全 文 ：［收稿日期］ 20121213(012)
［基金项目］ 国家自然科学基金重点项目(81130069) ;云南省科技计划项目(2012CG019)
［第一作者］ 段宝忠，副教授，从事中药资源与质量控制研究，Tel:13887296403，E-mail:bzduan@ 126． com
［通讯作者］ * 黄林芳，Tel:010-57833197，E-mail:lfhuang@ implad． ac． cn
云南野生抚育粗茎秦艽药材的品质评价
段宝忠1，2，黄林芳1* ，尚飞能2，曹昌娥2，郑司浩1
(1. 中国医学科学院，北京协和医学院药用植物研究所，北京 100193;
2. 大理学院药学院，云南 大理 671000)
［摘要］ 目的:研究野生抚育粗茎秦艽药材的有效成分和化学指纹图谱，以期评价其质量，为粗茎秦艽药材的 GAP种植
提供科学依据。方法:采用 Zorbax SB C18(4. 6 mm × 250 mm，5 μm)色谱柱，流动相甲醇-水，梯度洗脱，流速1 mL·min
－1，检测
波长 238 nm，柱温为 25 ℃。利用国家药典委员会出版的《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》2004 A版软件，对 15 批 3 年生
野生抚育粗茎秦艽药材进行指纹图谱分析。结果:15 批粗茎秦艽药材环烯醚萜苷类有效成分及浸出物含量符合 2010 年版
《中华人民共和国药典》要求，各样地药材化学指纹色谱相似度 ＞ 0. 981，质量均一性好。结论:方法具有良好的精密度、重复
性、稳定性，可用于粗茎秦艽药材的质量综合评价。野生抚育模式药材可作为粗茎秦艽主要种植发展模式，对云南建设“云药
之乡”和发展道地药材具有重要的现实意义。
［关键词］ 粗茎秦艽;野生抚育;高效液相色谱;指纹图谱;品质评价
［中图分类号］ Ｒ284. 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2013)21-0082-05
［doi］ 10． 11653 /syfj2013210082
Quality Evaluation of Wildlife Tending Gentiana crassicaulis
in Yunnan Province
DUAN Bao-zhong1，2，HUANG Lin-fang1* ，SHANG Fei-neng2，CAO Chang-e2，ZHENG Si-hao1
(1. Institute of Medicinal Plant Development，Chinese Academy of Medical Sciences ＆ Peking Union Medical
College，Beijing 100193，China;2. College of Pharmaceutical Science，Dali University，Dali 671000，China)
［Abstract］ Objective:Ｒadix Gentiana crassicaulis is the major cultivated Gentiana species in Yunnan
Province． Wildlife tending is a major cropping pattern． In this study，an improved and comprehensive HPLC
fingerprints were developed for the quality evaluation of G． crassicaulis， together with the simultaneous
determination of four iridoid and secoiridoid glycosides． Loganic acid，swertiamarin，gentiopicroside，sweroside
were also detected． Method:HPLC separation was performed on an Agilent Zorbax SB C18 column． The mobile
phase was methanol and water with linear gradient change of methanol from 0 to 40% in 20 min． The flow rate was
1. 0 mL·min －1，and the detection wavelength was set at 238 nm． Ｒesult:The HPLC chromatograms of fifteen
samples from different regions of China showed a similar pattern． Thirteen peaks were selected as the characteristic
peaks to evaluate the similarities among different G． crassicaulis samples． Conclusion:This is the first report on
an HPLC method for the simultaneous determination of four bioactive components and fingerprint analysis of wildlife
tending G． crassicaulis． The results indicate that this comprehensive method is suitable for evaluate the quality of
G． crassicaulis for GAP planting．
［Key words］ Gentiana crassicaulis;wildlife tending;HPLC;fingerprint;quality evaluation
·28·
第 19 卷第 21 期
2013 年 11 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 19，No． 21
Nov．，2013
秦艽始载于《神农本草经》，列为中品，已有两
千多年的药用历史，是制药生产的重要原料。近年
来，秦艽用量增长较快，野生资源逐渐减少，已处于
濒危灭绝境地［1］，2010 年版《中华人民共和国药典》
(一部)收载的 4 种秦艽基原植物秦艽 Gentiana
macrophylla Pall．、麻花秦艽 G． straminea Maxim．、粗
茎秦艽 G． crassicaulis Duthie ex Burk． 及小秦艽 G．
dahurica Fisch．，在 1987 年就被列为《国家重点保护
野生药材物种名录》，保护级别 III 级。其中，粗茎
秦艽 G． crassicaulis Duthie ex Burk． 主要分布于云
南、四川及西藏等地，是云南外销出口的大宗药材之
一。近年来，粗茎秦艽在云南快速发展，特别是野生
抚育是云南粗茎秦艽的主要发展模式［2］。对云南
栽培的粗茎秦艽质量评价方面已有文献报道［3］，但
对野生抚育粗茎秦艽药材的质量评价尚未见文献报
道，一定程度上限制了当地中药材产业发展。本文
对 15 批野生抚育粗茎秦艽药材的环烯醚萜苷类有
效活性成分及浸出物含量和化学指纹图谱进行研
究，以期为野生抚育粗茎秦艽药材的品质评价提供
科学依据。
1 材料
1. 1 仪器与试剂 Agilent 1200 HPLC系统(Agilent
Technologies，USA) ，包括四元梯度泵、在线真空脱气
机、自动进样器、恒温柱箱、DAD 检测器、Chem-
station 色谱工作站。Agilent Zorbax SB C18色谱柱
(4. 6 mm ×250 mm，5 μm) ，KQ-5200DB型超声波清
洗仪(昆山市超声仪器有限公司) ，GH-252 型电子
分析天平(A＆D，1 /10 万) ，DKS-28 型电热恒温水浴
锅(嘉兴市中新医疗仪器有限公司) ，电热鼓风干燥
箱(上海一恒科学仪器公司)。色谱级甲醇、乙腈
(Fisher Scientific，Fairlawn New Jersey) ，水为超纯
水，其他试剂均为分析纯。
1. 2 试药 粗茎秦艽为当地农户撒播在山地上的
3 年生药材，2011 年 8 月 13 至 14 日采于云南省云
龙县、兰坪县和维西县，详细见表 1(S5、S6 由兰坪
恒通农业开发有限公司提供，采集日期 2011 年 8 月
1 日)。经黄林芳副研究员鉴定为粗茎秦艽 G．
crassicaulis Duthie ex Burk．的干燥根，凭证标本存放
于大理学院药学院标本馆。药材水洗后自然阴干，
粉碎前 30 ℃烘干至恒重后粉碎，过 40 目筛，备用。
对照品马钱甘酸(批号 MUST-11042501，Loganic
acid) ，獐 牙 菜 苦 苷 (批 号 MUST-11012401，
Swertiamarin) ，龙胆苦苷(批号 MUST-11011401，
Gentiopicroside)和獐牙菜苷(批号 MUST-11020802，
Sweroside)购于成都曼斯特生物科技有限公司，对照
品纯度经 HPLC峰面积归一化法计算 ＞ 98%。
表 1 粗茎秦艽样品的来源
No． 采集地 海拔 /m 加工方式
S1 维西县永春乡四保村 2 800 阴干
S2 维西县永春乡四保村 2 612 阴干
S3 维西县永春乡庆福村 2 400 阴干
S4 维西县永春乡庆福村 2 541 阴干
S5 兰坪县金顶镇 2 700 烘干
S6 兰坪县金顶镇 2 610 烘干
S7 兰坪县金顶镇干竹河村 2 992 阴干
S8 兰坪县通甸镇河边村 2 314 阴干
S9 兰坪县通甸镇龙潭村 2 803 阴干
S10 兰坪县通甸镇龙潭村 2 865 阴干
S11 兰坪县通甸镇福登村 2 501 阴干
S12 兰坪县河西镇箐花村 2 335 阴干
S13 兰坪县河西镇箐花村 2 450 阴干
S14 兰坪县河西镇箐花村 2 652 阴干
S15 云龙县关坪乡关坪村 2 320 阴干
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 Agilent Zorbax-SB C18(4. 6 mm ×
250 mm，5 μm)色谱柱，流动相甲醇(A)-0. 1%磷酸
水溶液(B) ，梯度洗脱(0 ～ 4 min，25% A;4 ～
10 min，25% ～ 35% A;10 ～ 20 min，35% ～ 40% A) ，
检测波长 238 nm，流速 1 mL·min －1，柱温 25 ℃，进
样量 5 μL。
2. 2 系统适用性 在 2. 1 色谱条件下检测各相邻
色谱峰之间的分离度均 ＞ 1. 5，拖尾因子在 1. 04 ～
1. 10，理论塔板数均 ＞ 13 430，对照品及粗茎秦艽药
材样品中 4 个环烯醚萜苷类成分基线分离。
2. 3 对照品溶液的制备 分别精密称取上述对照品
适量，分别加水制成每 1 mL含马钱甘酸1. 135 mg，獐
牙菜苦苷 0. 540 mg，龙胆苦苷 5. 610 mg，獐牙菜苷
0. 645 mg的溶液，加甲醇超声溶解，即得，分别精密吸
取一定量各对照品溶液，置于 1 mL量瓶中，稀释至刻
度，混合均匀，得混合对照品储备液，备用。
2. 4 供试品溶液的制备 精密称取样品粉末
0. 5 g，置 50 mL锥形瓶中，精密加水 15 mL，混匀，称
重，60 ℃下超声提取 60 min(200 W，40 kHz) ，取出，
放冷，补足质量，摇匀，过滤，取上清液用 0. 45 μm
微孔滤膜滤过，即得。
2. 5 标准曲线与线性关系考察 取含有马钱甘酸、
獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、獐牙菜苷的混合对照品储备
液，用甲醇稀释得 7 个不同浓度的混标溶液。在上
·38·
段宝忠，等:云南野生抚育粗茎秦艽药材的品质评价
述色谱条件下进样进 5 μL，测定各色谱峰峰面积，
每个浓度进样 3 次，取平均值。以对照品质量浓度
(X)为横坐标，色谱峰峰面积(Y)为纵坐标进行线
性回归，结果见表 2。
表 2 4 种环烯醚萜苷类成分的线性关系及范围
对照品 线性方程 Ｒ2 线性范围 /μg LOQ /mg·L －1 LOD /mg·L －1
马钱甘酸 Y = 7 109. 0X － 10. 724 0. 999 9 0． 124 1 ～ 5． 675 0 12. 40 3. 72
獐牙菜苦苷 Y = 6 778. 7X － 3. 942 9 0. 999 8 0． 059 1 ～ 2． 700 0 7. 09 3. 60
龙胆苦苷 Y = 3 993. 1X － 63. 738 0. 998 7 0． 245 0 ～ 28． 050 0 14. 70 2. 45
獐牙菜苷 Y = 5 792. 5X － 10. 813 0. 999 9 0． 070 6 ～ 3． 225 0 8. 47 2. 11
2. 6 精密度试验 精密吸取同一供试品溶液，在上
述色谱条件下，连续进样 6 次，每次 5 μL，记录峰面
积。各色谱峰面积的 ＲSD ＜ 0. 97%，表明仪器精密
度良好。
2. 7 重复性试验 取同一样品 6 份按 2. 4 项下方
法制备，进样测定。计算 4 个环烯醚萜苷类成分含
量，其 ＲSD ＜1. 34%，表明该实验方法重复性良好。
2. 8 稳定性试验 取上述供试品溶液分别在 0，4，
8，12，18，24，48 h 进行测定，计算含量，ＲSD 均 ＜
1. 51%，说明各对照品溶液在 48 h内稳定。
2. 9 回收率试验 取已知含量的药材细粉 6 份精
密称定，分别精密加入一定量的对照品，按 2. 4 项下
方法制备供试品溶液，进样测定，计算回收率，平均
回收率在 99. 67% ～ 100. 86%，ＲSD≤1. 60%。见
表 3。
2. 10 样品分析 将 15 批样品按 2. 4 方法制备供
试品溶液，平行操作 3 次，样品及对照品 HPLC 色谱
图见图 2。用回归方程计算马钱甘酸、獐牙菜苦苷、
龙胆苦苷、獐牙菜苷 4 个环烯醚萜苷类成分的含量，
测定结果见表 3。从测定的 15 批样品来看，均含有
马钱甘酸、獐牙菜苦苷、龙胆苦苷和獐牙菜苷，4 个
成分含量分布呈现一定的规律性，即龙胆苦苷 ＞马
钱甘酸 ＞獐牙菜苦苷 ＞獐牙菜苷。15 批药材马钱
甘酸和龙胆苦苷总量在 9. 71% ～ 19. 42%，平均含
量 13. 34%，全部符合要求。
2. 11 药材指纹图谱的建立及相似度评价 将所得
的 15 批粗茎秦艽药材色谱图导入《中药色谱指纹
图谱相似度评价系统》2004 A 版软件，以 S12 批药
材图谱作为参照谱进行指纹匹配，确定了 13 个共有
峰，粗茎秦艽特征指纹图谱的共有模式色谱图见图
2，15 批粗茎秦艽药材指纹色谱图见图 3。各样品相
似度均 ＞ 0. 981，见表 4。从分析结果可看出，野生
抚育粗茎秦艽药材质量稳定，均一性较好。
3 讨论
考察了超声和回流提取 2 种方法，二者提取效
表 3 粗茎秦艽药材提取物中 4 个成分加样回收率
成分
取样量
/ g
样品中
量 /mg
加入量
/mg
实测量
/mg
平均回
收率 /%
ＲSD
/%
马钱甘酸 0． 500 1 2． 95 2． 93 5． 87 99． 67 1． 45
0． 500 0 2． 95 2． 93 5． 87
0． 500 2 2． 95 2． 93 5． 92
0． 499 9 2． 95 2． 93 5． 81
0． 499 8 2． 95 2． 93 5． 94
0． 500 2 2． 95 2． 93 5． 88
獐牙菜苦苷 0． 5001 2． 15 1． 98 4． 13 100． 01 1． 10
0． 500 0 2． 15 1． 98 4． 17
0． 500 0 2． 15 1． 98 4． 11
0． 499 9 2． 15 1． 98 4． 12
0． 500 0 2． 15 1． 98 4． 13
0． 500 0 2． 15 1． 98 4． 13
龙胆苦苷 0． 500 0 46． 95 35． 93 83． 66 100． 86 1． 02
0． 499 9 46． 94 35． 93 82． 82
0． 500 1 46． 96 35． 93 82． 79
0． 500 2 46． 97 35． 93 82． 86
0． 500 0 46． 95 35． 93 83． 37
0． 500 0 46． 95 35． 93 82． 86
獐牙菜苷 0． 500 1 0． 48 0． 46 0． 93 100． 30 1． 60
0． 500 0 0． 48 0． 46 0． 94
0． 500 0 0． 48 0． 46 0． 95
0． 500 1 0． 48 0． 46 0． 94
0． 500 2 0． 48 0． 46 0． 95
0． 499 9 0． 48 0． 46 0． 94
率相当，超声提取简便易操作，浸提过程中无化学反
应，因此选择用超声提取法。在此基础上，考察了氯
仿、乙醇、甲醇、70% 甲醇、50% 甲醇、30% 甲醇和
H2O作为提取溶剂，比较发现 50%甲醇提取物的提
取效率最高，且色谱峰峰形较好。另外还考察了提
取时间、温度和提取液用量，最终确定提取方法为
60 ℃下 15 mL 50%甲醇超声提取 60 min。
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第 19 卷第 21 期
2013 年 11 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 19，No． 21
Nov．，2013
A．混合对照品;B．共有模式(Ｒ)
7. 马钱甘酸;9. 獐牙菜苦苷;
11. 龙胆苦苷;13. 獐牙菜苷
图 2 对照品 HPLC色谱图及粗茎秦艽药材共有模式图谱 S1 ～ S15 分别代表各批药材(样品来源见表 1)
图 3 15 批粗茎秦艽药材 HPLC色谱
表 4 粗茎秦艽药品样品含量、浸出物测定及相似度
No． 马钱甘酸 /% 獐牙菜苦苷 /% 龙胆苦苷 /% 獐牙菜苷 /% 马钱甘酸 +龙胆苦苷 /% 浸出物含量 /% 相似度
S1 2. 28 0. 50 10. 32 0. 47 12. 60 32. 72 0. 998
S2 2. 26 0. 76 17. 16 0. 52 19. 42 35. 78 0. 995
S3 2. 31 0. 56 14. 04 0. 17 16. 35 40. 79 0. 981
S4 1. 84 0. 50 11. 58 0. 47 13. 42 35. 35 0. 993
S5 1. 50 0. 53 10. 61 0. 18 12. 11 33. 84 0. 999
S6 1. 09 0. 61 14. 34 0. 11 15. 44 31. 92 0. 997
S7 1. 82 0. 47 11. 29 0. 30 13. 11 36. 58 0. 998
S8 0. 59 0. 43 9. 39 0. 10 9. 98 31. 89 1
S9 0. 88 0. 40 9. 57 0. 11 10. 45 36. 69 0. 996
S10 0. 84 0. 41 8. 87 0. 10 9. 71 34. 15 0. 995
S11 1. 04 0. 47 11. 93 0. 16 12. 97 36. 94 1
S12 1. 78 0. 58 12. 80 0. 10 14. 58 28. 93 1
S13 1. 67 0. 47 12. 36 0. 25 14. 03 34. 23 0. 998
S14 2. 38 0. 55 12. 60 0. 33 14. 98 36. 97 0. 996
S15 0. 82 0. 46 10. 19 0. 13 11. 01 38. 11 0. 988
环烯醚萜苷类化合物均有显著的紫外吸收，本
实验依据所测定的各化合物紫外最大吸收波长，分
别考察了 272，252，242，238，230 nm 波长的样品色
谱图，结果表明在 238 nm处，各对照品有较大吸收，
且样品色谱峰峰形良好，兼顾四者选择了 238 nm作
为含量测定波长。
考察了 Zorbax Extend-C18(4. 6 mm × 250 mm，5
μm) ，Zorbax SB C18(4. 6 mm × 250 mm，5 μm)和
SunFireTM C18(4. 6 mm ×150 mm，5 μm)。实验结果
表明 Zorbax SB C18(4. 6 mm × 250 mm，5 μm)柱出
峰较多，且各成分分离良好，同时比较了甲醇和乙腈
洗脱，发现甲醇分离较乙腈分离效果好，因此最终选
择了 Zorbax SB C18(4. 6 mm × 250 mm，5 μm)色谱
柱和甲醇作为流动相洗脱。
云南粗茎秦艽药材根粗大、较长，色黄，品质较
西北出产者为佳［4］。道地药材的形成与其原植物
所处环境的土壤、气候、植物群落结构等生态因子都
有着密切的联系，植物生态型是道地药材形成的生
物学实质之一［5-6］。实验结果表明，云南野生抚育
粗茎秦艽有效成分和浸出物含量均符合《中华人民
共和国药典》2010 年版秦艽项下规定;药材化学指
纹色谱相似度均 ＞ 0. 981，质量均一性好。相比药典
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段宝忠，等:云南野生抚育粗茎秦艽药材的品质评价
檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶
收载的另外 3 种秦艽，粗茎秦艽在产量方面有明显
优势［7］，药效亦较好［8］。粗茎秦艽野生抚育不仅解
决了秦艽商品药材紧缺的情况，对满足临床应用和
中成药生产需求，保护和合理利用濒危药材秦艽野
生资源都具有重要意义。云南西北部兰坪县、维西
县等地有大面积的荒地，轮歇地及高山草地，是粗茎
秦艽生长的适宜之地［9］，在适生区大力发展粗茎秦
艽野生抚育种植，对云南建设“云药之乡”和发展道
地药材具有重要的现实意义。
［参考文献］
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［8］ 楼之岑． 常用中药材品种整理和质量研究．北方编写
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［9］ 赵仁． 秦艽栽培技术［M］． 昆明:云南科技出版
社，2009.
［责任编辑 顾雪竹］
［收稿日期］ 20130726(015)
［基金项目］ 重大新药创制(2012ZX09303009-002) ;江苏省中医药领军人才项目(LJ200906) ;江苏高校优势学科建设工程项目 2010
［第一作者］ 谢丽艳，硕士研究生，从事中药学研究，E-mail:xieliyan_2008@ 163． com
［通讯作者］ * 居文政，主任药师，博士生导师，从事中药临床药代动力学研究，Tel:025-86617141-80518，E-mail:wzhju333@ 163． com
HPLC同时测定消癌平注射液中 7 种主要成分的含量
谢丽艳1，徐洁1，戴国梁1，居文政1，2* ，谈恒山3
(1. 南京中医药大学药学院，南京 210009;2. 南京中医药大学附属医院临床药理科，南京 210029;
3. 南京军区总医院，南京 210002)
［摘要］ 目的:测定消癌平注射液中新绿原酸、原儿茶醛、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、香草酸和 4-香豆素的含量。方法:
Kromasil 100-5 C18色谱柱(4. 6 mm × 250 mm，5 μm) ，流动相乙腈-0. 2%磷酸，梯度洗脱，检测波长 300 nm;柱温30 ℃，流速 0. 8
mL·min －1。结果:新绿原酸、原儿茶醛、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、香草酸和 4-香豆酸的线性范围分别为 0. 1 ～ 3. 2 mg·L －1
(r = 0. 999 3)、0. 025 ～ 0. 8 mg·L －1(r = 0. 999 9) ，0. 1 ～ 3. 2 mg·L －1(r = 0. 999 8) ，0. 075 ～ 2. 4 mg·L －1(r = 0. 999 9) ，0. 037 5 ～
1. 2 mg·L －1(r = 0. 999 9) ，0. 02 ～ 0. 64 mg·L －1(r = 0. 999 9) ，0. 01 ～ 0. 32 mg·L －1(r = 0. 999 9) ，加样回收率分别为 99. 6%
(ＲSD 0. 24%) ，100. 0% (ＲSD 0. 15%) ，98. 7% (ＲSD 1. 00%) ，99. 1% (ＲSD 1. 36%) ，96. 4% (ＲSD 1. 37%) ，98. 3% (ＲSD
1. 80%) ，97. 3%(ＲSD 1. 64%)。结论:该方法简便，准确，重复性好，可为消癌平注射液提供质量控制依据。
［关键词］ 消癌平注射液;新绿原酸;原儿茶醛;绿原酸;隐绿原酸;香草酸;咖啡酸;4-香酸
［中图分类号］ Ｒ284. 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2013)21-0086-04
［doi］ 10． 11653 /syfj2013210086
Simultaneous Determination of Seven Major Compound in
Xiaoaiping Injection by HPLC
XIE Li-yan1，XU Jie1，DAI Guo-liang1，JU Wen-zheng1，2* ，TAN Heng-shan3
·68·
第 19 卷第 21 期
2013 年 11 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 19，No． 21
Nov．，2013