全 文 ：表 2　脑泰乐对大鼠血液流变学指标的影响( x±s)
项　目 N 　　空白对照组 中剂量组(5.0 g/kg) 低剂量组(2.5 g/ kg)
全血粘度(低切) 11 14.38±2.19 10.02±2.37＊＊ 11.78±2.49＊＊
全血粘度(中切) 11 7.31±0.86 5.32±1.25＊＊ 6.01±0.88＊＊
全血粘度(高切) 10 5.82±0.63 3.64±0.96＊＊ 4.12±0.58＊＊
血浆粘度 10 1.00±0.52 1.37±0.19 1.55±0.38
红细胞压积/ % 11 38.33±1.12 39.41±1.77 37.66±1.59
全血还原粘度(低切) 11 31.41±5.95 25.33±4.67＊ 28.53±4.93
全血还原粘度(中切) 11 16.23±2.88 12.69±2.19＊＊ 14.73±3.43
全血还原粘度(高切) 11 11.16±2.05 7.65±3.08＊＊ 9.53±1.91
血沉/mm·h-1 11 1.95±0.09 1.94±0.082 1.90±0.088
红细胞聚集指数 11 2.17±0.37 2.58±0.22 2.66±0.27
红细胞刚性指数 11 9.98±3.01 8.00±2.32 8.82±3.11
红细胞变形指数 10 1.21±.14 1.24±0.12 1.10±0.16
血小板粘附率/ % 11 32.22±7.95 26.17±5.33＊ 28.56±4.51
　　　　　 t 检验:＊P <0.05 , ＊＊P <0.01
2.3　大鼠血小板粘附功能测定
取大鼠 40 只 , 雌雄各半 ,体重 250 ～ 280 g ,按 2.2 项下操作
采血 ,全血置血小板粘附仪中 , 测定粘附前后血小板数 ,计算血
小板粘附率。结果见表 2。
2.4　小鼠常压耐缺氧能力实验
取小鼠30 只 ,雌雄各半 , 体重在 20 ～ 22 g , 称重后将大鼠随
机分组 ,设脑泰乐组(50 、2.5 g/kg 2 剂量组)和空白对照组 , 每
天灌胃给药 1 次 , 连续给药 7 d , 末次给药 1 h 后 , 将小鼠放入
250 m L广口瓶中 , 密闭瓶塞 ,计时 , 观察小鼠因缺氧而死亡的时
间 ,结果见表 3。
表 3　脑泰乐对小鼠常压而耐缺氧的影响( x±s)
组别 N 剂量(g/ kg) 存活时间/min
脑泰乐 10 5.0 40.18±6.31＊＊
脑泰乐 10 2.5 39.01±6.96＊
空白对照 10 0 32.52±5.37
　　 t 检验:＊P <0.05 , ＊＊P <0.01
2.5　增强小鼠游泳耐力
小鼠30 只 ,雌雄各半 , 体重在 20 ～ 22 g , 称重后将大鼠随机
分组 ,设脑泰乐组(50 、2.5 g/ kg 2 个剂量组)和空白对照组 , 每
天灌胃给药 1 次 ,连续给药 7 d , 末次给药 1 h后 , 分别在小鼠尾
部束其体重 10%的重物 ,放入玻璃缸内游泳 ,水温保持在(20±
0.5)℃, 计时 ,观察小鼠沉入水中不再挣扎的时间为小鼠游泳
时间 ,结果见表 4。
3　讨论
脑泰乐的研究证明其高 、中 、低剂量组对大鼠的血栓形成
具有明显的抑制作用 ,高 、中剂量组对大鼠的血栓形成的抑制
率明显优于阳性药物对照组 , 提示脑泰乐有一定的溶栓作用 ,
从中医的角度来说 , 即达到了活血化瘀的目的。
表 4　脑泰乐对小鼠游泳的影响( x±s)
组别 N 剂量(g/kg) 存活时间/ min
脑泰乐 10 5.0 5.10±1.32＊
脑泰乐 10 2.5 4.65±1.56
空白对照 10 0 4.01±1.23
　　 t 检验:＊P <0.05
血液流变学系统的改善作用是其主要治疗作用。 血液的
流动性和粘性受红细胞变形能力影响 , 红细胞变形能力越强 ,
血液粘度越低。有文献报道[ 1] ,心血管病人的发病原因明显与
血粘度增高及红细胞刚性增高有密切关系。中 、低剂量的脑泰
乐可对全血粘度 、全血还原粘度 、红细胞刚性指数均有显著性
的改变。通过对大鼠血小板粘附性实验 , 结果脑泰乐可降低血
小板的粘附性 , 表明该药物对机体的血液流变性异常具有明显
的改变。
常压耐缺氧实验表明该药能够提高机体重要器官如脑 、心
等器官的利用率 , 降低了机体的耗氧量;同时游泳实验也表明
该药可显著延长小鼠游泳时间 , 减轻体力劳动时的疲劳 , 有明
显的抗疲劳作用。提示该药物显著提高了小鼠的应激能力。
参考文献
[ 1] 陈琦.中药药理实验方法学[ M] .北京:人民卫生出版社 ,
1993.757 、118.
[ 2]李仪奎.中药药理实验方法学[ M] .上海:上海科学技术出
版 , 1991.179.
(收稿日期:2000-10-27)
穿心草 酮抗炎作用及毒性的初步研究
杨东梅1　许实波2(1.广东药学院图书馆 ,广东 广州 510224;2.中山大学生命科学院药学系)
摘　要　穿心草 酮腹腔注射给药对小鼠二甲苯致小鼠耳肿胀 、乙酸介导的毛细血管通透性增加 、鸡蛋清致大鼠足趾肿胀均有显
著的抑制作用 ,试验提示其具有直接的抗炎作用 , CX 具有膜稳定性作用 , 能够使大鼠炎性组织释放的 PGE2 明显减少。毒性试验表
明穿心草 酮腹腔注射的最大耐受量大于 300 mg/kg 。
关键词　穿心草 酮;抗炎作用;毒性
中图号　R285.5 　文章编号:1006-8783(2001)01-0033-02　文献标识码:A
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第 17卷第 1 期 广　东　药　学　院　学　报 Vol.17 No.1
2001 年 3 月 ACADEM IC JOURNAL OF GUANGDONG COLLEGE OF PHARMACY Mar.2001
　　 穿心草 酮[ Canscora lucidissima(Lev l.etVant.)Hand.-
Mazz.] 分布于广东 、广西等地 , 资源丰富。民间全草常用来治
疗肝炎 、黄疸 、胃痛等疾患[ 1] 。穿心草中含有多种活性成分 , 其
药理作用极少见报道。穿心草 酮是中山大学化工学院天然
有机室从穿心草全草中分离出来的酮化合物(属黄酮类)。本
文首次报道穿心草 酮(1 , 6-二羟基-3 , 5-二甲氧基酮 , 简称
CX)的抗炎作用及其毒性研究。其结构式如图 1。
OCH3
HO
O
O OH
OCH3
图 1　穿心草 酮(CX)的化学结构
1　材料
SD大鼠 , 体重(200+20)g , 雌雄均有 , 由广东省医学实验
中心提供;CX 从穿心草中提取分离得到 , 以 0.1%吐温-80 的
双蒸水悬溶;二甲苯 , 上海试剂一厂产品;冰乙酸 , 核工业实验
化工厂产品;消炎痛(indomethacini , Ind), 广东省制药工业公司
华南制药厂产品;醋酸可的松(Cortisone , Cor),上海第九制药厂
产品。
2　方法
2.1　CX 对二甲苯致小鼠耳肿胀的保护作用
选取健康 NIH 系小鼠 50 只 , 体重(18±2)g , 雌雄各半 , 随
机分为 5 组 ,给样品剂量如表 1 所示。腹腔注射给受试样品 30
min后 , 每鼠左耳涂 30 μL 的二甲苯 , 右耳涂等量的蒸馏水对
照 , 2 h后脱颈椎处死小鼠 ,剪下双耳 , 用直径 8.5 mm 打孔器在
对称处取下耳片 ,扭力天平称重 , 左右耳重量差为肿胀度[ 2] 。
2.2　CX 对乙酸介导致毛细血管通透性增加的抑制作用
选取 40 只 NIH 小鼠 ,体重(20±2)g ,雌雄各半 , 随机分为 4
组 ,按下表 2 所示剂量口服给受试样品 30 min 后 ,尾静脉注射
0.5%伊文思蓝 5 mL/ kg , 5 min 腹腔注射 0.7%乙酸 10 mL/
kg , 30 min 后脱颈椎处死小鼠 ,腹腔注入 5 mL NS ,轻揉小鼠腹
部 2～ 3 次 ,然后打开腹腔 , 收集 3 mL 腹腔液 , 加入 NaOH 0.1
mol/ L 0.1 mL 处置 30 min 后 ,用 721 型分光光度计比色(波长
590 nm)[ 3 , 4]测定吸收度。
2.3　CX 对鸡蛋清致大鼠足趾肿胀的保护作用
选取(150±20)g 的 SD系大鼠 28 只 ,随机分 4 组 , 按表 3
剂量腹腔注射给受试样品 30 min 后 ,立即于鼠左后足跖内注射
30%的鸡蛋清 0.1 mL , 用毛细管放大法测量致炎前后大鼠足跖
体积的变化 ,致炎后于 0.5 、1 、2 h 测量足跖部体积[ 5] 。
2.4　CX 对鸡蛋清诱发大鼠足趾致炎性介质生成的试验
选取体重(200±20)g的 SD 系雄性大鼠 40 只 , 随机分为 4
组 ,每组 10只 , 按下表 4 腹腔注射分别给受试样品或溶媒对照
30 min 后 , 将 30%鸡蛋清 0.1 mL 注入后足足跖皮下 , 致炎 60
min 后 ,处死大鼠 , 立即自踝关节处剪下炎足 ,称重 ,剥皮后置于
5 mL 生理盐水中 ,浸 1 h ,离心浸泡液 , 取上清液 0.3 m L , 加入
KOH 0.5 mol/ L溶液 2 mL , 在 50 ℃水溶液中异构化 20 min ,加
甲醇溶液 5 mL 。用紫外分光光度计于 278 nm 波长测定 PGE2
含量[ 6] 。
2.5　CX 对细胞膜脆性的保护作用
按Glenn 法[ 7]将大鼠血液用肝素抗凝 , 离心弃血液将 RBC
用 0.15 mol/ L、pH 7.4 磷酸缓冲液洗涤数次 , 然后配成 5%RBC
悬液。按表 5 给受试样品剂量。每试管中分别加不同剂量 CX
或 Cor 0.3 mL ,再加上 RBC 悬液 4.7 m L ,充分混匀 ,在 53 ℃水
溶液加热 20 min ,取出后迅速用冰水冷却 , 离心沉淀 , 取上清液
用 721 型分光光度计在 540 nm 波长测定吸收度。
2.6　CX的急性毒性实验
称取 100 mg CX 置于 50 mL 的容量瓶 ,用 0.4 mL 的二甲
基亚砜(DMSO)溶解 ,待完全溶解后 ,滴入 6 滴吐温 80 , 制成略
呈黄色透明液体 , 再加入生理盐水定容至 50 m L ,制成乳黄色的
混悬液供实验用。采用对小鼠腹腔注射给药途径 ,测试其最大
耐受量 , 实验时选取健康 NIH 小鼠10 只 ,体重(20±2)g ,每隔 2
h 腹腔注射 CX(2 mg/ mL)0.6 mL , 连续注射 5 次 , 连续观察 7
d , 动物均健康无死亡。得到小鼠 对 CX 腹腔注射最大耐受量
大于 300 mg/kg。
3　结果
3.1　CX对二甲苯致小鼠耳肿胀的保护作用
结果见表 1 所示。结果表明:CX 受试品能显著抑制二甲
苯对鼠耳肿胀致炎作用 , 且具明显的量效关系。
表 1　CX对二甲苯致小鼠耳肿胀的保护作用
组别 N 剂量/
mg·kg-1
肿胀度/
mg
抑制率/
%
NS 10 8.8±1.2 -
CX 9 2.5 5.3±1.1＊＊ 39.98
CX 10 1.25 6.7±1.2＊＊ 23.67
Cor 10 20 4.9±0.9＊＊ 44.17
　　与 NS 组比较:＊＊P <0.01
3.2　CX对乙酸介导致毛细血管通透性增加的抑制作用
CX能明显抑制乙酸介导致毛细血管通透性增加 , 且有明
显的量效关系。见表 2。
表 2　CX对乙酸介导致小鼠毛细血管
通透性增加的抑制作用
组别 N 剂量/
mg·kg-1
伊文思蓝
OD值
抑制率/
%
NS 8 0.129±0.018
CX 8 2.5 0.084±0.016＊＊ 33.88
CX 8 1.25 0.095±0.020＊＊ 24.81
Cor 9 20 0.079±0.016＊＊ 38.76
　　与 NS 组比较:＊＊P <0.01
3.3　CX对鸡蛋清致大鼠足趾肿胀的保护作用
CX对鸡蛋清致大鼠足肿胀有显著的抑制作用 , 见表 3。
3.4　CX对鸡蛋清诱发大鼠足趾致炎性介质生成的试验
CX均明显的降低致炎足趾 PGE2 的含量 , 提示其可以显著
抑制鸡蛋清诱发大鼠足趾致炎介质的生成。见表 4。
3.5　CX对细胞膜脆性的保护作用
CX能够抑制红细胞内血红蛋白的释放 , 从而提示 CX 对
RBC 膜具有明显稳定作用。见表 5。
表 3　对鸡蛋清致大鼠足跖肿胀的保护作用
组别 N 剂量 /
mg·kg -1
肿胀度 /mL
0 .5 h 1 h 2 h
NS 9 1.31±0.48 0.81±0.18 0.75±0.24
CX 8 1 .25 0.61±0.16＊＊ 0.75±0.14＊＊ 0.50 ±0.21＊
CX 8 2.5 0.57±0.15＊＊ 0.54±0.26＊ 0.46 ±0.17＊
Ind 9 10 0.57±0.21＊＊ 0.52±0.18＊ 0.48 ±0.18＊
　　与 NS 组比较:＊P <0.05 , ＊＊P<0.01
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广东药学院学报(ACAD J GCP)　2001 , 17(1)
表 4　对鸡蛋清诱发大鼠足趾致炎性介质生成的试验
组别 N 剂量/mg·kg -1 PGE2 吸收度
NS 10 0.109±0.025
CX 10 2.50 0.055±0.019＊＊
CX 10 1.25 0.063±0.018＊＊
Cor 10 10 0.059±0.026＊＊
　　与 NS 组比较:＊＊P<0.001
表 5　对 RBC 膜脆性的保护作用的试验
组别 n 终浓度/ mol·L-1 OD450 nm值
NS 10 1.857±0.222
CX 10 1.14×10-4 0.429±0.080＊＊
CX 10 4.56×10-6 0.436 ± 0.278＊＊
CX 10 2.28×10-6 0.457±0.021＊＊
Cor 10 6 mg/ mL 0.347±0.035＊＊
　　与 NS 组比较:＊＊P<0.01
3.6　CX 的急性毒性实验
小鼠对 CX 腹腔注射最大耐受量大于 300 mg/kg。
3　讨论
本文报道了 1 , 6-二羟基-3 , 5-二甲氧基酮(CX)的毒性 、抗
急性炎症作用及其机理初步研究。研究表明 , CX 对二甲苯所
致的小鼠耳肿胀 、乙酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增加 , 鸡蛋
清所致的大鼠足肿胀这三种急性炎症有明显的抑制作用。对
其抗炎作用的作用机理初步研究表明其具有直接的抗炎作用 ,
稳定 RBC 膜 , 提示其有稳定溶酶体膜 , 抑制溶酶体的释放及其
致炎作用;显著降低炎症组织 PGE2 的含量 ,说明能够抑制 PG
合成释放及致炎活性;抑制脂质过氧化物 MDA 含量 , 有一定的
清除自由基作用[ 8] 。实验显示的该化合物显著抗炎作用 ,可能
与上述的因素有关。毒性试验表明穿心草 酮腹腔注射的最
大耐受量大于 300 mg/ kg 。
参考文献
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术出版社 , 1986.1728.
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理学与毒理学杂志 , 1987 , 1(2):93.
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[ J] .中草药 , 1999 , 31(5):358.
(收稿日期:2000-04-13)
rHuEPO体外促红细胞生成作用的观察
石　瑛　徐桢琦　王豫生 (广州白云山制药总厂药物研究所 ,广东 广州 510515)
摘　要　通过体外培养 ,检测了重组人红细胞生成素注射液(rHuEPO)样品和标准品的促 CFU-e集落生成作用.结果表明:试品和
标准品均能明显促进 CFU-e集落生成 ,且二者作用相当。
关键词　重组人红细胞生成素;体外培养;促红细胞生成
中图号　R967　文章编号:1006-8783(2001)01-0035-02　文献标识码:A
　　CFU-e系指红细胞集落生成单位 , 是红系血发生的一个重
要环节。在小鼠胚胎发育 10 d 后 , 卵黄囊的造血机能减退 , 胎
肝开始红系血发生过程 ,处于这一阶段的红系造血干细胞表面
存在着大量的 EPO 受体 , 因而在 EPO 的刺激下能够增殖分
化[ 1] 。所以 ,通过体外检测 CFU-e 集落形成与 EPO 之间的依
赖关系 ,可以评价 EPO 刺激红系血发生的活性水平。
重组人红细胞生成素(rHuEPO)是近年来投入使用的基因
工程产品 , 在临床上主要用于肾性贫血的治疗。我们曾利用
CFU-e集落形成法研究了广州白云山制药总厂与新绿洲生物
技术研究所合作生产的 rHuEPO 的 体外促红细胞生成作用 , 现
将结果报道如下。
1　材料和仪器
1.1　动物　胎鼠取自怀孕 13.5 d 的 NH 母鼠。
1.2　药品　EPO 标准品(10 IU/ mL , 中国药品生物制品检定
所提供), EPO 样品(广州白云山制药总厂与新绿洲生物技术研
究所合作生产 ,批号:960311)。
1.3　试剂　DMEM 培养基(GIBCO 产品), 2-巯基乙醇(2-ME ,
Sigma产品 ,浓度为 10-4mol/ L , 消毒储存于冰箱备用), 2.7%
甲基纤维素(按文献[ 2] 所述方法配置), 10%BSA(以等浓度
HAS 代替), BCS(杭州四季青生物材料研究所生产)。
2　方法
2.1　胎肝细胞悬液的制备[ 3]
在无菌条件下 , 将胎鼠逐只自母体取出 ,保存在冷的 Hanks
液中。 分离胎肝并转入约 1 mL 的 DMEM 培养液(含 10%
BCS)中 , 并抽提成细胞悬液。冰浴静止片刻后 , 用装有 4 号针
头的注射器将将上层悬液吸出后再加入 1 m L 含 10%BCS 的
DMEM 培养液 ,使细胞充分混匀 , 记数有核细胞数并用培养液
稀释到细胞浓度为 106 个/ mL。
2.2　培养过程
2.2.1　将 EPO 标准品及样品分别依次稀释为 1000、500、 250、
125 、62.5 mU/ mL 的溶液。
2.2.2　分别吸取 0.3 mL 2-ME(10-4 mol/ L)、0.3 mL 10%
HSA 、0.9 mL BCS 、0.3 mL 有核细胞(3×105)混匀后 , 再与不
同浓度的 EPO 稀释液 0.3 m L 混合 , 致使 EPO 的终浓度为
100 、50.0 、25.0、12.5、6.25 mU/ mL。
2.2.3　将上述混合好的培养液与 2.7%的甲基纤维素 0.9 mL
混匀后分别吸取 1 mL , 加入直径 35 mm 的培养皿中 , 在饱和
湿度 、φ=5% CO2 、37 ℃条件下培养 48 h。标准品及试品 EPO
均为每个浓度培养 3 份 , 并同时设空白对照。
2.2.4　集落记数方法参照文献[ 2] ,在放大 100 倍的显微镜下 ,
35
第 17卷第 1 期 广　东　药　学　院　学　报 Vol.17 No.1
2001 年 3 月 ACADEM IC JOURNAL OF GUANGDONG COLLEGE OF PHARMACY Mar.2001