全 文 ：溶液 0. 5, l , 0 , 2 0 , 3 . 0 , 4 , o , 5 , 0 科1分别点于 同
一薄层板上 ,按上述条件展开 , 定位 , 扫描 。 以
峰面积积分值对点样量作线性考察 , 求得回归
方程为 A = 3 8 8 12 . 8 l C 一 2 12 7 . 5 9 , r = 0 . 9 9 2 ( n
二
6)
。 结果表明 ,大黄素点样量在 0 . 125 一 1 . 25
陀范围内与峰面积积分值呈 良好的线性关系 。
2
.
5 稳定性试验 吸取大黄素对 照品溶液 2
闪,依法操作 ,并每 隔一定时间对 同一斑点扫描
一次 ,结果大黄素在 8 小 时内其峰面积积分值
基本稳定 , SR D 二 0 . 4 6% ( n 二 6 ) 。 吸取样品溶液
依法操作 ,并每隔一定时间扫描一次 ,结果样品
斑点在 8 小 时 内其 峰面 积积分值 基本 稳定 ,
SR D = 1
.
94 % (
n = 6 )
。
2
.
6 精密度试验 在同一薄层板上点相同的
5个大黄素对照品各 2 醉 , 依法操作 , 其峰面积
积分值 SR D 二 2 . 2% , 故采用外标对照法进行样
品测定 。
2
.
7 重复性试验 取 同一样品各 5 份 , 进行
重复性试验 ,结果 R S D = l , 76 % 。
2
.
8 加样回收率 取 已知大黄素含量的虎杖
药材 6 批 ,分别加人一定量的大黄素对照品 ,按
样品测定方法制备 ,测定 ,结果 又二 97 . 7 % , sR D
= 1
.
8 8% (
n 二 6 )
。
2
.
9 样品测 定 取不同样 品粉碎 , 过 3 号筛 ,
依法测定 ,并与药典法测定结果 比较 , 见表 。
表 2 种测定结果比较 {% . n = 2)
序号 1 2 3 4 5 6
8 8 1
.
9 8 1
.
92 2
.
2 1 2
.
02 1
.
6 3
2
.
2 2
,
4 1 2
.
64 2
,
53 2
. 翻 2 . 15
法)描素法扫黄醒典蕙层大药总薄((
( Z tX刃 一 0 3 一 2 8 收稿 )
药理
穿心草汕酮对心肌细胞缺氧一再给氧损伤的保护作用
广州蛇毒研究所 (广州 51 0 182) 何泉华
中山大学药学系 (广州 51 02 75 ) 何 岚 许实波
中山大学化学化工学院 (广州 51 0 2 7 5 ) 邓芹英
摘要 以 助 a l能 ’ s 方法建立心肌细抱缺氧 ·再给氧模型 , 缺糖缺氧 印 而。 ,再给氧 30 而 n , 结果发现
心肌释放 I刀 H 含量显著增加 ,细胞膜流动性下降 ,再给氧组上述各指标改变加剧 。 灿酮能明显提高心肌
细胞的成活率 ,减少乳酸脱氢酶的释放 ,增加细胞膜流动性 ,减少心肌细胞膜的损伤 。 证明有明显抗心
肌细胞缺氧一再给氧损伤作用 。
关键词 灿酮 培养心肌细胞 乳酸脱氢酶 膜脂质流动性
穿心草灿酮 (~ ht o en
,
Xan )是由中山大学
化学化工学院天然有机室分离提纯的一类黄酮
类化合物 ,前期的工作证实 X an 对大 鼠心肌缺
血再灌注心律失 常有 预 防作用 〔’〕 , 从而 提示
Xan 可能对缺氧
一再给氧损伤 ( an ox i-a er o xy g e n a -
iot n inj
u 。 , A 一 IR )的心肌细胞具有保护作用 ,本
实验以大 鼠乳鼠心肌细胞为标本进行了研究 。
1 实验材料
灿酮 ( xan ht on e ) : l
,
8
一
d i衍d r o xy 一 3 , 5一 d ime ht 呷 -
蕊朋山。 en ( X a l l一 工 ) ; 1~ 11yd r o x 》一3 , 5一 id me ht oxy
一
xan
-
中药材第 23 卷第 7期 2以X) 年 7 月
山 O l l e ( X a n 一 1 ) ; l 一场d r o翔一 3 , 7 , 8一 t ir d l〔 ,甲习11ht o n e
( x an
一班 ) ,呈黄色针状 晶体 , 纯度为 9 . 6% , 由
中山大学化学化工学院天然有机室提供 。 使用
时配成含 0 1% 的二 甲亚矾和 o r l % 的吐温 80
双蒸水悬液 。 川〕M l一 l酬0 培养基 , 荧 光探针 1 ,
6
一二苯基一 l , 3 , 5 一己三烯 ( DPH ) , 均为 is 乡1 1a 公 司
产品 ;胰蛋 白酶为上海生化试剂采购站进 口分
装产品 ;小牛血清为 eS o e 公司产 品 。 出生 2 -
4 d 的 SD 大鼠 , 由广东省 医用实验动物 中心提
供 。
39 9
·
DOI : 10. 13863 /j . i ssn1001 -4454. 2000. 07. 015
2实验方法
2
,
, 心肌细胞的培养圈 无菌条件下 , 取出生
后 Z d 的 S D 大 鼠心室放于 H a n ks 液 中剪碎 , 用
o
.
or % 的胰蛋 白酶 在磁力搅拌下分散细胞 , 温
度控制在 37 土 0 . 5℃ , 每 10 分钟收集一次细胞 ,
离心 2 次后将所得 的全部细胞置 于含有 or %
新生牛血清及 90 % 的培养基 的 30 耐 的大培养
瓶中 , 37 ℃在 5% C仇 及 95 % 空气 的二氧化碳
培养箱 中培养 90 而 n 。 以 l x l护 /耐 的密度接
种于 250 耐 培养瓶 中 , p H 7 2 土 O ` 2 , 置 37 ℃ 培
养箱 中 。 培养 2 一 3 d 后 , 心肌细胞 白发性收缩
良好 ,开始实验 。
2
.
2 细胞缺氧模型 的建立 按 照文献 stZ 3] 方
法 ,将培养液换成 。 . 99 姚 的无 糖 刊朋k s 液 2
iln (跳为 4 廿 a ) ,再给氧 l h 。 给药组 在改换高
纯 姚 缺氧前 3。 而 n 分别加人 x an 一 工 (终浓度
为 0 . 2 拼1 110 1· L , ) 、 X an 一 1 (。 2 哪 d · -L ` ) 、 x an 一皿
( 0
.
2四 l · L , )及 s o D (4 哩 · I; , ) ,并设溶媒对照组 。 _匕述各组加人药后 Z h 观察细胞搏动率 ,
释放 DL H 的浓度 。
2 3 心肌细胞成活率的测 定 将培养液从培
养瓶中倾出 ,加胰蛋 白酶 , 室温下放置 1 而 n , 以
滴管反复吹吸 ,取混悬液 9 滴 , 加台盼蓝 1 滴 。
混匀 3 而 n 后 ,于血球 计数板上随机计数 50 个
细胞中的着色 比率 。 以着色细胞作为死亡细
胞 ,间接计算细胞的成活率 。
2
,
4 乳 酸脱氢酶 (DL H )的测定 每培养瓶为
一样本 ,利用顺向反应 , 以乳酸为基质 , 在 科 O
似波长 下 进行 比色 , 检测 在 辅酶 工存 在时 ,
DL H 使乳酸转化为丙酮酸的含量 , 以 间接测定
日 ) H 活性 。
2
.
5 细胞膜脂质 流动性的测定 按文献闭用
D PH 测定 , DP H 使用前先用四氢吠喃配成 Z x
10’ 3 m
o F L 的母 液 , 低 温 避光 保 存 , 用 时 以
0
.
01
~
U L BP S 稀释为 Z x 1o石 ~ d / L 的应用
液 ,并猛烈振摇 , 最后 以各向异性 ( an i以 r o p y )了
表示膜 流动 性·的大 小 , Y 值越大 , 膜流动 性越
小 。
3 实验结果
3
.
, 时心肌细胞成活率的影响 表 l 所示 ,
·
4 0 0
缺氧组心肌细胞的成活率明显下降 , 缺氧一再给
氧组的成 活率则 进一步 下降 ( P < 0 . 05 ) , 3 种
X an 和 SO D 均能提高缺氧再给氧后心肌细胞 的
成活率 ,说是 X an 对心肌细胞具有保护作川 。
3
.
2 对心肌细胞释放 DL H 含量的影响 表 1
所示 , 3 种 X a 刀 组与缺氧 一再给氧组比 , 心肌细胞
释放的功H 含量明显降低 ( P < 0 . 0 1 ) ,说 明缺
氧一再给氧使心肌细胞受到 明显伤 害 ,受试样 品
均能有效地阻止 功 H 从胞 内漏 出 ( P < 0 . 05 , P
< 0
.
0 1或 P < 0 . 田 l ) 。
3
.
3 时心肌细胞膜脂质流动性的影响 与对
照组 比较 , 缺氧心肌细胞膜 丫值增 大 ;缺氧一再
给氧心肌细胞膜 下值进一步增大 , 与对照组 比
较 P < 0 . 01 ,加入 X an 后 ,心肌细胞膜 了值降低 ,
与缺氧一再给氧组比较有显著性差异 , P < o . m 。
表 1 山酮对培养心肌细胞缺氧 .再给氧
损伤的影响 (豆士 s , n 二 8)
剂量
(卜川目 1
·
U 作活率场 ) L DH( IU / L )
正常对照
缺氧组
缺氧 一再给氧 ( A一 m )
A
_川 十济媒对照
A
一
IR 十跳心
A
_
IR 十 X田 1
一 工
A
一
IU
一 沁切 . n
A
一
1
士 X an
一
m
七
4 咪 z L
8 2 士 6
阶 士 护
65 生 5
8 9 士 5番 赞
8 7 士 6 丹 圣
76 士 6 份
日5 士 5 裕 ,
16 土 5 0 ` 117 士 0
.
0抖
62 士 12 0
.
142 士 0
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土 7一 0 1姆 士 0 . (阴~
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乃 土 4 “ 裕 芬 0 卜 1劝 士 0 .《洲只 杯 芳
56 土 6 卜 M 刃 0
.
14 土 0
. 〔减涟 讲
27 士 5 俗 井 号 0
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l孙 士 0 , 匡吟苍 侧
,2
:
响00
与 正常组 比 : 。 P < 0 .仍 ` P < -0 图 L ; 与缺氧再给氧组 比 : “ P <
0
, 叱 , “ 等 P < 0 . 0 1 , , 居 工 P < 0 . X() l
4 讨论
细胞膜是细胞的一道有效屏障 ,亦是 细胞
内外进行物质和信息交换的重要场所 , 维持细
胞膜的相对稳定是细胞生理功能正常进行的必
要条件 。 当机体细胞膜受到损伤 时 ,膜 的流动
性降低 、 细胞 内的物 质如酶等被 释放 出来囚 。
心肌细胞缺氧 一再给氧损 伤时膜动流性下降 、释
放的 DL H 含量明显增加 。 加人 3 种 。 2 户 on .l
L I的 Xan 后 可不同程度地提 高细 胞膜的 流动
性 ,减少 DL H 的释放 , 说 明 X an 对培养心 肌细
胞 A 一 IR 有 良好的保护作用 。
前期的工作表 明川 : x a 。 可减 少动物 脏器
组织匀浆 的脂质过氧化产物 M D A 的含量 , 能清
除 ·仇 和 · O H 自由基 , 对心肌缺 血再灌损 伤及
中药材第 刀 卷第 7 期 2仪叉)年 7 月
异丙肾上腺素致大 鼠心肌损伤均有明显的保护
作用 。 木研究 发现 , 3 种 X an 均不同程度地对
培养心肌细胞 A 一班 有 良好 的保护作用 。 其作
用机制或许与其清除 自由基 、 抑制脂质过氧化
反应 、维持细胞膜功能的完整有关 。
参 考 文 献
1 何泉华 , 等 . 灿酮抗心 肌缺血再灌损伤的保护作用
及其机制 . 中国中药杂志 , 19 8 , 23 (9) : 5 56
2 高明堂 ,等 一 1一 (2 ,吞二甲苯氧基 ) 2一 (3 , -4 二甲氧基苯
乙氨基 )丙烷盐酸盐对培养心肌细胞缺氧后再给氧
损伤的影响 . 中国药理学通报 , l卯 5 , 1 1( 4 ) : 374
万华印 , 等 . 酸枣仁皂贰对缺氧 一再给氧心肌细胞的
保护作用 . 生物化学与生物物理进展 , 1卯5 , 2 2 ( 6 ) :
5叼
林克椿 ,等 , 用荧光探剂 DP H 研究腹水癌细胞膜流
动性 . 生物化学与生物物理进展 , 198 1 , 6( 1 ) : 31
M
~
IU L
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七奴 il s m , 19 7 , 46
( l )
: 59
( 19 9 9
一 0 7 一 0 8 收稿
2 0( 刀 一 03 一 01 修回 )
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二 ht 记 :
~
a
ar dl 目~ , d e l玉c ie n C y for 印 而 n fo l 《 I、低 衍 二 。 xy ge ant i on 印 〕d 伶 e x户妈 ur e oL 酥cu , ofr 3O n` n厂 n le 0 5血
由。场 de d坦 t ht e s vur iv己 ar et of l幻 y配肛 d ial c e l坛 in 阮 an初 a 邵、〕 I l p~ 就 g曲 e由 z tly d e e。 * d , 工℃l e , of l ac 、 at e de卜y dl 哩心 r~
(切 H)加 m 11w仪 yt e , ~ icn 肥ase d 田 ld 毗汕~ n巨 id yt ~ de c , * d , 山 het c h an 罗 : * 。 m u o h mo 二 * 二二 in ht e er卿 -
名e n 吕iot n gr 0 l l p . 3 0 nu n 加诬抽℃ an 咖 a , a dd i“ o n of x a l城11o n e s : 1 , 8一 d让l〕劝D x少 3 , 5一 idI : 。 htO 娜阴d ol r le , l 一 hdy r o x y ~ 3 , 5~ d in l e t ho朴产-
朋山。 n e az 记 1. h y`ha 习 r . 3 , 7 , 8 一巨击啊~ hot ne , isol a edt 6刀 n l 肠 sn c o 几 2 1翻c i汉15 5女刀。 i朋er * d het ar et of l l l ) ocr 出 t li al c业 an d ~ n -
b阳 们e 伍d id yt , d e c er a咒d t反 er le 仪 of 功H . 卫 l e s e i璐 ilL怡 su 朋邵 et d hat t x an hot n e Ina y p or vi de ~ P or
t e c it vc
c统 c卜 。 n t阮
~
扩 r e o xy g e n a t i on d a n l吕g e o on m yoc 酬 iuxn ,
K ( y 钧心 C 。 子” ~ 及、 似台s自刀a X田l t ll o n e ; Cul tuL 侧 m ,咖刃 e s ; DL H ; M e n山 r出 le 月1石d i yt护” 挤” 挤” 沙四 挤” t裂扫挤” 夕” 挤够 J吟沙, 3夕” 挤” J ,卒护夕熟尹臼,挤 , 宁岁只毛抑 , ;笋, ,建日卜护,气护, ;笋 , 石那 ,矛 , ;咫卜担 , ;咫 , ;担 , ;拟卜咫叼;咫明;异” ;异刘 ;裂妙孚” ;炙妇 ;多” 尹 , 挤 ” ;赛”
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中药材第 23 卷第 7 期 2夏XX)年 7 月 · 4 01 ·