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当归藤水提物和醇提物急性毒性实验研究



全 文 :2012 年 7月第 9卷第 19期 ·实验研究·
CHINA MEDICAL HERALD 中国医药导报
[基金项目] 广西自然科学基金——创新研究团队项目(项目名称:中药
新药基础研究, 项目编号:2011GXNSFF018006);2011 年度广西壮族自
治区中医药管理局中医药民族医药自筹经费科研课题 (项目编号:gz-
zc1120)。
[作者简介] 卢森华(1985-),男,2009 级在读药物分析学硕士研究生,从
事药品质量控制方法研究。
[通讯作者] 陈勇(1961-),男,江西南昌人,教授,硕士生导师;研究方向:
中药及其制剂质量分析。
当归藤为紫金牛科酸藤子属植物当归藤(Embelia parv-
iflora Wall. ex A. DC.)的根与老茎 ,别名小花酸藤子 、筛箕
蔃、土当归等。 其味苦、涩,性温,具有补血、活血、益精壮阳、
强腰膝的功效。 常用于治疗血虚诸症、月经不调、闭经、产后
虚弱、腰腿酸痛、跌打骨折等症[1-2],在广西少数民族地区常用
它作当归使用,故民间流传有“谁人懂得筛箕蔃,不愁不生
养”之说,说明该药可治疗不孕症等 [3]。 当归藤还有温肾补血
作用,广西特产中成药“桂龙药膏”以该药材为原料。 陈家源
等 [4]从该药材的根茎乙醇提取物中分离得到 4 个结晶,其中
3个鉴定为正三十烷酸乙酯、正三十烷酸及 α-菠甾醇,另 1个
结晶初步分析为具侧链的羟基苯醌类成分。 杨瑞云、管海波
等 [5-6]用紫外分光光度法对当归藤中总黄酮提取工艺进行研
究及儿茶素含量的测定。经查阅文献目前尚未见该药材急性
毒性实验研究的报道。本文对当归藤的水提物和醇提物进行
急性毒性实验研究,旨在为当归藤的安全性做出估价,为其
临床用药提供参考,也为开展药效学的研究提供理论基础和
科学依据。
1 仪器与试剂
1.1 仪器
T2000 电子天平(美国双杰兄弟集团有限公司),恒温水
浴锅(上海亚荣生化仪器厂),RE-52AA 型旋转蒸发仪(上海
亚荣生化仪器厂)。
1.2 药物
当归藤药材采自广西金秀县, 经广西中医学院刘寿养
副教授鉴定为紫金牛科酸藤子属植物当归藤的根与老茎。水
提物制备:取当归藤粗粉 200 g,加 8 倍量水,浸泡后加热回
流提取 2 次, 每次 2 h, 滤过, 合并滤液。 滤液水浴浓缩至
2.25 g生药/mL,置冰箱备用。醇提物制备:取当归藤粗粉 23 kg,
加 8 倍量 95%乙醇,置多功能提取罐中提取 3 次,每次 2 h,
滤过,合并滤液。 提取液用旋转蒸发仪浓缩至无醇味。 取适
量,蒸馏水配成 2.25 g 生药/mL,置冰箱备用。
1.3 实验动物
SPF 级昆明种小鼠,体质量(20±2)g,雌雄兼用,由广西
医科大学实验动物中心提供, 动物生产许可证号:SCXK 桂
2009-0002,动物质量合格证号:0001757。小鼠分性别饲养于
空调室内,室温(22±2)℃,湿度(70±5)%,喂标准颗粒饲料,
自由饮水和摄食,照明时间随同自然变化。
2 方法与结果
2.1 预实验
选取 SPF 级昆明种小鼠 18 只,体质量(20±2)g,随机分
成三组,每组 6只,雌雄各半并分笼饲养。 实验前禁食 12 h,
当归藤水提物和醇提物急性毒性实验研究
卢森华 陈 勇 曾海生 张 龙 郑锡任 周 媛
广西中医学院药学院,广西南宁 530001
[摘要] 目的 对当归藤水提取物和醇提取物的急性毒性进行初步研究,评价其安全性,为新药开发提供理论依据。
方法 采用最大给药量测定法,小鼠灌胃给药测定当归藤水提取物和醇提物的半数致死量(median lethal dose,LD50)
或最大耐受量(maximum tolerated dose,MTD),研究其安全性。 结果 当归藤水提取物和醇提取物的毒性都很小,未
测得灌胃给药小鼠半数致死量 LD50,水提取物和醇提取物的 MTD > 90 g/kg,最大耐受量倍数相当成人(50 kg)用量
的 150倍。 结论 当归藤无明显毒性,临床常用量安全可行。
[关键词] 当归藤;急性毒性实验;最大耐受量
[中图分类号] R284.1 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210(2012)07(a)-0029-02
Experimental study of acute toxicity of water extract and ethanol extract of
Angelica vine
LU Senhua CHEN Yong ZENG Haisheng ZHANG Long ZHENG Xiren ZHOU Yuan
College of Pharmacy, Guangxi University of Traditional Chinese Medicine, Guangxi Zhuang Autonomous Region, Nanning
530001, China
[Abstract] Objective To study the acute toxicity of water extract and ethanol extract of Angelica vine, evaluate their safety
and provide theoretical basis for the development of new drugs. Methods The maximum administration determination
method was used and the drug was administered orally. The median lethal dose (LD50) and maximum tolerated dose (MTD)
of water extract and ethanol extract of Angelica vine were measured to study the safety. Results The toxicity of water ex-
tract and alcohol extract of Angelica vine was very small, thus the LD50 of mice could not be obtained. MTD of water ex-
tract and ethanol extract was larger than 90 g/kg. The maximum tolerated dose multiple equals 150 times of the dose for
adults (50 kg). Conclusion Angelica vine does not have apparent toxicity, thus its clinical routine dose is safe and feasible.
[Key words] Angelica vine; Acute toxicity experiment; Maximum tolerated dose
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·实验研究· 2012 年 7月第 9卷第 19期
中国医药导报 CHINA MEDICAL HERALD
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对于要素欠缺太多的,将不予刊出简介内容。
·编读往来·
自由饮水。将当归藤水提物和醇提物用生理盐水配制成高浓
度药液,最大浓度均为 2.25 g 生药/mL,每鼠灌胃给药,给药
体积 0.4 mL/10 g,给药 1 次/d,对照组灌胃给予等容量的生
理盐水,给药后先禁食 3 h,然后常规饲养。于给药后 1、24、72 h
至第 7天,每天观察并记录小鼠的体质量、皮肤毛发、眼和黏
膜的变化、呼吸、四肢活动等变化及其中毒和死亡情况。
经预实验发现小鼠灌胃给予当归藤水提物和醇提物后,
7 d 内未见死亡,且精神与活动状态亦无明显异常。可知本药
的毒性较小,无法测得半数致死量(LD50),故拟按照《中药新
药审批办法》的要求用最大耐受量(MTD)的测定来观察动物
对当归藤水提物和醇提物的耐受量,测定其能达到人用量的
多少倍,从而对其安全性作出估价。
2.2 正式实验
采用 MTD 法进行小鼠急性毒性试验, 取 SPF 级昆明种
小鼠 40 只,随机分成两组,体质量(20±2)g,雌雄各半并分笼
饲养,实验前禁食不禁水 12 h,分别按预实验所测当归藤水
提物和醇提物最大给药浓度 2.25 g 生药/mL 进行灌胃给药,
给药体积 0.4 mL/10 g,给药 1次/d,实验小鼠给药后先禁食 3 h
然后常规饲养。同样于给药后 1、24、72 h至第 7天,按郑爱华等
[7]所述动物急性毒性表现和症状自发活动进行观察,每天观
察并记录小鼠的体质量、皮肤毛发、眼和黏膜的变化、呼吸、
四肢活动等变化及其中毒和死亡情况。以死亡为主要观察指
标。如有死亡,则以刚不出现死亡组为准,此时的用药量即为
小鼠的最大耐受量。然后按公式计算出耐受量倍数。7 d 后处
死小鼠进行尸体解剖检查。 观察项目如表 1。
表 1 动物急性毒性实验观察表
小鼠按最大给药浓度、 最大给药体积 1 次灌胃给药后,
部分小鼠出现对身体某些系统的影响症状:对肌肉的影响主
要表现为自主活动减少、倦卧不动;对自主神经系统的影响
主要表现有:反应迟钝;另有闭目现象,其他观察项目则无异
常情况,24 h 后各鼠均恢复正常。 连续观察 7 d,小鼠无死亡
情况出现。实验结束时,称重,将全部动物处死,解剖,观察其
心、肝、脾、肺、肾等主要组织脏器的外观:心脏大小、颜色正
常,跳动有规律,未见充血水肿及心衰;肝脏大小正常有润
泽,未见水肿及变色;脾脏颜色、质地显正常的暗红色、软而
脆,未见变色及病变;肺大小、颜色均显正常,未见明显病变;
肾显正常暗红色且表面光滑,大小正常,未见水肿;胃内尚有
未消化完全的食物残渣,肠内有成型大便,均无胀气且无黏
膜充血及出血等异常病变。实验表明当归藤水提物和醇提物
无明显毒副作用。 结果见表 2。
表 2 当归藤水提物和醇提物对小鼠经口急性毒性试验结果(x±s)
3 讨论
实验结果表明, 当归藤水提物和醇提物以最大给药浓
度、最大给药体积 1 次灌胃给药后小鼠无死亡及明显的中毒
情况出现。 当归藤水提物和醇提物的 MTD>90 g/kg,该药材
临床常用量 15~30 g,本次试验小鼠用量相当于成人(50 kg)
用量的 150 倍。 根据中药制剂毒理学要求,即按体重计算小
鼠最大给药量相当于人日用剂量 100 倍以上则安全,可以提
供临床应用[8]。因该药材急性毒性实验观察时间较短,故还应
结合长期毒性实验的毒性表现及多种检查结果综合分析评
价其毒性,此方面的研究还需深入进行。
[参考文献]
[1] 广西壮族自治区卫生厅.广西中药材标准(1990 版)[S].广西科学技术
出版社,1992:44.
[2] 国家中医药管理局《中华本草》编委会.中华本草[M].上海:上海科学
技术出版社,1999,6:76-77.
[3] 中国科学院中国植物志编委会 .中国植物志 [M].北京:科学出版社,
1979,58:113.
[4] 陈家源,卢文杰,王雪芬,等.小花酸藤子化学成分的研究[J].华西药学
杂志,1998,13(2):95-96.
[5] 杨瑞云,管海波,张革,等.当归藤中总黄酮提取工艺研究[J].食品工业
科技,2011,4(32):217-219.
[6] 管海波,银小玲,覃江克,等.紫外分光光度法测定当归藤中儿茶素含
量[J].安徽农业科学,2011,39(18):10854-10855.
[7] 郑爱华,蔡光先,刘红梅.不同粒径的超微参附汤对小鼠的急性毒性
实验[J].中华中医药学刊,2010,28(6):1222-1223.
[8] 谢秀琼 .中药新制剂开发与应用 [M].2 版 .北京 :人民卫生出版社 ,
2000:540.
(收稿日期:2011-12-19 本文编辑:卫 轲)
肌肉
肌张力
反应
自主神经
呼吸
皮肤颜色
死亡症状
运动增多、减少、窜动、倦卧不动
震颤、抽搐、麻痹、共济失调
增强、减弱、肌强直、肌松弛
紧张不安、反应迟钝
竖毛、流泪、流涎、凸眼、腹泻、抑制、急促、衰竭
苍白、发绀、充血
挣扎、角弓反张、口吐白沫
观察项目 表现和症状自发活动
水提物
醇提物


合计


合计
10
10
20
10
10
20
21.93±1.22
20.85±1.40
21.39±1.39
21.44±1.09
21.73±1.21
21.59±1.13
28.86±2.89
23.16±2.15
26.01±3.83
22.86±2.56
23.25±2.99
23.03±2.68
>90
>90
组别 性别 只数 初始体重(g) 终体重(g) MTD(g/kg)
30