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椭圆叶花锚中熊果酸含量的测定



全 文 :《现代农业科技》2009年第 11期
椭圆叶花锚 (Halenia elliptica D. Don)为龙胆科花锚属
植物,是藏药中用于治疗肝胆系统疾病的常用植物药,泛称
“藏茵陈 ”。花锚的主要化学成分为山酮 (Xanthone)、黄酮
(Flavone)和三萜(Triterpene)类化合物,已经分离鉴定了 15
种山酮和黄酮成分。熊果酸体外对 G+和 G-菌及酵母菌均有
抗菌活性,还有抗糖尿病、抗溃疡及降低血脂的作用。近年
来的研究显示,熊果酸除具有抗突变、抗促癌、抗氧化作用
外,对消化道肿瘤细胞和白血病细胞还有细胞毒和诱导细
胞凋亡的作用。
1 材料与方法
1.1 供试材料
供试材料为椭圆叶花锚,于 2008 年 8 月初
采自青海大通宝库乡和平安青沙山,将地上部
分自然阴干,粉碎后备用。
1.2 仪器与试剂
1.2.1 仪器 。Waters515 高效液相泵 ,Waters
2996DAD 检测器 ,Waters Empower 色谱工作
站,Waters 色谱柱恒温箱,WFH-203B 三用紫
外分析仪(上海精科实业有限公司生产),电子
分析天平 ,KQ-250DB 型数控超声波清洗器
(昆山市超声仪器有限公司生产),RT-9 型中
药粉碎机(浙江省缙云县超力机械厂生产),硅
胶 Gf 254薄层板(青岛海洋化工生产)。
1.2.2 试剂。甲醇为色谱纯(山东禹王实业有
限公司禹城化工厂生产 ),娃哈哈纯净水 ,氯
仿、乙酸乙酯、甲醇、浓硫酸、磷酸均为分析纯。
熊果酸对照品 (中国药品生物制品检定所生产),纯度均
大于 98%。
1.3 实验方法
1.3.1 对照品溶液制备。准确称取熊果酸对照品,加甲醇制
成 160μg/mL 的熊果酸对照品溶液。
1.3.2 样品溶液制备 。分别取两地花锚样品 ,每份样品各
2.0g,5 次重复。将称好的样品置于具塞锥形瓶中 ,准确加
入20mL 体积分数为 95%的乙醇,超声处理 2h,过滤,滤渣用
95%的乙醇洗涤 2 次,合并滤液,于 25mL 容量瓶中定容,摇
匀,静置。取适量上述样品液过 0.45μm 微孔滤膜,在选定的
色谱条件下测定有效成分含量。
1.3.3 熊果酸鉴别。取样品溶液和对照品溶液各 10μL 点于
同一硅胶 G 板上,以氯仿∶乙酯(体积比)=1∶1 为展开剂,展
开后取出,晾干。以硫酸∶甲醇(体积比)= 1∶2 为显色剂,置烘
箱中烘至显色清晰。在样品色谱中,与对照品相应的位置
上,显相同紫红色的斑点。
1.3.4 熊果酸含量测定的色谱条件 。THERMO C18 色谱
柱(4.6mm×250mm,5μm);流速 1.0mL/min;柱温 30℃;流
动相甲醇-0.4%磷酸(85∶15);检测波长 215nm;色谱分离图
见图1。
2 结果与分析
2.1 线性关系考察
用 25μL 微量进样器吸取熊果酸 160μg/mL 对照品溶
液 2.0μg、4.0μg、6.0μg、8.0μg、10.0μg、12.0μg 注入液相色谱
仪,记录峰面积 ,以熊果酸对照品进样量 (μg)为横坐标,
峰面积为纵坐标 ,绘制标准曲线 。结果表明 ,熊果酸在
0.32~1.60μg之间线性关系良好。回归方程为 y=1 025 388 x-
103 368.8(R2=0.999 2)。
2.2 精密度实验
准确吸取熊果酸对照品溶液 5μL,分别重复进样 5 次,
峰面积积分值 RSD 为 0.93%。
2.3 稳定性实验
准确吸取熊果酸样品溶液各5μL,于 0h、3h、6h、9h、12h
(下转第 20 页)
椭圆叶花锚中熊果酸含量的测定
李志军
(青岛农业大学,山东青岛 266109)
摘要 用薄层色谱法和反相高效液相色谱法对青海两地区野生椭圆叶花锚中熊果酸含量进行定性定量分析。结果表明,超声法提取
椭圆叶花锚中的熊果酸含量较高,青沙山地区花锚中熊果酸含量高于大通宝库乡。
关键词 花锚;熊果酸;反相高效液相色谱;含量测定
中图分类号 S58;Q946 文献标识码 A 文章编号 1007-5739(2009)11-0016-01
作者简介 李志军(1961-),男,山东莱阳人,农艺师。研究方向:为野生
植物引种驯化。
收稿日期 2009-04-20
园艺博览
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《现代农业科技》2009年第 11期
表 2 9种藤本植物的特性表现
品种 攀援能力 覆盖能力 生长速度 季期变化 常绿或落叶
常春油麻藤 强 强 快 无 常绿
爬山虎 强 强 快 有 落叶
五叶地锦 强 强 快 有 落叶
紫藤 中 中 中 有 落叶
金银花 中 弱 中 有 半常绿
凌霄 强 强 快 有 落叶
常春藤 强 中 中 无 常绿
野蔷薇 弱 强 中 有 落叶
迎春花 弱 中 中 有 落叶
(上接第 16页)
测定峰面积积分值,RSD 为 1.09%。
2.4 重复性实验
各取同一样品 5 份,分别按照含量测定项下的方法测
定,记录熊果酸面积积分值,RSD 为 1.56%。
2.5 加样回收率
分别取已知含量的 5 份花锚样品各约 1g,精密加入熊
果酸对照品,按“1.3.2”法提取,在原色谱条件下测定,计算
回收率,平均回收率为 96.51%。
2.6 花锚样品中熊果酸的含量
分别取每份样品溶液 10μL 进行分析,并测定峰面积积
分值。计算得青沙山地区花锚熊果酸质量分数为 0.234%,大
通地区花锚熊果酸质量分数为 0.153%。可以看出,青沙山地
区花锚品质较好。
3 结论
3.1 提取方法的选择
比较乙醇超声和乙醇回流提取方法发现,超声提取熊果
酸含量较高,而且超声法所用时间短,设备简单,操作方便。
3.2 流动相选择
结合本实验结果并参考前人研究,甲醇和 H3PO4(0.4%)
作为流动相效果较好。
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效果非常好。通过栽培试验,根据不同的绿地环境条件,选
择不同的藤本植物材料,如附壁式绿化,可在建筑物墙面、
道路两旁的挡土墙等处选择吸附类的爬山虎、凌霄、常春
藤、五叶地锦;护栏式的绿化,可选择缠绕类的常春油麻藤、
金银花、野蔷薇;花架式的绿化,可选择缠绕类的常春油麻
藤、紫藤、金银花及凌霄。悬垂式绿化,可选择藤蔓类软枝植
物,如野蔷薇、迎春花。
2 种藤本植物混合搭配种植,可延长观赏期,创造出四
季景观,并改变单一藤本植物的视觉单调感,是一种值得提
倡的种植方式。其种植方式是采用常绿类与落叶类搭配,快
生与慢生搭配,阴性与阳性搭配。本试验中将爬山虎与常春
油麻藤混种,应用到附壁式垂直绿化中,春天爬山虎长得郁
郁葱葱,犹如一堵绿墙;夏天,开黄绿色小花;秋天,其叶子
变成橙黄色,使建筑物的色彩富于变化。爬山虎与常绿的常
春油麻藤混种,四季景观效果非常明显,并能保持四季常青,
且这 2 种植物生长速度快,一年半就能在 一面 4m 高的墙
面上形成一道亮丽的风景线。此外,试验中的以下搭配效
果也很好,如五叶地锦+常绿的常春油麻藤应用于附壁式
垂直绿化中;常绿的常春油麻藤+凌霄应用于花架式或护栏
式垂直绿化中;野蔷薇+迎春花应用于悬蔓式垂直绿化中。
2.3 讨论
通过种植试验,目前,单一藤本植物及 2 种藤本植物混
种的垂直绿化方式已在宜昌市的道路护坡、挡土墙、建筑物
及公园绿地、居住区等园林绿化中得到广泛应用,绿化美化
效果明显,取得了良好的社会及环境效应。
本文仅引种宜昌地区的 9 种藤本植物进行垂直绿化方
式的应用栽培,探讨了各种垂直绿化方式中植物材料的选
择与应用,具有一定的针对性和局限性。宜昌地区的藤本植
物资源非常丰富,大部分处于野生状态,今后还应引种驯化
野生藤本植物,以丰富其多样性,加强栽培技术,为完善其
在城市垂直绿化中的应用技术作进一步研究探讨。
3 参考文献
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