全 文 ：青海不同地区藏药麻花芜中环烯醚菇普类成分的含量测定与品质评价
林鹏程 , 王永菊 ,祝存恩 , 吉守祥 , 梁永欣 , 卢永 昌清海 民族学院化学系 , 西宁 81姗 )
摘要 : 目的 测定藏药麻花芜 中环烯醚菇普类成分番木鳖酸和龙胆苦等的含量 , 评价青海不 同产地麻花芜的质量 。 方法 优
化 了测定麻花芜 中番木鳖酸和龙胆苦等的 高效液相 色谱条件 ; 利用 正交试验研 究 了番木鳖酸和龙胆苦普 的最佳提取方法 。
结果 测定 了青海 16 个不 同产地麻花芜中 2 种环烯醚花普类有效成分的含量 。 结论 青海不 同地区麻花芜质量均符合 中国
药典 2 ( K)5 年版要求 ,但样品中差异较大 。
关键词 :麻花芜 ; 番木鳖酸 ; 龙胆苦普
中图分类号 : 2B 84 . 2 文献标识码 : A 文章编号 : 10 1 一 2 4 9 4 ( 2以巧 ) 10 一 0 7 83 一 03
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麻花芜 ( & 几 iat an 、 t ar im二 a M ax im . )藏医称解吉
嘎保 , 属龙胆科多年生草本植物 。 主根粗长 , 圆锥
形 ,上粗下细 ,扭曲不直有少数分枝 ,其中部多呈罗
纹状 ,根头部有许多纤维状残存叶基川 。 藏医用麻
花芜全草治关节炎 、肺病发烧 、 黄疽及二便不通 〔“ 〕。
本实验优化了其主要功效成分环烯醚菇昔类化合物
番木鳖酸 ( IO g a n l c ac id ) 、 龙胆苦昔 (罗 n t i叩i e o s i d e ) [3〕
的 H PLC 分析方法 ,缩短了分析时间 , 提高了测定 的
灵敏度 ,并通过单因素比较和正交试验研究了番木
鳖酸与龙胆苦昔的最佳提取方法 , 测定了青海省 16
个不同地区麻花芫样品中上述有效成分的含量 , 评
价了青海不同产地藏药麻花芜的质量 。
1 仪器 、试剂及样品采集
1
.
1 仪器
A igl en it 10 高效液相色谱仪 (配 置 : 手动进样
器 、在线脱气机 、高压二元梯度泵 、恒温柱温箱 、 DDA
检测器 、 A ig le n t l l o 色谱工作站 ) ; 2 0朋XA s B 一 C l s
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.
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,
5 脚 )色谱柱 ;明 3 20 超声波清
洗器 (昆山市超声仪器有限公司 ) ; zS 一 97 自动三重
纯水蒸馏器 (上海亚荣生化仪器厂 ) 。
1
.
2 试剂与材料
甲醇 (色谱纯 ) ; 自制三重蒸馏水 ; 磷酸 (分析
纯 ) 。 番木鳖酸对照品由青海普兰特藏药研究所孙
洪发研究员提供 ( 11P LC 归一化法检测 , 纯度大于
9 8% ) ;龙胆苦昔对照品 (中国药品生物制品检定所 ,
批号 1 107 7 0一 2 0 30 8 ,纯度 > 99 % ) 。
1
.
3 样品采集
麻花芫 2 0 2年 8 月采于青海省境内 , 由中国科
学院西北高原生物研究所孙洪发研究员鉴定 。 样品
阴干粉碎后过 80 目筛 ,冷藏保存 。
2 实验方法
2
.
1 色谱条件
色谱柱 : ZO RB AX S B 一 C , 8 ( 4 . 6 mnr x 2 50 m , 5
脚 )柱 ;流动相 : 以 M e O H 和 玩O( 含 0 . 以% 姚 p o 动 )在
0 一 巧 而 n 内由 2 3% 至 30 % 线性梯度洗脱 ;检测波
长 : 24 0 ln ;流速 l rnL
·而 n 一 ’ ;柱温 35 ℃ 。 该色谱条
作者简介 :林鹏程 ,男 , 教授 eT l : (柳 1 ) 8 8《冲斜 g E 一二 l : inI _ pen gc l l e l l g@ so hu . c om
中国药学杂志 2仪巧年 5 月第 41 卷第 10 期 hC in l丫uz o J , 2之兀巧赫刃 , Vo l . 41 No . OI · 78 3 ·
件下番木鳖酸和龙胆苦昔 2 种成分均被洗脱且达到
基线分离 ,保留时间分别为 8 . 49 , 12 . 50 m in ,见图 1。
表 1
T曲 1
正交实验的因素和水平
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表 2
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图 1 色谱图
A 一 对照品 ; B 一 样品 ; 1 一 番木鳖酸 ;2 一 龙胆苦昔
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.2 2 溶液的配制
2
.
2
.
1 对照品溶液的配制 精密称取对照 品番木
鳖酸 2 . 50 n嗯 ,龙胆苦昔 1 . 27 gnr , 分别置 l . o mL 量
瓶中 , 以甲醇溶解并定容 , 配置成相应浓度的对照品
储备液 ,使用时稀释成所需浓度 。
2
.
2
.
2 样品溶液的配制 精密称取 0 . 5 9粉碎至 80
目的麻花芫样品 ,加人 20 fnL 体积分数为团% 甲醇 ,
超声提取 20 而 n , 抽滤 , 滤渣重复处理 2 次 , 合并滤
液 ,浓缩后定容至 50 毗 量瓶中 , 过 0 . 45 脚 滤膜 ,
在 “ 2 . 1” 色谱条件下测定峰面积 。
3 结 果
3
.
1 提取方法的确定
3
.
1
.
1 不同提取方法对测定结果 的影响 精密称
取同一麻花芫样品 9 份 , 每份 0 . 5 9 , 以甲醇为溶剂 ,
测定冷浸 ( 2 4 h ) 、超声 ( 45 而n) 和热回流 ( Z h) 对分
析结果的影响 ( n = 3 ) 。 结果表明 ,超声法提取时间
短 ,提取率最高 ,故本实验采用超声提取法 。
3
.
1
.
2 不同溶剂对测定结果的影响 精密称取同
一麻花芜样品 9 份 , 每份 0 . 5 9 , 分别以水 、 甲醇 、 乙
醇为溶剂 ,超声 45 而 n , 测定不同溶剂对分析结果的
影响 ( n = 3) 。 结果表明 , 甲醇对上述 2 种有效成分
的提取率均最高 ,为此 , 利用正交试验方法进一步考
察不同浓度 甲醇 、 不同提取时间和提取次数对 2 种
有效成分测定的影响 。
3
.
1
.
3 正交试验 选择 甲醇浓度 ( % ) , 提取时间
(而n) ,提取次数为考察因素 ,每个因素取 3个水平 ,
以上述 2 种有效成分的含量为评价指标 , 应用 肠
( 3 4 )表安排试验 , 因素水平见表 l , 结果见表 2 。
直观分析表明 ,影响番木鳖酸 、龙胆苦昔提取率
的因素依次为 : 提取次数 > 提取浓度 > 提取时间 。
方差分析见表 3 , 可见提取时 间对番木鳖酸和
龙胆苦昔的影响极小 ,应与误差项合并后计算 F 比 ;
提取次数之 凡七大于临界值 凡 t o l (2, 4) ( 18 . 0 ) , 对试
验结果有非常显著的影响 ; 甲醇浓度之 凡匕大于临
·
7 84
· 〔沽泛八 子呱功月 J , 2更兀巧从砂 , Vol , 4 1 No . 10
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界值 F0 05( 2 , 4 ) ( 6 . 9 4) ,对试验结果有显著影响 。
表 3 方差分析表
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综合直观分析和方差分析结果 , 最佳提取方法
应为 A Z残几 。 考虑实际工作的方便 、快捷 , 经进一
步试验 ,确定最终提取方法为 : 甲醇浓度 60 % 、 提取
时间 20 m in 、提取次数 3 次 。
3
.
2 线性关系的考察
精密量取 2 种对照品储备液 , 以甲醇配制质量
浓度分别为 : 番木鳖酸 0 . 12 5 , 0 . 05 0 , 0 . 02 5 , 0 . 0 16 7 ,
0
.
0 12 5
,
0
.
0 10 9
·
L 一 ` ;龙胆苦昔 0 . 6 25 , 0 . 2 45 , 0 . 122 ,
0
.
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5
,
0
.
01 2 2
,
0
.
09 8 9
·
L
一 `的系列混合对照品溶
液 ,每次进样 5 拼L , 以峰面积的积分值定量 。 以峰面
积为纵坐标 ( )Y ,含量绝对值为 ( X )得番木鳖酸 、 龙
胆苦昔的回归方程分别为 : Y = 6 19 . 13 X 十 0 · 93 , r 二
0 9 9 9 ; Y
= 1 02 7
.
7 3 x + 3 3
.
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, : = 0
.卯 9 9 。 线性范
围分别为 0 . 0 5 0 一 0 . 6 2 5 拌g , o汪又7 一 3 . 6 5 # g 。
中国药学杂志 2。 巧 年 5 月第 41 卷第 10 期
3. 3 检测限
在 ` ,2 . 1” 色谱条件下 , 当信噪比 S / N 二 3 时 , 对
各组分最低检测限进行测定 。 结果表明 , 番木鳖酸 、
龙胆苦昔的最低检测限分别为 1 . 20 , 0 . 30 gn 。
3
.
4 精密度实验
取浓度为 0 . 02 5 g’ L 一 `番木鳖酸 、 0 . 02 4 5 9 · L 一 `
龙胆苦昔混合对照品溶液 ,在 “ 2 . 1” 色谱条件下测定
色谱峰的峰面积 , 计算 RS D 分别为 0 . 76 % , 0 . 69 %
(
n 二 6)
。 表明仪器精密度良好 。
.3 5 重复性实验
精密称取麻花芜样品 0 . 5 9 共 6 份 ,按 “ 2 . 2 ” 项
下方法操作 , 在 “ 2 . 1 ” 色谱条件下测定番木鳖酸 、 龙
胆苦昔的含量 , 计算得 RSD 分别为 2 . 0 % , 1 . 2% ,
( n 二 6)
。 表明方法重复性良好 。
3
.
6 稳定性实验
精密称取麻花芜样品 0 . 5 9 , 按 “ 2 . 2 ” 项下方法
操作 ,分别在 0 , 2 , 4 , 6 , s h 时分别进样 , 测定番木鳖
酸 、龙胆苦昔的峰面积 , 计算得 R sD 分别为 1 . 4% ,
1
.
0 % (
n =
5)
。 表明样品溶液在 s h 内稳定 。
.3 7 回收率实验
精密称取 3 份已测知含量的麻花芫样品各 0 . 05
g
,添加各对照品溶液适量 (番木鳖酸 : 0 . 25 9 · L 一 `溶
液 0 . 80 mL ,龙胆苦昔 : 0
.
2 4 5 9
·
L
一 `溶液 O . 60 mL ) ,
按 “ 2 . 2” 项下方法操作 , 测得番木鳖酸 、龙胆苦昔平
均回收率 ( n 二 3) 分别为 102 % , 9 . 5% ; sR D 分别为
3
.
6%
,
2
.
5 %
。
.3 8 样品测定
取 ` ,2 . 2’ 项下制备的样品溶液按 “ 2 . 1” 色谱条件
进行分析 ,经 D AD 检测器检测上述 2 种待测组分的
峰纯度且其紫外光谱与对照品一致后 ,按外标法 以
峰面积积分值计算 , 得 2 种有效成分的含量 ( 。 = 3 ,
取平均值 ) 。 结果见表 4 。
4 讨 论
4
.
1 检测波长的确定
利用 D AD 检测器在 220 一 4X() 二 扫描其吸收光
谱 ,各对照品在 240 ln 波长处均有较高的吸收 , 选
择该波长为检测波长 。
.4 2 流动相的选择
上述 2 种有效成分色谱峰易拖尾 ,经试验 , 当在
水中加人 0 . 01 % 一 0 . 10 % 磷酸时均可改善番木鳖
酸 、 龙胆苦昔的峰形 。 最终选择甲醇和含 0 .以% 的
磷酸水溶液为流动相 。
.4 3 结果分析
环烯醚菇及其昔类是龙胆科药物现已明确的主
面匆药厚〕葵恶 .丽面万舜赎丽 若票而渗勇
表 4 青海不 同产地麻花芜中番术鳖酸和龙胆苦普的含
量 %
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要有效成分之一 ,现代药理学研究表明 , 番木鳖酸具
有较好的抗炎活性川 ;龙胆苦昔有促进胃液分泌 、抗
原虫和抗炎等作用困 。 以上述 2 种有效成分的含量
为评价指标 ,可更加全面地反映麻花芫的质量 。 虽
然青海不同产地麻花笼中龙胆苦昔的含量均大于中
国药典规定 2% 闹的要求 , 但所试验的不同产地麻
花芫中 2 种有效成分含量有较大的差异 。
5 结 论
优化了 H PLC 同时测定麻花芜中番木鳖酸和龙
胆苦昔的色谱条件 ,在保证基线分离的条件下缩短
了分析时间 ;利用 DA D 检测器选择了更加灵敏的检
测波长 , 提高了检测灵敏度 ;通过单因素比较和正交
试验确定了最佳提取方法 , 保证了分析结果的准确
度 。 利用上述提取和分析条件 , 测定了青海省不同
产地麻花笼样品中上述 2 种有效成分的含量 , 其有
效成分的含量有较大的差异 。
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刀岁` I I coE 。 、 月d 川 5 (青海经济植 物志 )
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. 儿n i n g : Qi n hg 越 P eo p l e ’ ; 阮 s ; , 一9即 ; 45 3书 4厂2」 YA N G Y c , EH T N , uL S L , 以 以 . iT 乙召 IO n 脚政杭?i] . 绍 (藏药志 )
[M 〕. 儿` 邓 : iQ砂越 、 )国e ’ s 服 5 5 , 19 9 1 ; l压 1 1 .乙3 〕 lJ L J , s洲 H F , D IN G J Y , et al . stu dy on e阮~ al e o vtn s i it o r ls J
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了陀。 之进泊 u 5 1几阴 , 19 2 , 1 1 : 113 一 1 18 .
〔4 1 邢。 N M e , G I NE R R M 、 MNA 皿 S 、 e : 以 . 5幻飞 ld u r al 。 ” ls ider a -
t son s on 山 e id由sd , as an t i一 s成出 l u l la to巧 卿 nt s 仁J ] . 尸及切 涅在 几才走月 ,
19 4 ;印 (3) : 23 2 一23 4
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; 25 6
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以 P戈2 X`〕5 )V ol l 戈中国药典 2仪〕5 版一部 )仁5 3 . 以习5 ; l叩一 191 .
(收稿日期 : 2侧巧一伪一20 )
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2之兀巧从砂· , Vol
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