道如下。
1 仪器与材料
1． 1 仪器
Agilent 1200 型高效液相色谱仪(美国安捷伦科
技有限公司);S220 多参数测试仪(梅特勒-托利多
仪器);KQ-500DV型数控超声波清洗器(昆山市超
声仪器有限公司);Velocity 18Ｒ 型冷冻离心机(澳
大利亚 Dynamica Pty Lid)。
1． 2 材料
标准物质:苯甲酸溶液标准物质［GBW(E)
100006，批号:11002，1． 00 mg·ml －1，购自中国计量
科学研究院］;甲醇(色谱纯，美国 Fisher 公司);其
余均为分析纯。
凉粉草 1 号、2 号、3 号、4 号、5 号、6 号、7 号、8
号、9 号均来自广西宇峰保健食品有限公司，其产地
分别为灵山新圩、广东增城、越南、台湾、福建、灵山
平南、灵山新圩(粉碎后存放 2 年)、广东增城(粉碎
后存放 2 年)、越南(粉碎后存放 2 年)。
2 方法与结果
2． 1 色谱条件［6］
色谱柱:Agilent ZOＲBAX SB-C18 (250 mm ×
4． 6 mm，5 μm)，流动相:甲醇-0． 02 mol·L －1的乙
酸铵溶液 = 5∶ 95;流速:1． 0 ml·min －1，柱温:35℃;
进样量:10 μl;检测波长:230 nm。在上述色谱条件
下，苯甲酸与其他共存峰得到很好的分离，分离度大
于1． 5，见图 1。
A．苯甲酸标准物质 B．凉粉草样品 1．苯甲酸
图 1 HPLC色谱图
2． 2 标准品溶液的配制
精密吸取一定量的标准物质，用水稀释成浓度
分别为0． 1，0． 2，0． 5，1． 0，2． 0，5． 0，10． 0 μg·ml －1
的系列标准品溶液。
2． 3 供试品溶液的配制
取已过 24 目筛的凉粉草粉末0． 5 g，精密称定，
置 50 ml 离心管中。加入0． 3% NaOH 溶液 30 ml，
冷浸 10 min，然后超声(500 W，40 kHz)20 min，提取
液经 10 000 r·min －1离心 10 min，将上清液转移至
50 ml烧杯中，用稀盐酸调节 pH至约7． 0，转移至 50
ml量瓶中，用水定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液
待测。
2． 4 线性关系的考察
分别吸取“2． 2”项下配制的苯甲酸标准系列溶
液 10 μl，在“2． 1”项下色谱条件进行测定，以浓度
(X，μg·ml －1)为横坐标，峰面积(Y)为纵坐标，绘
制标准曲线，得苯甲酸的线性方程为:Y = 31． 30X +
1． 22，r = 0． 999 9。结果表明，苯甲酸在浓度0． 1 ～
10． 0 μg·ml －1范围内呈良好的线性关系。
2． 5 精密度试验
精密吸取标准品溶液(1． 0 μg·ml －1)10 μl ，依
“2． 1”项下色谱条件进行测定，连续进样 6 次，记录
峰面积，计算峰面积 ＲSD为0． 3%(n = 6)，表明仪器
精密度良好。
2． 6 稳定性试验
取 6 号凉粉草供试品溶液，分别于配制后 0，3，
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www． zgys． org 研究论文
6，9，12，24 h 进样 10 μl ，记录峰面积，计算峰面积
ＲSD为1． 2%(n = 6)，说明供试品溶液在 24 h 内稳
定。
2． 7 重复性试验
精密称取 6 号凉粉草0． 5 g，共 6 份，按照“2． 3”
项下进行提取，依“2． 1”项下色谱条件测定含量，记
录峰面积，计算样品中苯甲酸的含量。结果苯甲酸
平均含量为106． 5 μg·g －1，ＲSD为2． 5%(n = 6)，表
明方法重复性良好。
2． 8 加样回收率试验
取已知含量的 6 号凉粉草粉末 9 份，每份约
0． 25 g，精密称定，置 50 ml离心管中，分别加入苯甲
酸标准溶液(10μg·ml －1)2，3，4 ml 各 3 份，按
“2． 3”项下方法制成样品溶液，依“2． 1”项下色谱条
件进行测定，计算加样回收率和 ＲSD，结果表明，苯
甲酸的平均回收率为99． 59%，ＲSD = 1． 57%(n =
9)，表明本法的准确性良好。
2． 9 检测限与定量限
取 6 号凉粉草供试品溶液，适当稀释并进样测
定，根据称样量和定容体积，当信噪比(S /N)为 3
时，测得苯甲酸的检测限为2． 1μg·g －1;当信噪比
(S /N)为 10 时，测得苯甲酸的定量限为12． 6 μg·
g －1。
2． 10 耐用性试验
取 6 号凉粉草供试品溶液，按拟定色谱条件分
别使用 Agilent ZOＲBAX SB-C18(250 mm × 4． 6 mm，
5 μm )、Agilent ZOＲBAXE Eclipse XDB-C18(250 mm
×4． 6 mm，5 μm)、Waters XTerra@ MS C18(250 mm
× 4． 6 mm，5 μm)三根色谱柱测定苯甲酸的含量。
结果显示不同色谱柱上测定值无明显差异，ＲSD 为
0． 9%(n = 5)，表明方法耐用性较好。
2． 11 样品含量测定
精密称取 9 个凉粉草粉末样品，按“2． 3”项下
方法制成供试品溶液，依“2． 1”项下色谱条件测定，
结果见表 1。
表 1 不同凉粉草中苯甲酸的含量(μg·g －1，n =3)
凉粉草样品 含量 凉粉草样品 含量
1 号 141． 8 6 号 106． 5
2 号 88． 6 7 号 42． 8
3 号 73． 8 8 号 52． 5
4 号 97． 4 9 号 48． 6
5 号 77． 6
3 讨论
3． 1 提取条件的优化 首先采用超声、回流提取进
行初步筛选，结果显示回流提取所得的提取液杂质
太多，目标峰与共存峰不易分离，因此选择超声提
取。接着又系统考察了水、0． 5% NaOH、0． 5%
NaHCO3、0． 5% Na2CO3 四种提取溶剂，由于选用
NaOH溶液可使提取苯甲酸的含量最高，所以最终
选用 NaOH溶液进行超声提取，并在此基础上，运用
正交试验 L16(4
5)对 NaOH 溶液超声提取方法进行
优化，主要考察 NaOH溶液浓度、用量、提取时间、提
取次数 4 个因素，最后确定的方法为0． 3% NaOH，用
量 30 ml，超声 20 min，提取一次，超声前冷浸 10
min，让供试品粉末被浸润，以便更好提取。
3． 2 流动相的选择 试验中曾选择不同比例的甲
醇-水、甲醇-0． 1%的磷酸及乙腈-0． 1%的磷酸［7 ～ 9］
为流动相，结果发现被测成分分离度都不太理想，要
尽量延长苯甲酸的保留时间使其与杂质峰分离。由
于苯甲酸极性较强，有文献［10］在流动相中加入了十
六烷基三甲基溴化铵(HDTA)，使其与有机酸形成
离子对而使主峰保留时间推迟。本试验尝试在甲
醇-水中加入乙酸铵，得到了同样的结果，分别考察
了不同的比例，结果以甲醇-0． 02 mol·L －1乙酸铵
溶液(5∶ 95)的分离度最好。
3． 3 经试验结果表明，凉粉草含有微量的天然苯甲
酸，产地和存放时间不同的凉粉草所含的苯甲酸有
所差异，其中 1 号凉粉草的苯甲酸含量最多，3 号凉
粉草的苯甲酸含量最少;打粉后放置两年的凉粉草
所含苯甲酸含量明显减少。此方法简单，可行，可用
于凉粉草天然苯甲酸含量的测定。
参 考 文 献
1 赵志国，石云平，黄宁珍，等．中国凉粉草属植物研究进展［J］．南
方农业学报，2011，42 (6):657-660
2 中华人民共和国卫生部．食品安全国家标准食品添加剂使用标准
［S］． GB 2760-2011
3 唐文强，刘长海．天然苯甲酸生物合成机制的研究进展［J］．中国
调味品，2011，8(36):12-15
4 邱凌．天然植物活性物质对酪氨酸酶作用机理的研究［D］．厦门:
厦门大学博士学位论文，2008
5 张汉明，张戈，乔传卓．板蓝根和大青叶不同部位的靛蓝、靛玉红
含量测定及其部分成分的抗内毒素作用比较(摘要)［J］． 药学
实践杂志，2000，18(5):347
6 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局，中国国家标准化管
理委员会． 食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定［S］． GB /T
23495-2009
7 邓海英，康四和． HPLC 法测定顽癣净中苯甲酸和水杨酸的含量
［J］．中国药师，2008，11(9):1049-1051
8 李伟铭，赵月然，杨燕云，等． HPLC 波长切换法同时测定白芍饮
片中 9 个成分的含量［J］． 药物分析杂志，2011，31(12):2208-
2212
9 年四辉，李萍，刘丽敏，等． HPLC测定板蓝根及其制剂中水杨酸、
苯甲酸的含量［J］． 中国试验方剂学杂志，2012，18(21):92-95
10 李爱华． 反相离子对 HPLC 法同时测定复方苯甲酸软膏中两组
分的含量［J］．中国药师，2012，15(1):77-78
(2014-04-09 收稿 2014-05-20 修回)
5941
中国药师 2014 年第 17 卷第 9 期 China Pharmacist 2014，Vol． 17 No． 9