全 文 ：药物分析杂志 C卜 li n J pha m rA na l 2 00 8, 2 8 ( 3 ) 34 5
H P L C 一 D A D 一 M S 法同时测定藏药花锚中 6 个灿酮类成分 ’
王玫 ’ , 石建功 ’ , 车镇涛 2 , 杨鹤强 ’ , 王慕邹
( 1
. 中国医学科学院 、中国协和医科大学药物所 , 北京 1000 50 ; 2 . 香港中文大学中医药学院 ,新界沙田 , 中国香港 ;
3
. 香港中文大学医学院药理系 , 新界沙田 , 中国香港 )
摘要 目的 :建立高效液相色潜 一 二极管阵列检测 一 质谱法 ( H P L C 一 D A D 一 M S ) 同时测定藏药花锚中 6 个01 酮类成分 , 即 5
个0lJ 酮昔元 , 1 一 挫基 一 2 , 3 , 5 一 三甲氧基 一 01 酮 ( H M 一 1 ) , 1 一 烃基 一 2 , 3 , 4 , 7 一 四甲氧基 一汕酮 ( H M 一 2 ) , l 一 经基 一 2 , 3 , 4 , 5
一 四 甲氧基 却山酮 ( H M 一 3 ) , 1 , 7 一二羚基 一 2 , 3 , 4 , 5 一 四甲氧基 一 glI 」酮 ( H M 一 4 ) , l , 5 一二经基 一 2 , 3 一 二甲氧基 一 口I妇酮 ( H M
一
5) 及 l 个汕酮昔 , 1 一 o 一 晒 一 D 一 木糖 一 ( 1 一 6 ) 一月一 D 一 葡糖 〕一 2 , 3 , 5 一 三甲氧基 一 ol J酮 ( H M 一 2 一 10) 的含量 。 方法 : 采
用 Al lt i , 11 a C 、、色谱柱 ( 4 . 6 。 ,m x 25 0 m m , 5 卜n l ) , 以乙睛 一 0 . 5% 醋酸 ( : / : )进行梯度洗脱 ( 0 m i m , 2 0 : 80 ; 20 m i n , 70 : 30 ; 3 0 m in ,
50
: 2 0 ; 30
.
1 , n i n
,
2 0
:
80 ; 35 m i
n , 2 0
:
50 )
, 流速 0 . 8 m L · m in 一 ’ , 检测波长 2 5 2 n m , 离子源 A Pe l , 扫描模式正离子 。 结果 : H M 一 、
H M 一 2
、
H M
一
3
、
H M
一 4 、 H M 一 5 平II H M 一 2 一 1() 分别在 0 . 05 一 5 . 0 , 0 . 05 一 5 . 0 , 0 . 0 5 一 5 . 0 , 0 . 05 一 10 . 0 , 0 . 05 一 5 . 0 , 0 . 0 5 一 2 . 0 ,
0
.
0 5 一 2 . 0 林g 的范围内线性关系良好 ( r 分别为 0 . 9 9 9 9 , 0 . 9 9 9 9 , 0 . 9 99 7 , 0 . 9 999 , 0 . 9 999 , 0 . 99 92 ) ; H M 一 l 、 H M 一 2 和 H M 一 3
平均回收率 ( n = 9) 分别为 95 . 20 % , 9 . 80 % , 97 . 37 % 。 结论 :本法简便 、 准确 , 重现性好 , 可作为藏药花锚药材质量检测的方
法 )
关键词 :藏药 ;花锚 ; 01 酮 ; 高效液相色谱 一 二极管阵列检测 一质潜法
中图分类号 : R g 1 7 文献标识码 : A 文章编号 : 0 2 54 一 1 7 9 3 《2 0 0 8 ) 03 一 0 345 一 0 5
Q u a n t i t a t i v e a n a l y s i s o f s i x x a n t h o n e s i n H d le n ia e ilP 瓦c a
b y h ig h 一 P e r fo r m a n c e li q u id c h r o m a t o g r a Ph y 一 d i o d e
a r r a y d e t e c t i o n 一 m a s s s P e c t r o m e t r y `
w A N G Y
a n ’ ,
s H I J i a n 一 g o n g ’ , c H E e h u n 一 t a o Z , Y E u N c H
.
K
.
J o h n ,
,
w A N G M u 一 z o u
( 1
.
1「、 s t i t u t e o { M a 一e ,i a M e 〔l i c a , C h i r l e s e A〔 a d e : l l y o f M e d i o a ] S e ie ll e e s , B e iz i n g , 100 0 5 0 , C hi n a ;
2
.
5
仁
1
1 0 0
1
《 ,
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ll e s e
M
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d i e i n
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l e
C l
l i ll e s e U
r一i v e r s i* y o f H o n g K o n g , S h a t i n , N T , H o n g K o n g S A R , (二h i ll a ;
3
.
D e p a d m e ,1一 o f P li a r ,。 a e o l o盯 , F a e L : ] t y o f M e d i e i r l e , 『r h e C h i n e s e U ,l i v e r s i l y o f H o n g K o n g , S h at i n , N T , H` )n g K o n g S A R , Ch i ,: a )
A b s t r a c t o bj
e e t i v e : T o d e v e lo p a h i g h p e for
r m a n e e l i q u id e h r o m a t o g r a p h y 一 d i o d e a r 叮 d e t e e t i o n 一 m a s s s p e e -
t r o m e t仃 ( H P LC 一 D A D 一 M S ) m e t h o d fo r s im u l t a n e o u s d e t e r m i n a ti o n o f s i x m aj o r x a n t h o n e s ( if v e x a n t h o n e a g l y e o n s
a n d o n e x a n th o n e g l y e o s id e ) p
r e s e n t i n a T ib e t a n h e r b
,
aH l
e n ia e l l iP r i
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.
M
e th o d s : T h e a n a l y s i s w a s a e h ie v e d o n a n
A l l t i m a C
l : e o l u m n ( 4
.
6 m m x 2 5 0 m m
,
5 卜m ) u s i n g a m o b i l e p h a s e o f a e e t o n i t r i l e 一 0
.
5% a e e t i e a e i d g
r a d i e n t e l u
-
ri o n i n a t o t a l ur n t im
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f 3 5
, n i n ( 0 m i
n , 2 0 : 8 0 ; 2 0 m i n
,
7 0 : 3 0 ; 3 0 m i n
,
8 0 : 2 0 ; 3 0
.
1 m in
,
2 0 : 8 0 ; 3 5 m i n
,
2 0 : 8 0 )
a n d a d i o d e a r a y d e te e t o r w a s s e t a l 2 5 2 n m
.
T h e A g i l e n t 1 10 0 L C / M SD rT a p s y s te m w a s e q u i p p e d w i th a n A PC I
s o u r e e u s i n g a P o s it i v e i o n i z a ti o n m o d e
.
R e s ul t
s : H M 一 l , H M 一 2 , H M 一 3 , H M 一 4 , H M 一 5 , a n d H M 一 2 一 10 w e r e
l i n e a
r o v e r t h e
r a n g e o f 0
.
0 5 一 5
.
0
,
0
.
0 5 一 5
.
0
,
0
.
0 5 一 5
.
0
,
0
.
0 5 一 1
.
0 0
,
0
.
0 5 一 5
.
0
,
0
.
0 5 一 2
.
0
,
0
.
0 5 一 2
.
0 林g
( r w a s 0
.
9 9 9 9
,
0
.
9 9 9 9
,
0
.
9 9 9 7
,
0
.
9 9 9 9
,
0
.
9 9 9 9
,
0
.
9 9 9 2
, r e s p e e t i v e ly )
.
T h e a v e r a g e r e e o v e r ie s (
; z = 9 ) w
e er
9 5
.
2 0%
,
9 9
.
8 0%
,
9 7
.
3 7 % fo
r r h
r e e m aj o
r x a n th o n e s
,
H M 一 l , H M 一 2 , a n d H M 一 3 , r e s p e e ti v e l y
.
C o n c l u s i o n :
T h i s m e t h o d 15 s i m P l e
, s e n s i t i v e
, r e li a b l e a ,一d er p r o d u e i b l e
.
I t e a n b e a p p li e d t o s t u d y t h e q u a l i t y e o n t or l o f aH l
e n i a
e l l iP t i e a
·
K e y w o r d s
: T i b
e ta n h
e r
b ; aH l
e n i a e l l动ti e a : x a n th o n e s ; H P LC 一 D A D 一 M S
国家自然利学基金项 目 ( N ` , . 2 0 3 7 2 0 84 )
第 作者 T e l : ( 0 10 ) 6 3 16 5 2 3 8 ; F a x : ( 0 10 ) 6 30 17 7 5 7 ; E 一 , 1 1 a i l : w a n群 a n @ i n l m . a C . 《 、 ; 、
DOI : 10. 16155 /j . 0254 -1793. 2008. 03. 003
药物分析杂志 C hi n J P ha rm A na l 20 0 8, 28 ( 3 )
汕酮 ( x an t h ()n es )是一类存在于天然产物中的多
酚经基化合物 ,被报道具有较广泛的生物学和药理学
活性 } ’ , , ) 。 龙胆科花锚属植物椭叶花锚 (aH le 瓦。 。 1勿-
ict a D
.
oD )n 是一常用藏药 ,在当地用来治疗肝炎和胆
囊炎 ,也作为复方 “ 乙肝健片 ” 的君药 , 收载于 19 9 7
年版中华人民共和国卫生部部颁标准 。
花锚药材中主要汕酮衍生物 ,包括 l 一 经基 一 2 ,
3
,
5 一 三甲氧基 一 汕酮 ( H M 一 1 ) , l 一 经基 一 2 , 3 , 4 , 7
一 四甲氧基 一 glI 酮 ( H M 一 2 ) , 1 一 经基 一 2 , 3 , 4 , 5 -
四甲氧基 一 川l一酮 ( H M 一 3 ) , l , 7 一 二经基 一 2 , 3 , 4 ,
5 一 四甲氧基 一 汕酮 ( H M 一 4 ) , 1 , 5 一 二轻基 一 2 , 3
一 二 甲氧基 一汕酮 ( H M 一 5) 和 1 一 o 一 [月一 D 一 木
糖 一 ( 1 一 6) 一召一 D 一 葡糖」一 2 , 3 , 5 一 不甲氧基
一汕酮 ( H M 一 2 二 1 0 ) 曾被报道有一定的抗氧化活
性 L’ l 。 我们最近的研究结果首 次发现 5 个汕酮昔
元引起了大鼠冠状动脉血管 的舒张 , 其 E C S。值在
( 1
.
4 土 0
.
1 ) 林m o l · I J 一 ’ ( H M 一 l ) 至IJ ( 6 . 6 士 1 . 4 )
卜m ol · L 一 ’ (H M
一 2 )范围 〔4 { ,结果证实藏药花锚具
有心血管药理活性 ,汕酮是其中的血管舒张活性成
分 ,但汕酮不同衍生物结构的差异会导致其活性的
强弱 。
研究进一步证实了花锚中 H M 一 1 和 H M 一 5 是
其中活性较强 的成分 , 而 H M 一 5 同时 一也是 H M 一 1
在大鼠体外和体内主要的代谢产物 L’ , 6 一。 花锚中分
布的含量较高的汕酮及其较强的血管舒张活性 , 提
示 了尽管不同的汕酮调节机理可能有差别 , 但是汕
酮类成分是该藏药具有心血管活性的物质基础 。 本
论文采用 H PL C 一 D A D 一 M S 法首次对花锚药材中 6
种主要汕酮的含量进行测定 ,结果表明方法可 以使
H M 一 l 、 H M 一 2 、 H M 一 3 、 H M 一 4 、 H M 一 5 , 和 H M 一 2
一 or 得到较好分离 (结构见 图 1 ) , 并且 简便准确 、
灵敏度高 、重复性好 ,可用于藏药花锚药材的质量研
究和质量控制 。
R Z R 3 R 4 R , R 。
HOCo
H阳CIJH
0
H1:OC()HC00 H1
一 经基 一 2 , 3 , 5 一 三甲氧基 一 lFJ 酉同( H M 一 1)
〔一 h y山” x y l 一 2 , 3 , 5 一 t n m o rh o x y x a . l tl l o n e ( HM 一 l ) 〕
1 一 经基 一 2 , 3 , 4 , 7 一 四甲氧基 一砒酮 ( I M 一 2 )
[ l
一 h y`l ro x y l 一 2 , 3 , 4 , 7 一 t o l r a n l o t }l o x界a n ht 。,n e ( H M 一 2 ) ]
l 一 经基 一 2 , 3 , 4 , 5 一 四甲氧基 一汕酮 ( H M 一 3 )
[ ]
一 11y d ro x y 一 2 , 3 , 4 , 5 一 Io r ar : , l e 一h ; , x林 a n t l l (, , l e ( I I M 一 3 ) ]
1
,
7 一 二羚基 一 2 , 3 ,4 , 5 一 四甲氧基 一 汕酮 ( HM 一 4)
「1 , 7 一 `l如dr o x y 一 2 , 3 , 4 , 5 一 et tar m e t卜o x 抖 a n th o n e ( H M 一 4 ) 1
I
,
5 一 二拜基 一 2 , 3 一二 甲氧基 一 汕酮 ( HM 一 5)
「l , 5 一 ` { 1卜, y击 o x y 一 2 , 3 一 d i ,1 1 o t ll o x y x a r、 t卜o n。、 ( IJ M 一 5 ) 〕
l 一 () 一 厂刀一 D 一 木糖 一 ( l 一 6 ) 一刀一 刀 一 葡糖 〕一 2 3 5 一 三甲
氧基 一 l01J 酮 ( 日M 一 2 一 10 )
「l 一 o 一 「刀 一 D 一 x , 10一y ar n。,、 , 一 (一 6 ) 一 口一 D 一 g l u e o lo y ar n o -
, y l )
一 2 , 3 , 5 一 , ,` , : 1。、 于. , x 、 一 、 a n 一圣1 0。 。、 ( r l M 一 2 一 2 0 ) ]
O C H。
H OC H。
IJ
一 。 一 〔一 厂一 D 一 x外
( l
一 6 ) 一月一 D 一 g l u e
图 l 花锚中 6 个 nIJ]酮 圣IM 一 l 、 1IM 一 2 、 H M 一 3 、 H M 一 4 、 H M 一 5 、 HM 一 2 一 ] 0 的化学结构式
卜’ 19 I C}l e m i c a l s t r u e t u r e s o f s i x x a 了一 tl一〔) n e s i n H a le z乙i a e l l切艺i e a
1 仪器与试药
美 国 A g i l e n t 1 10 0 型 L C / D A D / M S D 高效液相
色谱系统 , A ilz e nt 自动进样器 , 大气压化学 电离离
子源 , A isl en t 色谱工作站 。 1 一 经基 一 2 , 3 , 5 一 只甲
氧基 一 汕酮 ( H M 一 1 ) , I 一 经基 一 2 , 3 , 4 , 7 一 四甲氧
基 一汕酮 ( H M 一 2) , 1 一 经基 一 2 , 3 , 4 , 5 一 四甲氧基
一 n山酮 ( H M 一 3 ) , l , 7 一 二羚基 一 2 , 3 , 4 , 5 一 四甲氧
基 一汕酮 ( H M 一 4) , 1 , 5 一 二轻基 一 2 , 3 一 二甲氧基
药物分析杂志 h Ci n J P h ao l A n al 200 8 , 2 8 ( 3 )
邵 11一酮 ( H M 一 5 )和 l 一 o 一 [刀一 D 一 木糖 一 ( l 一 6 )
一月一 D 一 葡糖 ] 一 2 , 3 , 5 一 三 甲氧基 一 汕酮 ( H M 一 2
一 10 ) 对照品 ( H P LC 纯度均大于 9 % ) 由中国医
学科学院药物所分离制备 , 通过波谱法确定其结构 。
花锚药材采自青海或购自青海 , 经中国医学科学院
药物所宋万志研究员 鉴定 为龙胆科花锚属椭叶花
锚 〕 乙睛 、 甲醇 、 乙醇 、 乙酸乙醋 、 冰醋酸 、 三氟乙 酸
为色谱纯 , 为 iS g m a 产品 。
2 色谱条件
色谱柱 : A l lt im a C ! 、 ( 4 . 6 m m x 2 5 0 m m , 5 林m ) ;
流动相 : 乙睛 一 0 . 5% 醋酸 (洲: )进 行梯度洗脱 ( O
一n i n , 2 0 : 8 0 : 2 0 m in
,
7 0 : 3 0 : 3 0 m i n
,
8 0 : 2 0 ; 3 0
.
1 m i n
,
2 0 : 8 0 ; 3 5 m i n
,
2 0 : 8 0 ) ;流速 : 0 . 8 m L · m i n 一 ’ ;检测
波长 : 2 52 n m ;离子 源 : A PCI , 扫描模式 : 正离子 ;柱
温 : 室温
3 溶液制备
3
.
1 对照品储备液 精密称定对照品 H M 一 1 、 H M
一 2 、 H M 一 3 、 H M 一 4 、 H M 一 5 、 H M 一 2 一 10 适量 , 分
别置于一定容积的量瓶中 , 以甲醇溶解并定容 , 即得
1 m g
·
m L
一 ’ 的储备液 。
3
.
2 供试品溶液 取花锚药材粉末 (过 40 目筛 ) 0 . 5
g
,精密称定 ,加 甲醇 2 5 , n L 超声 ( 5 0 O W , 4 0 kH z ) ,提
取 l h , 3 8 0 0 r · m i n 一 ’离心 10 n l i n ,倾出上清液 。 药渣
继续用 2 5 m L 甲醇超声 ( 50 O W , 4 0 k H z )提取 2 次 ,每
次 30 m in ,离心倾出上清液 ,合并上清液 , 于 50 ℃ 减
压回收溶剂至近干 , 以甲醇溶解转移并定容至 25 m L
量瓶中 , 以 0 . 45 林m 微孔滤膜滤过即得 。
4 方法学考察
4
.
1 色谱条件的优化 经过 比较多种流动相 系
统 ,包括甲醇 一 水 、 乙睛 一 水 、 甲醇 一 0 . 5% 醋酸 、 乙
睛 一 0 . 5% 醋酸 、 甲醇 一 0 . 1% T FA , 其中 乙 睛 -
0
.
5 % 醋酸梯度洗脱 , 能将 6 个汕酮类成分较好分
离 。 经过全波长扫描 , 6 个汕酮在 2 52 n m 均有较强
的吸收 ,故选择 2 52 n m 作为检测波长同时测定 6 种
成分 。 经过大气压化学电离 、正离子扫描 ,得到 6 个
汕酮成分 H M 一 ] 、 H M 一 2 、 H M 一 3 、 H M 一 4 、 H M 一 5
的 [ M + H」+ 峰分别为 3 0 3 . 1 , 3 3 3 . 1 , 3 3 3 . 1 , 3 4 9 . 0 ,
2 5 9
.
0
,
H M 一 2 一 10 的 [ M + H 一 x y l 一 g l u e 」十 为
3 0 3
.
1
。
4
.
2 线性关系考察 准确量取 6 种对照品储备液
(l m g
·
m L
一 l
)适量 , 分别置于一定容积的量瓶中配
成梯度溶液 , H M 一 1 、 HM 一 2 、 H M 一 4 的溶液浓度分别
为 0 . 0 5 , 0 . 0 1 , 0 . 0 5 , 0 . 1 , 0 . 5 m g · m x J 一 ` , H M 一 5 和
H M 一 2 一 10 的溶液浓 度分别为 0 . 0 5 , 0 . 01 , 0 . 05 ,
0
.
1
,
0
.
2 m g
·
m L
一 ’ ,
H M 一 3 的 解液 浓 度 分别 为
0
.
0 5
,
0
.
0 1
,
0
.
0 5
,
0
.
1
,
0
.
5
,
1
.
0 m g
·
m L
一 ` 。 分别精密
吸取此溶液 10 协L 注人高效液相色 一潜仪进行测定 , 以
峰面积值 ( )Y 与进样量 ( 林g , X )作图得标准曲线 ,数据
经回归处理 ,得 H M 一 l 、 H M 一 2 、 H M 一 3 、 H M 一 4 、 H M
一 5 ,和 HM 一 2 一 or 的回归方程分别为 :
Y = 5 3
.
8 2 7 4 + 3 60 2
.
25 0 lX
厂 = 0
.
9 9 9 9
Y = 一 7 . 6 3 4 6 + 2 14 2
.
5 9 7 4 X 厂 = 0
.
9 9 9 9
Y = 16
.
2 6 07
+ 2 5 8 5
.
6 1 18X r = 0
.
9 99 9
Y = 一 17
.
0 8 0 9 + 16 89
.
g l 04 X
r = 0
.
9 9 9 7
Y = 18
.
1 10 1 + 5 29 6
.
87 66X
r = 0
.
9 9 9 9
Y = 13
.
17 5 9 + 17 15
.
89 6 l X r = 0
.
9 9 9 2
6 个汕酮的线性范 围分别为 0 . 05 一 5 . 0 , 0 . 05 一 5 . 0 ,
0
.
05 一 5
.
0
,
0
.
05 一 10
.
0
,
0
.
0 5 一 5
.
0
,
0
.
0 5 一 2
.
0
,
0
.
0 5 一
2
.
0 卜g 。
4
.
3 稳定性考察 按 ,’3 . 2” 项下方法制备供试品溶
液 ,分别在 0 , 4 , 8 , 12 , 16 h 测定 ,每次进样 10 林L 。 测
定 H M 一 l 、 H M 一 2 、 H M 一 3 、 H M 一 4 、 H M 一 5 ,和 H M -
2 一 10 的峰面积 , 计算 R SD 值分别为 1 . 1% , 1 . 2% ,
1
.
1%
,
0
.
9%
,
1
.
3%
,
1
.
17 %
, 表明供试品溶液中 H M
一 l 、 H M 一 2 、 H M 一 3 、 H M 一 4 、 H M 一 5 和 H M 一 2 一 10
在 16 h 内基本稳定 。
4
.
4 精密度试验 取按 ,’3 . 2” 项下方法制备的供试
品溶液 ,连续进样 5 次 ,每次 or 卜 L ,测定 HM 一 1 、 H M
一 2 、 H M 一 3 、 HM 一 4 、 H M 一 5 和 H M 一 2 一 10 的峰面
积 ,计算 R SD 值分别为 1 . 1% , 0 . 2% , 0 . 5% , 0 . 4% ,
1
.
7%
,
0
.
3%
。 同时 ,按 “ 4 . 1” 项下制备的 0 . 0 1 , 0 . 0 5 ,
0
.
1 m g
·
m L
一 ’ 对照品溶液同法测定 H M 一 1 、 H M 一 2 、
H M 一 3 、 H M 一 4 、 H M 一 5 和 H M 一 2 一 10 的精密度 , 计
算 R S D 值分别为 0 . 3% , 3 . 0% , 0 . 2% ; 0 . 3% , 0 . 1% ,
0
.
4% : 1
.
5%
,
0
.
1%
,
0
.
2% ; 0
.
5%
,
0
.
5%
,
0
.
8% :
3
.
0%
,
3
.
0%
,
2
.
6% ; 0
.
3%
,
0
.
2%
,
0
.
5%
。 表 明精密
度 良好 ,符合含量测定要求 。
4
.
5 重复性试验 按 ,’3 . 2” 项方法制备 5份供试品
溶液 ,分别进样 10 协L ,测定花锚汕酮 H M 一 1 、 H M -
2
、
H M 一 3 、 H M 一 4 、 H M 一 5 和 H M 一 2 一 10 的峰面积 ,
计算 含 量 ( m g · g 一 ’ ) 和 R s D 值 分 别 为 6 . 1
( 1
.
1% )
,
2
.
6 9 ( 1
.
2% )
,
8
.
1 1 ( 1
.
1% )
,
0
.
6 3 ( 1
.
1% )
,
0
.
20 ( 2
.
4% )
,
9
.
39 ( 2
.
1% )
。 表明此方法测定花锚汕
酮 H M 一 l 、 H M 一 2 、 H M 一 3 、 H M 一 4 、 H M 一 5 和 H M 一 2
一 10 的含量 ,重复性良好 。
4
.
6 加样 回收率 取花锚药材 9 份 , 每份 0 . 5 9 ,
精密称定 , 平均分为 3 组 , 每组分别精密加人 1 . 0
m g
·
n 1L
一 ’ H M 一 l 对照品溶液 1 . 5 8 , 3 . 7 5 , 7 . 5 0 m L ;
药物分析杂志 C h in J p h a r m A n a l20 05 , 2 5 ( 3 )
1
.
0 m g
·
m L
一 ’ H M 一 2 对照 品溶液 0 . 75 , 1 . 50 , 3 . 0 4 . 7 最低检测限和定量 限 定义信噪 比 ( s/ N )为
m L ;l
.
0 m g
·
m L
一 ’ H M 一 3 对照品溶液 1 . 8 8 , 3 . 75 , :3 1 时的浓度为最低检测 限 , s/ N 为 10 : 1 时的浓度
7
.
5 0 : n L
。 按 “ 3 . 2 ” 项下 的方法制备成低 、 中 、 高 3 为定量限 。 花锚 01 酮 H M 一 卜 H M 一 2 、 H M 一 3 、 H M -
种浓度的供试液 。 分别取 _ _仁述溶液 10 林L 注人高效 4 、 H M 一 5 和 H M 一 2 一 10 的最低检测限分别为 0 . 5 ,
液相色谱仪 ,计算回收率 。 0 . 5 , 0 . 5 , 2 . 0 , 0 . 5 , 2 . o gn ;定量限分别为 1 . 7 , 1 . 7 ,
花锚主要吐一酮 H M 一 l 、 HM 一 2 、 H M 一 3 的平均 1 . 7 , 6 . 7 , 1 . 7 , 6 . 7 n g 。
回收率 ( ,: = 9) 分别为 95 . 20 % , 9 . 80 % , 97 . 37 % 。 4 . 8 样品测定 按 “ 3 . 2 ” 项下方法制备供试品溶
低浓度时花锚 glI 酮 H M 一 1 、 H M 一 2 、 HM 一 3 回收率 液 ,每一溶液进样 10 林 L ( n = 3 ) ,测得样品中花锚汕
( n = 3 )分别为 9 6 . 0% , 9 4 . 7% , 9 1 . 7% ; R S D 值分别 酮 H M 一 l 、 H M 一 2 、 H M 一 3 、 H M 一 4 、 H M 一 5 和 HM
为 1 . 3 % , 1 . 6% , 2 . 4% 。 中浓度时花锚汕酮 H M - 一 2 一 10 的峰面积 ,依据回归方程 ,计算得 到各样品
l
、
H M 一 2 、 H M 一 3 回收率 ( n = 3 )分别为 9 5 . 3% , 所含 H M 一 l 、 H M 一 2 、 H M 一 3 、 H M 一 4 、 H M 一 5 和
10 3
.
0%
,
9 6
.
7% ; R SD 值 分 别 为 0 . 4% , 0 . 2% , H M 一 2 一 10 的含量 。 6 种成分色谱峰经 A PCI / M S
0
.
5%
。 高浓度时花锚 01 酮 H M 一 1 、 H M 一 2 、 HM 一 3 鉴定其准分子离子峰 , 与对照品完全一致 。 结果见
回收率 ( ,乙 = 3 ) 分别为 9 4 . 3% , 10 1 . 7% , 10 3 . 7% ; 表 l ,色谱图见图 2 。
R SD 值分别为 2 . 6% , 0 . 8 4 % , 3 . 0% 。
表 1 花锚样品 中 6 个灿酮的含量测定 ( m g · g 一 ’ )
T a b 1 T h e e o n t e n st o f s i
x x a n t h o n e s o f I l d le n ia e ilP 流a
样品号 ( 、 a m 一, 10 N .〕 . ) 产地或购买地点 ( s 硬 , , l r. 。 ) H M 一 1 HM 一 2 H M 一 3 H M 一 4 卜IM 一 5 HM 一 2 一 1 0一青海大坂 山 ( [ ) a l, a , I M。 ,u ,I La i n , Q i: lg h a i )青海西宁 ( x 】n i n 杯 , Q i n g h a )青海西泞’ ( x l: l i n g , Q l。 。h a i )青海西宁 ( xj o il g . ,i) gl ha i)青海西宁 ( x , n 】。 g , Q i n g h a i ) :. ;: :. {:注 ( n o 一e ) : l :采集花锚药材 ( s a m 下,l e s e o ll e o to d ) ; 2 一 5 : 购买花锚药材 ( s a m p l e s p u r e h a s e d fr om m a kr e l ) 。
l ]l
{ …)_
一
}
. , .撇 。 … 。 , 、 {回濒一一一
0 5 1 0 1
’
5 2’ 0 2 5 30 t /m s n
图 2 对照占砂t ( A )和 1号样品 ( B ) H PI JC 一 D AD色谱图
F 19 2 H P I
』
C 一 I) A D 〔斗 1 (r ) m a l o g r a n , 5 o f er 介 r e n e e s u b s t a n e e s ( A ) a , l d
S a , , , p l e l ( B )
1
.
HM 一 1 2
.
H M 一 2 3
.
HM 一 3 4
.
HM 一 4 5
.
HM 一 5 6
.
H M 一 2
5 讨论
5
.
1 作为藏药花锚提取分离得到 的系列衍生物 ,
H M 一 1 、 H M 一 2 、 H M 一 3 、 H M 一 4 、 H M 一 5 、 H M 一 2 一
10 均具有相 同的汕酮骨架 , 所以在紫外 区有较强 的
吸收 ,故选择二极管阵列检测器同时检测 6 种成分 ,
A PC I/ M S 用以鉴定每个 色谱峰的相对分子质量信
息 。 这些汕酮只有母核上 的取代基发生改变 ,极性
差别较小 , 特别是 H M 一 2 和 H M 一 3 互为同分异构
体 ,所以采用恒定 比例流动相洗脱不能使 6 个组分
得到分离 , 因此采用梯度洗脱 , 并对流动相进行优
化 ,从而得到良好分离 。
5
.
2 曾比较了不同的提取方法 ,包括冷浸提取 、 超
生提取和加热回流提取 , 以及不同的提取时间 ,结果
表明冷浸的提取效果最差 ,加热回流提取使得 H M
一 2 一 10 峰面积明显小于超生提取 , 提示汕酮昔可
能对热不稳定 ,所以提取方法选择超生提取 。 同时 ,
也考察了不 同的提取时间和提取次数 ,结果表明 ,超
生提取 l h 后 ,残渣再用甲醇分别提取 2 次 ,每次 30
m in
,可将汕酮提取完全 。 提取溶剂比较了 50 % 甲
醇 、 甲醇和乙醇 , 由于汕酮昔元为脂溶性成分 , 50 %
甲醇作为溶剂溶解度较差 , 甲醇比乙醇溶解度稍好 ,
鉴于甲醇作为定容溶剂并经微孔滤膜滤过时操作方
便 ,故选择了甲醇作为提取溶剂 。
5
.
3 对采集和市售 2 种类型 的花锚药材进行 了
含量测定 , 结果表 明 , 采集样品中的灿酮昔 ( H M 一 2
一 1 0) 明显高于市售样 品 , 虽然 不同样品 中花锚汕
酮 的含量差别较大 , 但是所有药材 中均 以 H M 一 1
药物分析杂志 C h in J P h a l二 1 A n a l 2 0 08 , 2 8 ( 3 ) 一 34 9 一
和 H M 一 3 含量最高 , 而 H M 一 4 和 H M 一 5 含量最
低 。
5
.
4 由于 H M 一 l 、 H M 一 2 、 H M 一 3 、 H M 一 4 、 H M -
5
、
H M 一 2 一 10 基本骨架相 同 ,结构类似 , 所以在加
样 回收率试验中选择了 6 个汕酮中含量较高的 H M
一 l 、 H M 一 2 、 H M 一 3 ,实验结果证实了加样回收率符
合要求 。
5
.
5 虽然 H M 一 5 在花锚药材 中的含量不高 , 但我
们最近的研究证明 H M 一 5 是 H M 一 1 在大鼠体外和
体内的主要代谢产物 ,而 H M 一 1 和其代谢产物 H M
一 5 都具有舒张大鼠心脏冠状动脉血管 的活性 〔’ , 6 ! ,
提示了在花锚植物体内存在 的 H M 一 5 可能是植物
自身的代谢产物或降解产物 。
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L诉 cS i , 20 0 8 , 8 2 ( l 一 2 ) : 9 1
(本文 于 2 0 08 年 l 月 25 日修改回 )
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