全 文 ：2016年 8月
第 38卷 第 4期
农 垦 医 学
Journal of Nongken Medicine
Aug.2016
Vol.38 No.4
RP-HPLC法测定香青兰有效部位中7种成分的含量
李雪梅 孙维华 崔源源
（新疆石河子市人民医院，新疆石河子，832000）
【摘要】目的：建立RP-HPLC法测定香青兰有效部位中田蓟苷、金合欢素、木犀草素-7-O-β 葡萄糖醛酸苷
等7种成分含量的方法。方法：Sunfire-C18(250 mm×4.6 mm，5μm) 色谱柱；以乙腈 (A)-0.2%磷酸水溶液（B）为流
动相，梯度洗脱 (0～5min，16%A；5～45min，16%→28%A；45～65min，28%→ 0%A)；流速1.0mL·min-1；柱温
35℃；检测波长330 nm。结果：木犀草素-7-O-β 葡萄糖醛酸苷、芹菜素-7-O-β 葡萄糖醛酸苷、迷迭香酸、香
叶木素-7-O-β 葡萄糖醛酸苷、田蓟苷、金合欢素-7-O-β 葡萄糖醛酸苷和金合欢素分离均良好，分别在1.20～
60.00μg·mL-1(r=0.9999)、0.48～24.00μg·mL-1(r=0.9997)、0.88～44.00μg·mL-1(r=0.9999)、0.88～44.00μg·mL-1
(r=0.9999)、3.84～192.00μg·mL-1(r=0.9999)、0.72～36.00μg·mL-1(r=0.9999)和0.72～36.00μg·mL-1(r=0.9997)范围
内呈良好线性关系；平均回收率分别为99.29%，97.04%，99.56%，98.29%，101.18%，99.34%和95.50%，RSD值分别
为0.52%，1.13% ，0.55%，0.42%，0.58%，0.97%和0.60%。结论：该色谱方法灵敏、稳定、简单、准确，可用于香青兰有
效部位及制剂的质量控制。
【关键词】香青兰提取物；迷迭香酸；黄酮类化合物；反相高效液相色谱法；含量测定
中图分类号：R927.2 文献标识码：A
Simultaneous determination of Seven Components in the effective part of
Dracocephalum Moldavica L.by RP- HPLC
LI Xue-mei，SUN Wei-hua，CUI Yuan-yuan
（The Peoples Hospital of Xinjiang Shihezi，Xinjiang Shihezi，832000）
【Abstract】Objective: To establish a RP-HPLC method for simultaneous determination of tilianin，Acacetin，
Luteolin-7-O-β-glucuronide et.chemical composition in the effective part ofDraccephalumMoldavcaL.Methods：
The column wasSunfire-C18(250mm×4.6mm，5μm)，mobile phase was acetonitrile(A)-0.2%phosphoric acid solution
(B) with linear gradient elution (0～5min，16%A；5～45min，16%→28%A；45～65min，28%→80%A)；flow rate was 1.05
mL·min-1；column temperature was 35℃ and detection wavelength was 330 nm.Results：This mathod had good
linear relationship in range of 1.20～60.00μg·mL-1 (r=0.9999) for Luteolin-7-O-β-glucuronide，0.48～24.00μg·
mL-1 (r=0.9997) for Apigenin-7-O-β-glucuronide，0.88～44.00μg·mL-1 (r=0.9999) for Rosmarinic acid，0.88～
44.00μg·mL-1 (r=0.9999) for Diosmetin-7-O-β-glucuronide，3.84～192.00μg·mL-1 (r=0.9999) for Tilianin，0.72～
36.00μg·mL-1 (r=0.9999) for Acacetin-7-O-β-glucuronide and 0.72～36.00μg·mL-1 (r=0.9997) for Acacetin.
Average recoveries of Luteolin-7-O-β-gluc ronide，Apigenin-7-O-β-glucuronide，R smarinic acid，D osmetin-7-O-
β-glucuronide，Tilianin，Acacetin-7-O-β-glucuronide and Acacetin were 99.29%，97.04%，99.56%，98.29%，101 18 ,
99.34% and 95.50%，respectively.RSD were 0.52%，1.13%，0.55%，0.42%，0.58%，0.97%and 0.60%，respectively.
Conclusion：The RP-HPLC method was stable，simple and accurate.It can be used to control the quality of
preparation and the effective part of.DracocephalumMoldavcaL.
【Key words】The effective part ofDracocphalumMoldavicaL.；Flavonoids；Rosmarinic acid；Content determination；
RP-HPLC
香青兰[1](Dracocephalum MoldavicaL.)又名巴
迪然吉布亚，为唇形科植物香青兰的干燥地上部
分，具有补益心脑、活血化瘀、通路开窍的功能[2]。在
维吾尔医学和民间用于治疗冠心病、高血压、气管
炎、寒性神经性头疼、寒性感冒等疾患[3]。主要分布
于中国西北和华北地区，在新疆南疆和北疆资源尤
为丰富[4]。
研究表明，香青兰药材中主要含有黄酮类、挥
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发油、苯丙素类、三萜类、甾体类、多糖、环烯醚萜类
等化学成分[5]，其中黄酮类成分是香青兰的主要活
性成分[6-7]，具有扩张冠脉、降低冠脉血管阻力的功
能[8]；香青兰中含有多种黄酮类化合物，如田蓟苷、
刺槐苷、芹菜苷、木犀草苷和藿香苷等。香青兰中苯
丙素类化合物主要包括苯丙酸、香豆素与木脂素类
化合物，其中以迷迭香酸(248mg/g)含量最高，且具有
抗血栓、抗血小板聚集、抗炎、抗氧化、抗菌、抗病毒
等功能[9]。因此，这些成分在香青兰研究中具有很大
的价值。
目前，香青兰有效部位的含量测定方法有UV
法、RP-HPLC法和GC-MS法，其中RP-HPLC法准
确可靠，但仅限于几种常见的化合物，如田蓟苷、木
犀草素、异鼠李素、槲皮素等的测定[10-12]，而对于其
他含量较高的黄酮类成分的研究尚未见报道。本实
验阐明香青兰提取物中含量较高的黄酮类和苯丙
素类化合物的含量，建立了RP-HPLC法同时测定
香青兰中木犀草素-7-O-β 葡萄糖醛酸苷、香叶木
素-7-O-β 葡萄糖醛酸苷、芹菜素-7-O-β 葡
萄糖醛酸苷、田蓟苷、金合欢素-7-O-β 葡萄糖醛
酸苷、金合欢素（黄酮类）和迷迭香酸（苯丙素类）含
量的方法。该方法简单易行，结果准确可靠，为香青
兰提取物和制剂的质量控制提供依据。
1 材料与方法
1.1 仪器
Alliance 2695 型高效液相色谱仪（四元梯度
泵、智能柱温箱、自动进样器、PDA检测器，美国
Waters公司）；AE200型电子分析天平（梅特勒-托
利多上海仪器有限公司）。FKS-500D超声波清洗器
（宁波科生仪器厂）；FBZ1002型超纯水机（青岛富勒
姆科技有限公司）；XT-500A高速多功能摇摆粉碎
机（浙江省永康市红太阳机电有限公司）。
1.2 材料
木犀草素-7-O-β 葡萄糖醛酸（Lut-7-O-β ，
批号MUST-20140113），芹菜素-7-O-β-葡萄糖
醛酸苷（Api-7-O-β G，批号 MUST-20140519）和
迷迭香酸（RA，批号 MUST-14111507）；香叶木素
-7-O-β 葡萄糖醛酸苷（Dio-7-O-β G，纯度
97.3%），田蓟苷（Til，纯度 98.0%）、金合欢素
-7-O-β 葡萄糖醛酸苷（Aca-7-O-β G，纯度
97.4%）和金合欢素（Aca，纯度99.5%）均由本课题组
富集纯化制得，经C、H谱等四大谱解析确定分子结
构，并通过反相高效液相色谱法测定，归一化法计
算纯度。香青兰提取物为香青兰药材粉碎，经75%
乙醇渗漉提取减压干燥所得干膏（实验室自制，批
号20140816、20140902、20140928）。
水为双蒸馏水，乙腈（Fisher，色谱纯），乙醇等试
剂均是分析纯。
1.3 方法
1.3.1 溶液的制备
1.3.1.1 供试品溶液的制备 精密称取香青兰提取
物粉末20.0mg于10mL容量瓶中，加70%乙醇溶液
适量，超声处理40min（频率40KHz、功率500W），使
其完全溶解，再加入70%乙醇溶液定容至刻度线，
混匀过滤，取续滤液作为供试品溶液。
1.3.1.2 对照品混合溶液的制备 精密称取木犀草
素-7-O-葡萄糖醛酸苷、芹菜素-7-O-葡萄糖醛
酸苷、迷迭香酸、香叶木素-7-O-葡萄糖醛酸苷、田
蓟苷、金合欢素-7-O-葡萄糖醛酸苷和金合欢素的
对照品适量于容量瓶中，加入25mL的70%乙醇溶
液，制成每1mL含木犀草素-7-O-葡萄糖醛酸苷
60μg、芹菜素-7-O-葡萄糖醛酸苷24μg、迷迭香
酸44μg、香叶木素-7-O-葡萄糖醛酸苷44μg、田
蓟苷 192μg、金合欢素 -7-O- 葡萄糖醛酸苷 36
μg和金合欢素36μg的对照品混合溶液。
1.3.2 色谱条件
采用Sunfire-C18 (250mm×4.6mm，5μm) 色谱
柱；以乙腈 (A)－0.2%磷酸水溶液（B）为流动相，梯
度洗脱(0～5min，16% A；5～45min，16%→28% A；
45～65min，28%→80 A)；流速1.05mL·min-1；柱
温35℃；检测波长330nm；进样量10μL。
2 结果
2.1 系统适用性考察
依照1.3.2项下色谱条件，对1.3.1项下的供试
品和对照品溶液分别进行HPLC含量测定。供试品
溶液和对照品混合溶液中对应的各色谱峰的分离
度均不小于1.5，理论塔板数均大于6000。
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表1 线性范围及回归方程

    
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A
B
A.对照品；B.样品-；1-木犀草素-7-O-β 葡萄糖醛酸苷；2-
芹菜素 -7-O-β 葡萄糖醛酸苷；3- 迷迭香酸；4- 香叶木素
-7-O-β 葡萄糖醛酸苷；5-田蓟苷；6-金合欢素 -7-O-β-葡萄
糖醛酸苷；7-金合欢素。
图1 反相高效液相色谱图
2.2 线性关系研究
分别精密吸取上述对照品混和溶液 0.1、0.3、
0.5、1.0、3.0、5.0 mL置5 mL容量瓶中，加70%乙醇
溶液稀释定容，混匀即得系列对照品混合溶液。取
系列混合对照品溶液各 10μL，依照 1.3.2 项下
HPLC分析条件测定田蓟苷等 7种成分的峰面积，
以田蓟苷等成分的质量浓度 X（μg·mL-1）为横坐
标，峰面积Y为纵坐标，绘制田蓟苷等对照品的标
准曲线，回归计算得7种成分的线性方程，结果见
表1。
2.3 精密度试验
依照1.3.2项下色谱条件，精密吸取混合对照
品溶液10μL（即量取0.5mL混合溶液，加70%乙醇
溶液定容至5ml）连续进样测定6次，计算上述田蓟
苷等7种成分峰面积的相对标准偏差（RSD）值，结
果依次为 0.27%、1.07%、0.48%、0.34%、0.16%、
0.84%、1.85%，表明该方法精密度良好。
2.4 重复性试验
依照1.3.1.1项下供试品溶液制备方法平行提
取同一批次溶液（批次：20140816）6份，按 1.3.2 项
下RP-HPLC法进行分析，记录田蓟苷等7种成分
的峰面积。结果显示各成分峰面积的RSD均不大于
0.67%，表明该方法重现性好，实验结果可靠。
2.5 稳定性试验
依照1.3.2项下色谱条件，取同一批供试品溶
液（批次：20140816），分别于0、2、4、8、12、24h 进行
测定，结果显示田蓟苷等7种成分峰面积的RSD均
小于2.0%，表明在24h内香青兰供试品溶液的稳定
性良好。
2.6 回收率试验
精密称取香青兰提取物（批次：20140816）6份，
每份 10.0mg，置 10mL容量瓶中，加入 1.3.1.2 项下
的对照品混合溶液1.0mL后，按1.3.1.1项下供试品
溶液制备方法提取，测定田蓟苷等7种成分的峰面
积，以外标法计算加样回收率，结果见表2。上述7
种成分的平均回收率在95.50%～101.18%，RSD值
小于2.94%，表明该方法的准确度良好。
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表2 加样回收率试验结果（n =6）

        
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表3 香青兰提取物的测定结果(x±s，n=3 )mg·g-1

                  
       
       
       


2.7 样品的含量测定
分别精密称取不同批号的香青兰提取物粉末
20.0mg，按 1.3.1.1 项下方法制备供试品溶液，取供
试品溶液10μL，按1.3.2项下色谱条件测定峰面
积，以外标法计算样品中的7种成分的含量，结果
见表3。
3 讨论
3.1 测定方法的选择
文献显示，香青兰含量测定的常用方法有
RP-HPLC、UV、GC-MS法。陈佳亮等人研究，以田蓟
苷为对照采用直接紫外测定法由于提取物中迷迭
香酸等其他成分在308nm处有较大吸收，测定的总
黄酮质量往往偏大；而GC-MS法主要用于香青兰
中挥发性成分的含量检测，因此本课题采用
RP-HPLC法进行检测，缩短了测定时间，提高了效
率，操作简单易行、灵敏度高、结果准确。
3.2 测定指标的选择
由于香青兰的化学成分较复杂，为了提升药材
的质量控制标准，有必要对其的主要活性成分进行
多组分含量的同时测定。黄酮类和苯丙素类成分是
香青兰的主要活性成分，其中，木犀草素-7-O-β
葡萄糖醛酸苷、芹菜素-7-O-β 葡萄糖醛酸苷、香
叶木素-7-O-β 葡萄糖醛酸苷、田蓟苷、金合欢素
-7-O-β 葡萄糖醛酸苷、金合欢素和迷迭香酸在
香青兰提取物中含量较高。因此本实验采用HPLC
法，对以上几种成分进行含量测定。
3.3 测定条件的选择
由于香青兰提取物中黄酮类成分结构相似[12]，
使用等度洗脱法短时间难以达到理想的分离度和
理论塔板数，因此采用梯度洗脱。分析相关文献资
料，本实验分别对甲醇、乙腈、甲酸、磷酸、水不同配
比的洗脱系统进行比较试验，结果表明，粘度较小
的乙腈对各化合物的洗脱能力明显优于甲醇，流动
相中加入0.2%磷酸会明显改善各成分的峰形，结果
显示各化合物的分离度均大于1.5，理论塔板数均
大于6000，故确定乙腈-0.2%磷酸溶液为流动相。
3.4 最大吸收波长的选择
采用 PDA 检测器分别对木犀草素 -7-O-β-
葡萄糖醛酸苷、芹菜素-7-O-β 葡萄糖醛酸苷、香
叶木素-7-O-β 葡萄糖醛酸苷、田蓟苷、金合欢素
-7-O-β 葡萄糖醛酸苷、金合欢素（黄酮类）和迷
迭香酸的对照品溶液进行全波长扫描，结果田蓟苷
等7种成分均在330nm左右有最大吸收，故选择
330nm为测定波长。
综上所述，木犀草素-7-O-β 葡萄糖醛酸苷、
芹菜素-7-O-β 葡萄糖醛酸苷、迷迭香酸、香叶木
素 -7-O-β 葡萄糖醛酸苷、田蓟苷、金合欢素
-7-O-β 葡萄糖醛酸苷和金合欢素质量浓度分别
在1.20～60.00μg·mL-1(r=0.9999)、0.48～24.00μg·mL-1
(r=0.9997)、0.88～44.00μg·mL-1 (r=0.9999)、0.88～
44.00μg·mL-1(r=0.9999)、3 84～192.00μg·mL-1(r=
0.9999)、0.72～36.00μg·mL-1 (r=0.9999) 和 0.72～
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36.00μg·mL-1(r=0.9997)线性范围内关系良好；上
述成分的平均回收率在95.50%～101.18%之间，RSD
值均小于3.0%。结论：该RP-HPLC法仪器简单灵敏、
结果准确可信，可用于香青兰有效部位的质量控制。
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