全 文 ：第 17卷　第 4 期 　　　　　　　　　　　　　　云南农业大学学报　　　　　　　 Vol.17　No.4
2002年　12 月 　　　　　　　　　　Journal of Yunnan Agricultural University　　　　　 Dec.2002
西双版纳土壤镰刀菌对香荚兰致病性测定
Pathogenicity Test on Vanilla planifolia with
Isolates of Fusarium spp.from Soil of
the Xishuangbanna Vanilla Plantation
王云月 ,廖　斌 ,袁胜方 ,杨　静 ,孙永海 ,朱有勇
(云南农业大学 ,云南省植物病理重点实验室 , 云南 昆明 650201)
　　中图分类号:S 435.73　　　　　文章编号:1004-390X(2002)04-0446-02
　　香荚兰(Vanilla planifolia Andr)又名香草兰 ,属
于兰科多年生热带藤本植物。有“食品香料之王”
的美称 ,是食品工业的重要香料 ,也用于化妆品 、
烟 、酒 、茶等的加香 ,还用于制药业 ,香荚兰具有补
肾 、健胃 、消胀 、健脾之疗效。我国于 20世纪 60年
代引种香荚兰 ,90年代规模种植 ,且发展迅速 。现
在海南省及云南西双版纳已种植香荚兰 200 hm2 ,
随着香荚兰种植面积的不断扩大 ,根腐病的为害也
越来越严重。据国内外记载 ,香荚兰病害已达 20
多种 ,其中尤以根腐病 、炭疽病 、疫病危害严重 。在
云南西双版纳 ,根腐病已成为限制香荚兰产业发展
的制约因素。
香荚兰根腐病主要为害香荚兰的气生根和地
下不定根 ,严重时蔓延到茎基部 ,几乎限制在茎基
部以下的节 ,很少扩展至茎部第一节以上。患部以
上部分停止生长 ,植株叶片失去光泽 、退绿 、萎蔫致
死。防治根腐病最经济有效的措施是种植抗病品
种 ,目前生产上种植的品种均为墨西哥种 ,品质好 ,
经济价值很高 ,但高感根腐病 。香荚兰抗病育种工
作还相当滞后 ,不能满足生产的迫切需要 ,目前生
产上主要采用化学药剂防治 ,但防治有效期短 ,长
期大量用药 ,使成本增高 ,易对植物产生药害和造
成环境污染。鉴于此生物防治是一项最有效的措
施之一。本研究的目的旨在寻找当地的非致病性
菌株 ,利用非致病菌株与致病菌株间的营养竞争 、
侵染位点竞争 、诱导抗性等作用机制 ,筛选非致病
菌株作为生防候选菌株配制生防制剂 。
1 　材料和方法
1.1 　供试材料
墨西哥香荚兰组培苗。
1.2 　土样采集
在西双版纳 3个香荚兰种植园中分别从发病
重 、发病轻 、不发病的田块采集共 25 个土样 ,其中
勐伦种植园 14个土样 ,打洛种植园 6个土样 ,曼景
傣种植园 5个土样。
1.3 　供试菌株
将香荚兰种植园中采回的土样采用平板稀释
法(将土样磨细过筛混匀 ,取对角线土样 ,取 10 g 土
样溶于灭菌水中 ,在 25 ℃摇床上振荡过夜 ,然后配
成1/10 , 1/100 ,1/1 000稀释度的悬浮液 ,各取出 1
mL分别涂在含有青霉素 50 mg/mL ,链霉素 50 mg/
mL的 PSA平板培养基上 ,置于 25 ℃温箱中培养 2
～ 3 d ,PSA平板上出现单菌落时 ,及时移入 PSA 试
收稿日期:2002-05-08
　基金项目:云南省应用基础研究重点基金资助项目(97C005Z)
　作者简介:王云月(1962-), 女 ,云南昆明人 ,教授 , 硕士 ,主要从事生物多样性与病害控制 、植物真菌病害及分子监
测和生物防治。
DOI :10.16211/j.issn.1004-390x(n).2002.04.057
管中培养。)分离到 99 个镰刀菌分离物 , 尖镰孢
Fusarium oxysporum 80个;茄镰孢 Fusarium solani 19
个。
1.4 　菌株鉴定
根据布斯(C.Brooth)的分类系统并参照其它有
关镰刀菌鉴定方面的资料进行 。
1.5 　接种
将供试菌株移接于 PSA 平板 ,置于 25 ℃温箱
培养 10 ～ 15 d ,配制为 1×106个孢子/mL的孢子悬
浮液 。采用针刺蘸根法对香荚兰根部接种 ,即将幼
苗的根部用注射器针尖稍稍刺伤(刮伤根毛),在孢
子悬浮液中浸泡 5 min 然后移置在清水洋菜的大
罐头瓶中 ,置于人工气候箱(温度 28 ℃,相对湿度
97%,光照 12 h)中培养 ,培养过程中注意观察记载
发病情况 。
1.6 　致病性测定
接种 10 d 后对发病根进行观察记载 ,病级按
Alconero 的分级法 。0级 ,根无病;1级 ,病部占根长
1/4;2级 ,病部占根长 1/2;3级 ,病部占根长 3/4;4
级 ,全根腐烂;5级 ,全根腐烂且扩展到茎蔓。
2 　结果与分析
2.1 　引起香荚兰根腐病的病原菌主要是镰刀菌
中的尖镰孢 [ Fusarium oxysporum f.sp.vanillae
(Tuck.)Gordon]和茄镰孢[ Fusarium solani (Mart.)
App.et Wr.] ,分别为 68 个占 82.9%和 14 个占
17.1%,其中以尖镰孢 [ Fusarium oxysporum f.sp.
vanillae(Tuck.)Gordon]为优势种 。
2.2 　用于致病性测定的 99个镰刀菌分离物中有
80个尖镰孢(F.oxysporum ,),占 80.8%, 19个茄镰
孢 F.solani ,占 19.2%;99个分离物中 ,致病性菌
株有 82 个 , 占 82.8%, 非致病菌株 17 个 , 占
17.2%.在 82个致病性菌株中 ,强致病的菌株有 45
个 , 占 54.9%;致病性中等的菌株有 15 个 , 占
18.3%;弱致病的菌株有 22个 ,占 26.8%.
3 　讨论
香荚兰根腐病是香荚兰生产为害最大的土传
病害 。防治植物土传病害目前是相当困难的 ,化学
药剂对土传病害防治存在很大缺点 ,防治的有效期
短 ,成本高 ,长期大量用药 ,易造成环境污染和对植
物造成药害。鉴于这样的原因 ,目前生物防治是最
有效的方法。土壤中微生物是复杂多样的 ,利用生
物多样性可稳定生态结构 ,生物之间的相克相生原
理 ,把非致病菌株与木霉 、芽孢杆菌 、荧光假单胞杆
菌的不同组合配制成复合生防菌剂 ,在某些植物病
害防治上已经取得成功。本研究从镰刀菌中筛选
到的非致病性菌株可作为生产复合生防菌剂的侯
选菌株。通过使用复合生防菌剂来防治香荚兰根
腐病 ,弥补化学药剂的不足 ,在温室盆栽试验已获
得成功。
447第 4期　　　　　　　　　王云月 ,等:西双版纳土壤镰刀菌对香荚兰致病性测定