全 文 :·!·中药新药与临床药理 !#年 $月第 $% 卷第 $期
#$ % &$’(法测定肾茶药材中迷迭香酸的含量
张继华,王跃生,柏 健,李霞兰,何明珍,杨世林 (中药固体制剂制造技术国家工程研究中心,南昌 )))*)
摘要:目的 建立高效液相色谱法测定肾茶药材中迷迭香酸含量的方法。方法 采用反相高效液相色谱 (#$ %
&$’()法测定肾茶药材中迷迭香酸的含量,色谱柱:&+,-./01 234 % (56柱 (78) 99 : !; * 99,8 !9);甲醇 % ); 5
<磷酸水溶液 (!) = *))为流动相;流速为 5; ) 9’ > 90?;紫外检测波长为 76) ?9;柱温为 78 @。结果 该法可测
定肾茶药材中迷迭香酸的含量,迷迭香酸在 ); 5)A * B ); 86 ) !C的范围内与峰面积呈良好线性关系,平均回收率为
D6; 8! < E #43 F 5; 78 < G ! F * H。结论 该方法简便、准确,可作为肾茶药材中迷迭香酸的含量测定方法。
关键词:肾茶;迷迭香酸;高效液相色谱法;含量测定
中图分类号:#76!; 5 文献标识码:I 文章编号:5)) % DA6 (7))*))5 % ))! % )7
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YN- [Z1O9? Y-9,-.PYO.- aP/ PY 78 @ ; +,=>#, ‘N- [Z?Y-?Y Z] .Z/9P.0?0[ P[0^ 0? #$%&’$!’%(!)*+, ,-./()+, [ZO1^ _- ^-Y-.90?-^ _+ &$’( ; ‘N-.- 0/ P CZZ^ 10?-P.0Y+ _-Ya--? YN- P_/Z.,Y0Z? ,-Pe P.-P P?^ YN- P9ZO?Y .P?C- Z] ); 5)A * B ); 86 )
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肾茶为唇形科肾茶属植物猫须草 #$%&’$!’%(!0
)*+, ,-./()+, G ‘NO?_ H (; R; QO的全草,在我国主产于
广东、广西、云南等地,人们有长期饮用的历史。
肾茶具有抗菌、消炎、抗肿瘤及利尿等作用 f 5 g,作为
一种传统的珍贵药用植物,在临床上主要用于治疗
急慢性肾炎、膀胱炎、尿路结石、咽炎及风湿性关
节炎等疾病。其化学成分主要有黄酮类、甾体类、
三萜类、挥发油、油脂等 f 7 g。有研究报道对不同产地
猫须草中熊果酸含量进行了测定与对比 f 5 g。为更好地
控制肾茶药材质量,本文采用 &$’(法对肾茶药材中
的迷迭香酸含量进行测定。
A 仪器与试药
IC0-?Y55)) 型液相色谱仪,cQ3 检测器,含在
线真空脱气机、四元梯度泵、柱温箱;色谱数据的采
集与处理由 IC01-?Y 化学工作站完成;超声波清洗
仪。甲醇为色谱纯;磷酸为分析纯;水为超纯水。迷
迭香酸对照品自制,经面积归一化法检测含量为
D6; 8<;肾茶药材采自云南景洪,经中科院西双版纳
热带植物园陶国达教授鉴定为肾茶 #$%&’$!’%(!)*+,
,-./()+, G ‘NO?_ H(; R; QO。
B 方法与结果
BC A 色谱条件与系统适用性试验 &+,-./01 234 78
收稿日期:7))8 % 55 % 5A
作者简介:张继华 (5DAD %),女,硕士研究生,从事天然产物化学研究及中药质量标准研究。通讯作者:杨世林,教授,博士生导师。‘-1:
()AD5)A55D*5;V9P01:-1Z?CNOPh 57*; [Z9。
·质量分析研究·
·!!· #$%&’&()$* +,&)-.- /#01 2-.-$#3, 4 +*&)&3$* 5,$#6$3(*(178 9::; <$)0$#78 =(*> ?@ A(> ?
样品含量 B 61
9> 9?C
9> ?C;
9> DD9
9> 9!!
9> ?C;
9> ??9
加入量 B 61
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测得量 B 61
!> 9?D
!> :E!
!> D:?
!> 9:!
!> ??E
!> ??C
回收率 B F
EE> GC
E;> GC
EG> !:
E@> EC
EG> ?:
?::> ?:
平均回收率 B F
EG> C!
2H/ B F
?> 9C
!6 +?G柱 (9C: 66 I !> ; 66,C !6);甲醇 J :> ? F
磷酸水 (!: K ;:)为流动相;检测波长为 9G: )6;柱
温为 9C L;流速为 ?> : 6M·6&) J ?。理论塔板数按迷
迭香酸峰计算不低于 D:::。
! ! 供试品溶液的制备 精密称取肾茶药材粗粉约
?> : 1,置索氏提取器中,加 C: 6M甲醇,浸泡 :> C ,,
水浴 E: L回流提取 D ,至无色,滤过,置 C: 6M量瓶
中,加甲醇定容至刻度,摇匀,用 :> !C !6微孔滤膜
过滤,作为供试品溶液。
! # 标准曲线的制备 精密称取迷迭香酸对照品
C> DG 61,置 9C 6M量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻
度。精密量取 C 6M于 ?: 6M量瓶中,加甲醇稀释至
刻度,摇匀,即得对照品溶液。分别精密进样 ?,
9,D,!,C!M,以峰面积为纵坐标 (!),进样量为
横坐标 ()进行线性回归,得回归方程为: ! #
? C:G> 9 J D> 9!9 D, $ N :> EEE @,结果表明对照品
在 :> ?:@ ; O :> CDG : !1 范围内与峰面积呈良好线性
关系。
! $ 精密度试验 精密吸取同一对照品溶液 C !M,
重复进样 ; 次,结果平均峰面积为 G?G> 99,2H/ N
:> ;? F (% N ;)。; 次试验测定的相对标准偏差低
于 D F,表明仪器具有良好的精密度。
! % 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液,依上述
色谱条件,分别于 :,9,!,G,?9,9! , 各进样 C
!M,迷迭香酸平均峰面积为 @??> EC,2H/ N 9> ;9 F
P % N ; Q,表明供试品溶液在 9! ,内稳定。
! & 重复性试验 精密称取同一批药材 C份,按供试
品溶液的制备方法制备,照上述色谱条件各进样 C
!M测定,结果迷迭香酸平均峰面积为 ;@!> DD,平均
含量为 :> !! F (% N C),2H/ N ?> C F。
! ’ 加样回收率试验 取 ;份已知含量的肾茶药材各
约 :> C 1,精密称定,分别加入一定量的迷迭香酸对
照品,按照供试品溶液制备项下方法制备并测定,计
算,结果平均回收率为 EG> C! F,2H/ N ?> 9C F。
结果见表 ?。
表 ! 迷迭香酸加样回收率试验结果
! ( 样品测定 按上述测定方法 8 称取 ; 份药材各
? 1,依法制备供试品溶液,分别进样 C !M,测定
吸收峰面积,经外标峰面积法测定云南西双版纳地
区肾茶中迷迭香酸含量,结果平均含量为 :> !! F
(% N ;)。对照品及供试品色谱图见图 ?。
图 ! 肾茶 R5M+图谱
# 讨论
提取方法和提取时间不同对肾茶中迷迭香酸的
提取效果也不一样,实验比较了甲醇超声、甲醇回
流,甲醇索氏提取 D 种方法,结果表明甲醇索氏回
流提取率明显优于其他 9 种提取方法。考察了回流
9,D,! , 时的提取效果,结果表明提取 9 , 和提
取 D ,! , 的提取效果差异较明显,而提取 D , 和
提取 ! , 的提取效果无显著性差异,故提取时间确
定为 D ,。对流动相的选择,实验比较了甲醇 J
水、甲醇 J磷酸水溶液、乙腈 J磷酸水溶液不同比
例的洗脱效果,结果表明甲醇 J :> ? F磷酸水溶液
的等度洗脱分离效果最好。
参考文献:
S ? T高增平,王宝华,江佩芬 > 不同产地猫须草化学成分预试及熊果
酸含量对比 S < T > 北京中医药大学学报,?EEE,99 (C):@G>
S 9 T钟纪育,邬宗实 > 肾茶的化学成分 S < T > 云南植物研究, ?EG!,;
PD Q:D!!>
(编辑:邹元平)