全 文 ：基于 RP-HPLC法的藏药麻花艽不同部位异荭草素含量的测定
聂颖杰，林鹏程* (青海民族大学化学与生命科学学院，青海西宁 810000)
摘要 ［目的］建立麻花艽(Gentiana straminea Maxim.)不同部位中异荭草素的 RP-HPLC检测方法。［方法］色谱条件为:Hypersil ODS
柱(4. 6 mm ×250. 0 mm，5 μm)，以 40%甲醇 －水溶液(含 0. 02 %磷酸)等度洗脱，流速 1 ml /min，柱温 35 ℃，检测波长 254 nm。［结果］
在设定的色谱条件下，异荭草素与其他组分达到基线分离，线性范围为 0. 089 9 ～ 0. 539. 0 μg，r = 0. 999 9。加标回收率为 99. 7%，RSD
为 0. 49%。［结论］方法快速、准确，结果可靠。
关键词 麻花艽;地上部位;地下部位;RP-HPLC
中图分类号 R284. 1 文献标识码 A 文章编号 0517 －6611(2010)14 －07341 －02
Content Determination of Isoorientin in Different Parts of Tibetan Medicine Gentiana straminea Maxim. Based on RP-HPLC Method
NIE Ying-jie et al (College of Chemistry and Life Sciences，Qinghai Nationalities University，Xining，Qinghai 810000)
Abstract ［Objective］The research aimed to establish the detection method of isoorientin from different parts of Gentiana straminea Maxim. by
reversed phase -HPLC. ［Method］The chromatographic conditions were as follows:Hypersil ODS column (4. 6 mm × 250. 0 mm，5 μm)，40%
methanol-H2O(containing 0. 02 % phosphoric acid)as a mobile phase，with flow rate of 1 ml /min，column temperature at 35 ℃，detection wave-
length at 254 nm. ［Result］Under the chromatographic conditions，isoorientin and other components reached the baseline separation. The linear
range was 0. 089 9 －0. 539 0 μg，r = 0. 999 9. The addition recovery was 99. 7%，with RSD of 0. 49% . ［Conclusion］The method is rapid and
accurate and the results are reliable.
Key words Gentiana straminea Maxim.;Aerial part;Underground part;RP-HPLC
基金项目 青海省科技厅项目(2006-N-141)。
作者简介 聂颖杰(1985 － )，男，山西临汾人，在读硕士，助教，从事中
藏药质量控制及评价研究。* 通讯作者，E-mail:qhlpc@
126. com。
收稿日期 2010-02-21
麻花艽(Gentiana straminea Maxim.)为《中国药典》(2005
年版)收载的秦艽类入药种类之一［1］。藏医以其全草入药，
用于治疗风湿性关节炎、肺病发烧、黄疸、皮疹、水肿和二便
不通等症［2］。藏药麻花艽不仅含有大量如龙胆苦苷等环烯
醚萜苷类化合物，还含有大量水溶性天然碳苷类黄酮，主要
为异荭草素。前期研究中，从麻花艽地上部分分离黄酮类化
合物得到大量的异荭草素也证明这一点。药理研究表明，异
荭草素具有清热解毒、抗凝血和抗菌等作用［3 －5］，亦有抗氧
化和抗甲状腺的作用［6］，可以作为藏药麻花艽质量控制的指
标之一。近年来，超声提取技术因其提取效率高、耗时短、成
本低等特点，在天然药物提取中得到广泛应用。为此，笔者
采用超声技术对麻花艽中异荭草素进行提取，建立藏药麻花
艽不同部位中异荭草素的分析方法，以期为麻花艽不同部位
异荭草素含量的测定及其品质评价提供参考。
1 材料与方法
1. 1 材料
1. 1. 1 研究对象。麻花艽于 2007 年 8 月采自青海省各州
县，由青海民族大学林鹏程教授鉴定为麻花艽(Gentiana stra-
minea Maxim.)。样品阴干，粉碎至 60目，冷藏保存。
1. 1. 2 主要试剂。甲醇，高效液相色谱专用试剂，由山东禹
王实业有限公司禹城化工厂生产;磷酸，AR 级，由北京红星
化工厂生产;娃哈哈纯净水;异荭草素对照品，自行分离得
到，波谱数据与文献报道一致，经归一化法检测，纯度都大于
98%。
1. 1. 3 主要仪器。Agilent 1100 高效液相色谱仪(配置:手
动进样器、在线脱气机、高压二元梯度泵、恒温柱温箱、DAD
检测器，Agilent 1100 色谱工作站);Hypersil ODS 色谱柱
(4. 6 mm ×250. 0 mm，5 μm);KQ3200b型超声波清洗器，由
昆山市超声仪器有限公司生产;ME235S电子天平，由赛多利
斯仪器有限公司生产。
1. 2 方法
1. 2. 1 对照品溶液的制备。精密称取异荭草素 1. 80 mg，加
入甲醇溶解并定容至 10 ml 量瓶中，配制成储备液。使用时
按比例稀释，配制成异荭草素质量浓度为 8. 99 μg /ml 的对
照品溶液。
1. 2. 2 供试品溶液的制备。精密称取麻花艽不同部位样品
(过 60目筛)0. 5 g，准确加入 10 ml甲醇，室温下超声提取 30
min，过滤，用 1 ml甲醇洗涤滤渣。重复提取 1 次，合并滤液，
用甲醇定容至 25 ml，用 0. 45 μm微孔滤膜过滤，备用。
1. 2. 3 色谱条件的选择。Hypersil ODS 色谱柱(4. 6 mm ×
250. 0 mm，5 μm)柱;以 40%MeOH-H2O(含 0. 02%H3PO4)等
度洗脱;检测波长 254 nm;流速 1 ml /min;柱温 35 ℃。
1. 2. 4 方法学考察。
1. 2. 4. 1 检测限的考察。按“1. 2. 3”色谱条件，当信噪比 S /
N = 3 时，对异荭草素的最低检测限进行测定。
1. 2. 4. 2 线性关系的考察。精密吸取对照品溶液 10、20、
30、40、50、60 μl，依次进样，按“1. 2. 3”色谱条件进样，测定峰
面积，以峰面积积分值(y)为纵坐标，对照品进样量(x)为横
坐标，绘制标准曲线，得回归方程。
1. 2. 4. 3 精密度试验 。精密吸取对照品溶液 10 μl，连续进
样 6 次，按“1. 2. 3”色谱条件进样，测定异荭草素峰面积积分
值，计算相对标准偏差(RSD)。
1. 2. 4. 4 重复性试验。精密称取麻花艽地上部分 6 份，每
份 0. 5 g，按“1. 2. 2”的方法制备供试品溶液，按“1. 2. 3”色谱
条件进样 10 μl，测定异荭草素峰面积积分值，计算异荭草素
含量的 RSD。
1. 2. 4. 5 稳定性试验 精密吸取对照品溶液，分别在 0、2、4、
8、12 h进样，，按“1. 2. 3”色谱条件进样，测定异荭草素峰面
积积分值，计算 RSD。
1. 2. 4. 6 加样回收率试验。精密称取同一已知含量的样品
安徽农业科学，Journal of Anhui Agri. Sci. 2010，38(14):7341 － 7342 责任编辑 姜丽 责任校对 况玲玲
DOI:10.13989/j.cnki.0517-6611.2010.14.171
5份，每份 0. 05 g，分别加入对照品溶液 25 ml，按“1. 2. 2”的
方法制备供试品溶液，准确吸取供试品溶液 10 μl，按“1. 2.
3”色谱条件进行，计算回收率。
1. 2. 5 样品含量的测定。取青海 5 个居群麻花艽地上、地
下部分，按“1. 2. 2”的方法制备供试品溶液，准确吸取 10 μl，
按“1. 2. 3”色谱条件进样，计算异荭草素的含量。
2 结果与分析
2. 1 对照品和样品的 HPLC色谱分析 在“1. 2. 3”色谱条
件下，待测成分有良好的分离度，均达到基线分离(图 1)。
注:a为标准品;b为地上部位;c为地下部分。1为异荭草素。
Note:a，Reference substance;b，Aerial parts;c，Underground parts. 1，Isoorientin.
图 1 对照品和样品的 HPLC色谱图
Fig. 1 HPLC chromatogram of reference substance and samples
2. 2 方法学考察结果
2. 2. 1 检测限考察。异荭草素最低检测限为 0. 72 ng。
2. 2. 2 线性关系考察。异荭草素峰面积对进样量的回归方
程为:y =1 729. 5x －193. 3，r =0. 999 9，线性范围为0. 089 9 ～
0. 539 μg。
2. 2. 3 精密度试验。异荭草素峰面积积分值的 RSD 为
0. 55%，表明仪器精密度良好。
2. 2. 4 重复性试验。测得异荭草素的平均含量为0. 650%，
RSD为 1. 40%，表明仪器重复性良好。
2. 2. 5 稳定性试验。在 12 h 内异荭草素峰面积积分值的
RSD为 0. 47%，说明对照品溶液在 12 h内稳定性良好。
2. 2. 6 加样回收率试验结果。测得异荭草素平均回收率为
99. 7%，RSD为 0. 49%。
2. 3 样品含量测定结果 由表 1 可知，青海 5 个居群麻花
艽地上部分异荭草素的含量普遍高于地下部分，且 5 个居群
中河南县的麻花艽中异荭草素无论是总量还是不同部位含
量都最高。单从异荭草素这一成分来看，河南县的麻花艽质
量最好。
表 1 青海 5个居群麻花艽异荭草素的含量
Table 1 Content of isoorientin in Gentiana straminea Maxim. from 5
populations of Qinghai %
居群
Population
地上部分
Aerial parts
地下部分
Underground parts
泽库县 Zeku County 0. 270 0. 153
祁连县 Qilian County 0. 366 0. 093
河南县 Henan County 0. 952 0. 146
同德县 Tongde County 0. 390 0. 093
玉树县 Yushu County 0. 592 0. 115
3 结论与讨论
藏药麻花艽中有效成分的质量控制及品质评价一直以
来多集中在其含有的环烯醚萜苷类成分上［7 －9］。麻花艽地
上部分作为新的药用部位，其中含有大量的异荭草素，应考
虑作为另一指标成分，结合龙胆苦苷等同时对麻花艽地上部
分进行质量控制，以形成多指标成分控制麻花艽地上部分质
量的有效体系。该研究首次建立了藏药麻花艽地上部分中
有效成分异荭草素的高效液相色谱分析方法，该法具有快
速、准确、重现性好等特点，适用于麻花艽地上部分质量控制
研究。且试验中发现，在水中加入 0. 02%磷酸可有效防止色
谱峰拖尾，有利于准确定量。
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