全 文 :甘肃不同产地黄芩茎叶的抗炎作用研究
*
杨志军1,2,李 晶1,杨秀娟1,耿广琴1,邓 毅1,2**
(1甘肃中医学院,兰州 730000;2甘肃省中药药理与毒理学重点实验室,兰州 730000)
摘 要 目的:研究甘肃不同产地黄芩茎叶水煎液的抗炎作用。方法:采用 1%角叉菜胶建立大鼠足肿胀模型、2%角叉菜胶
建立大鼠胸膜炎模型,观察甘肃不同产地黄芩茎叶水煎液的抗炎活性。检测模型大鼠的足肿胀度及肿胀足中前列腺素 E2(PGE2)
含量,检测胸膜炎大鼠血清中一氧化氮(NO)及肿瘤坏死因子 α(TNF-α)含量,探讨其抗炎作用。结果:致炎 3h 和 4h 时,不同产地
黄芩茎叶水煎液(6g /kg)均能显著降低大鼠足肿胀度,均能降低大鼠足组织 PGE2 含量,其中漳县和陇西产黄芩茎叶的作用较强;不
同产地黄芩茎叶水煎液(6g /kg)均能显著降低胸膜炎大鼠血清 NO 和 TNF-α 含量;其中其中漳县和陇西产黄芩茎叶的作用较强。
结论:甘肃不同产地黄芩茎叶均有显著的抗炎作用,其中甘肃陇西、漳县产黄芩茎叶抗炎作用较优。
关键词 黄芩茎叶;抗炎作用;产地
黄芩首载于《神农本草经》,黄芩虽非甘肃道地药材,但由
于近年来栽培面积大、产量高,临床疗效好,已被确定为甘肃
十大陇药之一。黄芩传统药用部位为唇形科植物黄芩 Scutel-
laria baicalensis Georgi 的干燥根[1],但为扩大药源,目前对其茎
叶的研究已日益成为热点,本项目对甘肃陇西、漳县、渭源、岷县
四个不同产地黄芩茎叶的抗炎作用进行比较研究并探讨机制,
为黄芩茎叶的开发利用提供实验依据。
1 材料和方法
1. 1 试验药物 于黄芩栽培次年 10 月底在当地采集甘肃陇
西、漳县、渭源、岷县四个不同产地的黄芩茎叶,经甘肃中医学院
杜弢教授鉴定为唇形科植物黄芩(Scutellaria baicalensis Georgi)
茎叶。分别取四个不同产地黄芩茎叶适量,洗去泥沙,干燥后切
制。煎煮时第一次加 10 倍量的水,浸泡 30min,文火煎煮
50min,过滤。第二次加 8 倍量的水,文火煎煮 40min,过滤,合
并两次滤液,将滤液水浴浓缩为含生药 1g /ml的浓缩液,高压灭
菌,4℃以下储存。
参照相关文献[2],采用紫外分光光度法,以黄芩苷为对照,
在波长 415nm处,测得四个不同产地黄芩茎叶水煎液中总黄酮
含量分别为:陇西 4. 08%,漳县 3. 12%,渭源 1. 54%,岷县 1.
48%。采用 HPLC法检测四个不同产地黄芩茎叶中黄芩苷含
量,陇西 17. 97mg /g,漳县 18. 24mg /g,渭源 16. 23mg /g,岷县 15.
40mg /g。阿司匹林泡腾片,阿斯利康制药有限公司,批号
1304032。
1. 2 动物 SPF级 Wistar大鼠 168 只,雌雄各半,体重 200 ±
20g,由甘肃中医学院实验动物中心提供(合格证号:SCXK(甘)
2011-0001) ,自由摄食、饮水,喂标准饲料(由甘肃中医学院实验
动物中心提供) ;饲养温度:20 ~ 24 ℃,相对湿度:40% ~50%。
1. 3 试剂 角叉菜胶,Sigma 公司,批号 069K0023;前列腺素
E2(PGE2)试剂盒,批号 20120406;一氧化氮试剂盒,批号
20140423;肿瘤坏死因子-α (TNF-α)ELISA 试剂盒,批号
23015453,以上试剂盒均由南京建成生物工程研究所提供。
1. 4 仪器 MODEL680-酶标仪,美国伯乐公司;UV-2401PC
紫外可见分光光度计,日本岛津公司;PV-200 足跖容积测量仪,
成都泰盟软件有限公司。
1. 5 方法
1. 5. 1 大鼠足肿胀试验[3] 大鼠 84 只,随机分为 7 组,即空
白组、模型对照组、阿司匹林对照组、渭源、漳县、岷县、陇西产黄
芩茎叶组,每组 12 只。其中空白组、模型对照组灌胃等体积的
生理盐水,阿司匹林组灌胃阿司匹林 100mg /kg,其余各组灌胃
不同产地黄芩茎叶 6g /kg,1 次 /d,连续 5d。末次给药前 30min
采用足跖容积测量仪测量足跖至踝关节部的容积(即 Vn)。给
药 1h后除空白组外,其余各组大鼠右后肢足跖部皮下注射 1%
角叉菜胶 0. 1ml致炎,再测量致炎后 0. 5h、1h、2h、3h、4h 大鼠足
跖至踝关节部的容积(Vt) ,并计算肿胀度。肿胀度(ml)= Vt -
Vn。参照文献方法[4],末次测定足肿胀度后,处死大鼠,在踝关
节上 0. 5cm处剪下肿胀足跖,将组织匀浆,采用 ELISA 法,按照
试剂盒说明检测组织中 PGE2 含量。
1. 5. 2 大鼠胸膜炎试验[5] 分组同上,空白组、模型组给予等
体积的生理盐水,醋酸地塞米松组给予醋酸地塞米松 3mg /kg,
其余各组灌胃不同产地黄芩茎叶 6g /kg,1 次 /d,连续 8d,末次给
药 60min后,各组大鼠分别用乙醚轻度麻醉,仰卧位固定,减去
右侧肋上毛,用酒精消毒皮肤。将右上肢下第七、八肋骨间皮肤
用剪刀剪一小切口,暴露肋间肌肉,在肌肉切口处向右胸膜腔内
注入 2%角叉菜胶 2ml /kg,空白组则注入等体积生理盐水,致炎
后 4h 各组再给药一次,致炎 8h 后股动脉取血,3000rpm 离心
15min,制备血清备用。用硝酸还原酶化学比色法测定 NO 含
量,用 ELISA 法检测 TNF-α 含量,所有操作均按试剂盒说明书
进行。
2 结果
2. 1 对角叉菜胶致炎大鼠足肿胀的影响 结果显示,致炎 2h、
3h、4h时,阿司匹林对照组大鼠足跖肿胀度显著低于模型组;致
炎 3h、4h时,四个不同产地黄芩茎叶组大鼠足跖肿胀度显著低
于模型组;致炎 4h时,陇西、漳县组大鼠足跖肿胀度显著低于渭
源、岷县组,见表 1。
351中药药理与临床 2015;31(1)
* 甘肃省高校基本科研业务费项目 (编号 BH2012-020) **通讯作者
DOI:10.13412/j.cnki.zyyl.2015.01.049
表 1 甘肃不同产地黄芩茎叶对角叉菜胶致炎大鼠足跖肿胀度的影响(珋x ± s)
组别
剂量
(g /kg)
鼠数
(只)
致炎后不同时间大鼠足跖肿胀度(ml)
0. 5h 1h 2h 3h 4h
模型对照 12 0. 16 ± 0. 11 0. 23 ± 0. 18 0. 41 ± 0. 29 0. 65 ± 0. 17 0. 89 ± 0. 19
阿司匹林 0. 1 12 0. 10 ± 0. 06 0. 11 ± 0. 12 0. 12 ± 0. 10* 0. 18 ± 0. 06* 0. 23 ± 0. 04*
漳县黄芩茎叶 6. 0 12 0. 14 ± 0. 13 0. 20 ± 0. 10 0. 30 ± 0. 14 0. 32 ± 0. 14* 0. 41 ± 0. 20* #
渭源黄芩茎叶 6. 0 12 0. 18 ± 0. 12 0. 24 ± 0. 20 0. 32 ± 0. 09 0. 44 ± 0. 17* 0. 69 ± 0. 25*
岷县黄芩茎叶 6. 0 12 0. 12 ± 0. 08 0. 22 ± 0. 06 0. 33 ± 0. 12 0. 39 ± 0. 12* 0. 68 ± 0. 29*
陇西黄芩茎叶 6. 0 12 0. 11 ± 0. 10 0. 22 ± 0. 15 0. 32 ± 0. 14 0. 33 ± 0. 17* 0. 39 ± 0. 29* #
与模型组比较 * P < 0. 05;不同产地组间比较 # P < 0. 05
2. 2 对致炎大鼠足组织 PGE2 含量的影响 结果显示,模型组
大鼠足跖炎症组织中 PGE2 含量显著高于空白组;与模型组比
较,漳县、渭源、岷县、陇西四个不同产地黄芩茎叶组大鼠足跖炎
症组织中 PGE2 含量显著降低;不同产地组间比较,漳县、陇西
组大鼠足跖炎症组织中 PGE2 含量显著低于岷县、渭源组,见表
2。
表 2 甘肃不同产地黄芩茎叶对大鼠足跖组织 PGE2 含量的影响(珋x ± s)
组别 剂量(g /kg) 鼠数(只) PGE2(ng /ml)
空白对照 12 12. 54 ± 2. 45**
模型对照 12 25. 31 ± 3. 23
阿司匹林 0. 1 12 15. 28 ± 1. 96*
漳县黄芩茎叶 6. 0 12 16. 44 ± 2. 62* #
渭源黄芩茎叶 6. 0 12 20. 01 ± 1. 24*
岷县黄芩茎叶 6. 0 12 19. 29 ± 2. 28*
陇西黄芩茎叶 6. 0 12 16. 85 ± 2. 71* #
与模型组比较 * P <0. 05,**P <0. 01;不同产地组间比较 # P <0. 05
2. 3 对胸膜炎大鼠血清 NO、TNF-α含量的影响 结果显示,模
型组大鼠血清中 NO、TNF-α 含量均显著高于空白组;与模型组
比较,各给药组大鼠血清中 NO、TNF-α含量均显著降低;不同产
地组间比较,陇西、漳县组大鼠血清中 NO、TNF-α含量显著低于
渭源、岷县组,见表 3。
表 3 甘肃不同产地黄芩茎叶对胸膜炎大鼠血清 NO、TNF-α 含量
的影响(珋x ± s)
组别
剂量
(g /kg)
鼠数
(只)
NO
(μmol /L)
TNF-а
(ng /ml)
空白对照 12 11. 75 ± 1. 70** 79. 15 ± 7. 72**
模型对照 12 26. 02 ± 3. 48 201. 13 ± 5. 15
地塞米松 0. 003 12 14. 21 ± 1. 56* 95. 62 ± 7. 36*
漳县黄芩茎叶 6. 0 12 18. 15 ± 4. 05* # 121. 66 ± 2. 60* #
渭源黄芩茎叶 6. 0 12 22. 15 ± 3. 27* 156. 57 ± 8. 50*
岷县黄芩茎叶 6. 0 12 22. 95 ± 2. 48* 163. 78 ± 5. 84*
陇西黄芩茎叶 6. 0 12 17. 62 ± 3. 42* # 124. 32 ± 3. 40* #
与模型组比较 * P <0. 05,**P <0. 01;不同产地组间比较 # P <0. 05
3 讨论
黄芩在临床上已有二千多年的应用历史,由于传统药用部
位为干燥根,因此产量较高的黄芩茎叶被大量废弃。然而,在我
国北方各省及云南部分地区却有将黄芩茎叶代茶饮用的历史。
甘肃境内黄芩主产于陇西、渭源、漳县,次产于岷县、宕昌、河西
等地,目前甘肃各产地黄芩产量已约占全国产量的 30%。现代
研究证实,黄芩茎叶具有较强的抗炎、解热、镇痛等作用[6],但
目前对黄芩茎叶提取物或单体的药效学研究较多,而传统水煎
液的药效研究相对较少。故本项目选用甘肃漳县、渭源、岷县、
陇西四个不同产地的黄芩茎叶水煎液作为研究对象,探讨甘肃
不同产地黄芩茎叶的抗炎作用及作用机制。
炎症几乎可以发生于机体各组织和器官,是机体的一种防
御性免疫反应,也是许多疾病的共同病理基础。炎症早期,炎症
介质刺激血管,使血管扩张,血管内皮间隙扩大,血管壁通透性
增强。血浆内的液体、蛋白质和白细胞等渗出到组织间隙,随
着渗出的增加,造成组织肿胀。因此,炎性渗出组织肿胀是炎
症早期的重要指标。角叉菜胶诱导的大鼠足跖肿胀是筛选、研
究抗炎药物的经典方法,该模型为急性非特异性炎症模型,主要
是前列腺素释放引起局部充血、水肿、渗出等病理过程,PGE2 为
炎症因子之一,存在于炎症组织中,可与缓激肽、白三烯等炎症
介质起协同作用,加剧炎症反应[7]。角叉菜胶诱导的大鼠急性
胸膜炎是一种急性炎症模型,该模型在炎症反应时,巨噬细胞、
中性粒细胞、血小板等炎细胞激活释放大量的炎症介质,如组
胺、NO等。NO作为一种重要炎症介质直接参与炎症反应过
程。体内 NO的异常升高,可导致血管过度扩张,渗出增加,同
时还可以促进 PGE2、TNF-α和 IL-1 等炎症介质的释放,加重炎
症反应。TNF-α是重要的致炎因子,可诱导血管内皮细胞表达
细胞间黏附分子 CD54 和分泌 IL-1、IL-8 等具有增强炎症反应
和趋化作用的细胞因子,从而促进中性粒细胞和单核细胞与血
管内皮细胞黏附,促进局部炎症反应发生[8,9]。
本实验结果显示,甘肃四个不同产地的黄芩茎叶水煎液对
角叉菜胶诱导的足跖肿胀大鼠有显著的抑制作用,且能降低炎
症组织中 PGE2 含量;能显著降低胸膜炎大鼠血清中 TNF-α、NO
的含量。表明黄芩茎叶水煎液有显著的抗炎作用,其作用机制
可能是通过抑制体内 PGE2、NO 合成或释放,降低细胞因子
TNF-α的合成与分泌,减少炎性渗出,从而发挥抗炎作用。综上
所述,甘肃陇西、漳县产黄芩茎叶的抗炎效果显著优于甘肃渭
源、岷县产黄芩茎叶。这与采用紫外分光光度法、HPLC 法测定
的四个不同产地黄芩茎叶中总黄酮含量、黄芩苷含量高低基本
一致,表明黄芩茎叶的抗炎作用与其所含的总黄酮含量、黄芩苷
含量密不可分。
参考文献
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社,2010∶ 282 ~ 283
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J Pineal Res,1997;23(2)∶ 106 ~ 116
Anti-inflammatory effect on stems and leaves of Scutellaria baicalensis from different areas of Gansu Province
Yang Zhijun1,2,Li Jing1,Yang Xiujuan1,Geng Guangqin1,Deng Yi1,2
(1 Gansu College of TCM;2 Gansu Province Key Laboratory of Pharmacology and Toxicology of TCM,Lanzhou 730000)
Objective:To study the anti-inflammatory effects on stems and leaves of Scutellaria baicalensis from different areas of Gansu Province.
Methods:Paw edema model and pleurisy model induced by carrageenan in rats were used for anti-inflammatory experiments. Paw swelling
degrees and prostaglandin E2 (PGE2)content in footpad were determined,and the content of nitric oxide (NO)and tumor necrosis factor al-
pha (TNF-α)in serum of pleurisy rats were measured to explore the anti-inflammatory effect. Results:After given with stems and leaves of
Scutellaria baicalensis decoction by intragastric administration (6g /kg) ,the rat paw swellings were reduced at 3h or 4h (P < 0. 05) ,and the
content of PGE2 in rat paw tissue was decreased (P < 0. 05) ,The NO and TNF-α content in serum were significantly reduced the pleurisy
rats (P < 0. 05) ,the effects of production of Zhangxian and Longxi are stronger (P < 0. 05). Conclusion:There was a significant anti-in-
flammation activity on stems and leaves of Scutellaria baicalensis in different areas of Gansu Province,The anti-inflammatory effect of produc-
tions from Longxi and Zhangxian are better.
Key words Stems and leaves of Scutellaria baicalensis(黄芩茎叶) ;anti-inflammatory
玉郎伞对大鼠主动脉条收缩的影响
*
吕纪华,张士军,陈春霞,黄仁彬,焦 杨**
(广西医科大学药学院,南宁 530021)
摘 要 目的:通过观察玉郎伞水提物对大鼠胸主动脉条收缩的影响研究其降压机制。方法:制备大鼠胸主动脉螺旋条,观
察玉郎伞对去甲肾上腺素(NE)、氯化钾(KCl)和氯化钙(CaCl2)引起的主动脉条收缩的影响。结果:玉郎伞水提物 6g 生药 /L、12g
生药 /L可使 NE、KCl和 CaCl2 引起的大鼠胸主动脉条量 -效收缩曲线右移,最大效应降低。其效应与维拉帕米相似,可选择性地阻
断电压依赖性钙通道,而对受体控制性钙通道无影响。结论:玉郎伞的降压机制可能与其钙通道阻滞作用有关。
关键词 玉郎伞;主动脉条;电压依赖性钙通道;受体控制性钙通道
玉郎伞是蝶形花科植物疏叶崖豆 Millettia pulchra Kurz var-
laxior (Dunn)Z. Wei 的块根,研究表明[1 ~ 3],玉郎伞具有降低
血压、减慢心率、抑制心肌收缩力、增加冠脉流量、保护缺血心肌
等多方面作用,其效应与钙拮抗剂的药理作用相似,可能是通
过抑制细胞 Ca2 +内流从而达到其药理作用。本实验通过观察
玉郎伞水提物对大鼠主动脉条收缩的影响,进一步研究其作用
及作用机制,为玉郎伞的开发利用提供实验依据。
1 材料和方法
1. 1 试验药物 玉郎伞经广西医科大学药学院黄仁彬教授鉴
定为蝶形花科植物疏叶崖豆 Millettia pulchra Kurz var-laxior
(Dunn)Z. Wei的块根。玉郎伞水提物的制备:玉郎伞饮片加
蒸馏水煎煮,过滤,滤液离心 10min,上清液用微波真空干燥器
浓缩,得浓缩液,计算其生药质量浓度为 2. 85g /ml。盐酸维拉
帕米注射液,上海禾丰制药有限公司。上述药品均在实验时用
Krebs液配成所需浓度。
1. 2 动物 Wistar 大鼠,雌雄兼用,体重 250 ± 10g,由广西医
科大学实验动物中心提供,生产许可证号 SCXK(桂)2003-0003。
1. 3 试剂 重酒石酸去甲肾上腺素注射液;Krebs 液组成
(mmol /L)[4]:NaCl 118. 0,KCl 4. 75,CaCl2 1. 8,MgSO4 1. 2,
KH2PO4 1. 2,NaHCO3 25,Glu 11,pH 7. 4。无 Ca
2 + Krebs 液:正
常 Krebs液中去掉 CaCl2,加入 EDTA 0. 01mmol /L。无 Ca
2 + 高
K + Krebs液:为无 Ca2 + Krebs液中含有 K + 40 mmol /L。其余试
剂均为国产分析纯。
551中药药理与临床 2015;31(1)
* 广西科技基础条件平台建设(12-97-20,10-108-19) ,广西自然科学基金重点项目(2011GXNSFD018030) ,南宁市科技攻关与新产品试制
(201102084C) ,南宁市青秀区科学研究与技术开发计划(2013S12) ,2012 年广西高等学校重点资助科研项目(桂教科研 No201202ZD023)
**通讯作者
DOI:10.13412/j.cnki.zyyl.2015.01.050