全 文 ：
SSＲ方法因读胶板带来的人为误差;三是缺失率低，对
于热碱快提法提取的 DNA，TaqMan-SNP 分析采用荧
光 PCＲ，灵敏性要比普通 PCＲ 要高，因此实际检测中
结果缺失的几率更低;四是环境友好，SSＲ电泳检测过
程涉及的甲醛，乙酸等试剂对人体和环境都有一定的
危害;五是节省空间，无需设置单独的电泳室。因此，
TaqMan-SNP基因分型技术更适合于杂交玉米种子中
自交系的快速鉴定。
参考文献:
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markers［J］． Mol Plant Breed，2006(4):381 － 384．
·应用技术·
收稿日期:2014 － 06 － 20
基金项目:科技部农转项目“贵州野生珍稀木本观赏植物繁育及栽培示范”(编号:2011 GB 2 F 200006);贵州省科技厅成果推广项目“贵州主要野生
木本观赏植物资源栽培技术示范及推广”(编号:黔科合成字［2011］5035);贵州省林业厅年度计划项目“贵州乡土阔叶园林绿化树种评
价、筛选及苗木培育关键技术研究”(编号:2009-3);贵州省林业厅项目“珍稀观赏植物虎舌红苗木繁育关键技术研究”(编号:黔林科合 J
字［2012］) ;贵州省科技厅中药现代化项目“花椒属、紫金牛属药用植物资源圃营建与良种”(编号:黔科合 ZY字［2012］3002 号)。
作者简介:侯 娜(1983 －)，女，陕西户县人;工程师，主要从事林木生物技术研究;E-mail:houna1018@ 163． com。
通讯作者:王 港(1979 －)，男，助理研究员，主要从事苗木培育研究;E-mail:wang3540307@ 163． com。
野生珍稀植物虎舌红组培快繁技术研究
侯 娜， 陈 骏， 王 港， 娄 丽， 李 茂， 邓伦秀， 文 弢
(贵州省林业科学研究院， 贵阳 550005)
Study on Ｒapid Propagation Technology of Tissue Culture of
Wild Ｒare Plant in Ardisia mamillata
HOU Na，CHEN Jun，WANG Gang，LOU Li，LI Mao，DENG Lun-xiu，WEN Tao
摘要:以虎舌红带芽茎段为外植体，研究其培养的最佳培养基
配方及培养程序，建立虎舌红快繁技术体系。结果表明:芽萌
发的最佳培养基为:MS + 6-BA 2． 0 mg /L + NAA 0． 5 mg /L +
GA31． 0 mg /L，萌发率为 73． 33%;芽苗增殖最佳培养基为 MS +
6-BA 1． 5 mg /L + NAA 0． 5 mg /L + GA3 0． 1 mg /L，增殖系数可达
7． 5，且芽苗生长良好;生根培养基以 1 /2 MS + IBA 0． 5 mg /L +
NAA 0． 5 mg /L为最好，生根率达 96． 67%。在此培养基上添加
不同浓度的活性炭，以 0． 2%AC效果更好。炼苗以碎树皮的成
活率最高，达 91%。
关键词: 虎舌红;无性繁殖;组织培养
中图分类号: S 336 文献标志码: A
文章编号: 1001 － 4705(2015)01-0119-04
虎舌红(Ardisia mamillata Hance)是紫金牛科紫金
牛属多年生常绿小灌木，具有观赏和药用等多种价
值［1］。虎舌红为世界濒危植物，自然分布区狭小［7］，
野生资源极其有限。近年来，虎舌红作为高档盆栽观
赏植物受到人们的青睐，尤其是 1998 年昆明世界园艺
博览会上，虎舌红勇夺室内盆栽花卉第一的桂冠后，一
跃成为室内盆栽植物的新宠，市场价格节节高升。在
利益的驱使下，人们开始大量挖掘野生资源。虎舌红
在野生状态下繁殖能力较弱，如果继续大量挖掘，势必
导致资源的枯竭甚至灭绝。解决这一问题最好的方法
就是研究虎舌红苗木的高效繁育技术，通过人工快速、
·911·
应用技术 侯 娜 等:野生珍稀植物虎舌红组培快繁技术研究
表 1 不同方案效果结果统计表
消毒方案 外植体 接种数 污染数 污染率(%) 成活率(%)
酒精 70%30 s + HgCl2 5 min
叶片 30 28 93． 33 7
茎段 30 29 96． 70 3
酒精 70%30 s + HgCl2 6 min
叶片 30 25 83． 30 17
茎段 30 25 83． 30 17
酒精 70%30 s + HgCl2 7 min
叶片 30 13 43． 30 57
茎段 30 14 46． 70 53
酒精 70%30 s + HgCl2 8 min
叶片 30 7 23． 30 77
茎段 30 8 26． 70 73
大量的繁育虎舌红苗木，在满足市场对虎舌红需求的
同时，也起到保护野生资源的作用［2 ～ 5］。
本试验在前人研究的基础上，通过对虎舌红组培
外植体选取与消毒、初代、增殖、生根等环节基本培养
基激素浓度配比，移栽基质等进行反复试验研究，提炼
出操作简便、扩繁速度快、成苗率高的虎舌红苗木组培
生产体系，以期为虎舌红苗木规模化培育提供技术
支撑。
1 材料与方法
1． 1 材料来源与处理
试验材料包括叶片和茎段，采自贵州省荔波茂兰
自然保护区，外植体经流水冲洗1 ～ 2 h备用。
1． 2 培养基及培养条件
以 MS和 WPM为基本培养基。
培养条件:培养温度(25． 0 ± 2)℃，光照强度 2 000
lx，光照时间 12 h /d。
1． 3 测定指标
培养 20 d统计各个处理的腋芽萌发率、丛芽诱导
率、增殖系数等指标。指标计算方法如下:
萌发率(%)=腋芽萌动数目 /接种数(去除污染
数) × 100%;
愈伤诱导率(%)=诱导出愈伤组织的腋芽数目 /
接种的腋芽数目(去除污染数)× 100%;
丛芽诱导率(%)=诱导出丛生芽的腋芽数目 /接
种的腋芽数目 × 100%;
增殖系数 =诱导后的丛生芽的数目 /诱导前芽的
数目。
2 结果与分析
2． 1 不同消毒方案对虎舌红外植体成活率的影响
在消毒过程中，虎舌红的叶片对酒精的敏感度较
高，酒精消毒时间过长叶片出现枯黄色斑点，掌握适当
的 0． 1%HgCl2 浸泡时间对获得叶片和茎段的无菌外
植体非常重要。结果
如表 1 所示，70%酒
精消毒时间一定时，
0． 1% HgCl2 浸泡叶
片和茎段随着时间的
增加，污染率下降;故
综合考虑采用 70%
酒精 处 理 30 s 后
0． 1% HgCl2 浸泡 6
min，叶片能够获得较
高的成活率;70% 酒
精处理 30 s后0． 1% HgCl2 浸泡 7 min，茎段能够获得
较高的成活率。
2． 2 初代培养
2． 2． 1 材料修剪
在超净工作台上将茎段剪成 0． 5 cm，接种到预先
配好的培养基中，用聚乙烯封口膜封好，每瓶接种 1 个
外植体，每个处理 3 次重复，每个处理接种 30 瓶。
2． 2． 2 不同培养基和不同激素浓度配比诱导带芽
茎段
经反复试验比较，MS 效果好于 WPM 培养基，以
MS为诱导培养基时，带芽茎段萌发的幼芽时间短、生
长健壮。所以选择 MS为基本诱导培养基。
选择生长健壮、无病虫害的带芽茎段为外植体，茎
段腋芽萌发是本试验获取无菌植株的重要途径。通过
大量预试验发现，当细胞分裂素 6-BA 浓度为 1． 0 ～
2． 0 mg /L和 NAA 0． 1 ～ 0． 5 mg /L，生长素 GA3 浓度为
0． 1 ～ 1． 0 mg /L时，茎段上的腋芽均能萌发，但萌发的
速度和萌发后芽的长势有较大差别。故在范围内分别
将 6-BA和 NAA设置成 3 个浓度梯度，做全因子试验，
结果见表 2。
由表 2 可以看出，诱导腋芽萌发最好的是 6-BA
2． 0 mg /L + NAA 0． 5 mg /L + GA31． 0 mg /L 组合，该组
合上带芽茎段萌发较整齐，分化早，萌发平均时间短
(图 A)。
2． 3 不同激素浓度配比对无菌芽增殖的影响
将初代培养形成的无菌苗剪成带有叶柄的小段，
移入增殖培养基，研究不同激素配比对无菌苗增殖的
影响。30 d后统计其增殖情况，并观察侧芽萌发时间、
腋芽萌发数量及丛生芽生长状况。虎舌红组培无菌苗
增殖主要靠无菌苗侧芽的萌发。试验发现，小幅度的
生长素浓度变化对无菌苗侧芽萌发影响不明显，故将
生长素浓度固定为 0． 1 mg /L，细胞分裂素浓度 1． 0 和
1． 5mg / L设置2个浓度梯度，进行全因子试验，每个
·021·
第 34 卷 第 1 期 2015 年 1 月 种 子 (Seed) Vol． 34 No． 1 Jan． 2015
表 4 不同培养基对丛生芽诱导生根情况
培养基配方 试验号
培养瓶数
(个)
诱导生根
瓶数(个)
生根率
(%) 根生长情况
1 /2 MS 1 30 6 20 根短，无须根，生根时间长
1 /2 MS + IBA 0． 5 mg /L + AC 2 30 25 83 平均 3 － 4 根，根较长
1 /2 MS + NAA 0． 5 mg /L + AC 3 30 16 53 根短，无须根
1 /2 MS + + NAA 0． 5 + IBA 0． 5 mg /L + AC 4 30 29 96． 67 平均 4 ～ 5 根，须根多，根长
表 2 不同生长激素浓度配比诱导带芽茎段生长情况
试验号
激素种类和浓度(mg /mL)
6-BA NAA GA3
接种数
(个)
诱导数
(个)
诱导率
(%) 备注
1 1 0． 1 0． 1 30 9 30． 00 分化迟，基部愈伤组织较大
2 1 0． 3 0． 5 30 11 36． 67 分化迟，基部愈伤组织较大
3 1 0． 5 1 30 12 40． 00 分化迟，基部愈伤组织较大
4 1． 5 0． 1 0． 5 30 11 36． 67 分化迟，基部愈伤组织较大
5 1． 5 0． 3 1 30 15 50． 00 分化迟，基部愈伤组织较大
6 1． 5 0． 5 0． 1 30 13 43． 33 分化迟，基部愈伤组织较大
7 2 0． 1 0． 5 30 13 43． 33 分化迟，基部愈伤组织较大
8 2 0． 3 0． 1 30 17 56． 67 分化较早，基部愈伤组织较大
9 2 0． 5 1 30 22 73． 33 分化早，基部愈伤组织较大
表 3 6-BA和 NAA对虎舌红丛生芽增殖及生长状况的影响
激素组合
侧芽萌发
时间(d)
侧芽萌发
数量(个)
增殖
系数
丛芽生长情况
6-BA 1． 0 + NAA 0． 1 + GA30． 1mg /L 19 2 1． 2 芽细弱，伸长生长不明显，基部有大量愈伤
6-BA 1． 0 + NAA 0． 5 + GA30． 1mg /L 15 3 2． 8 芽细弱，伸长生长较明显，基部有较多愈伤
6-BA 1． 5 + NAA 0． 1 + GA30． 1mg /L 8 4 3． 2 芽较粗壮，伸长生长较明显，基部有愈伤
6-BA 1． 5 + NAA 0． 5 + GA30． 1mg /L 5 6 7． 5 芽粗壮，伸长生长很明显，基部愈伤少
组合 接 种 30 瓶
(见表 3)。
康美 玲［7］ 等
采用 MS + 6-BA
1． 5 mg /L + NAA
0． 1 mg /L 培养基
增殖培养，芽苗粗
壮。本试验中由于
细胞分裂素浓度的
不同，无菌苗腋芽
萌发的时间、萌发
的数量以及萌发后
侧芽的长势都有明
显差异。观察比较
发 现，6-BA 1． 5
mg /L + NAA 0． 5
mg /L + GA3 0． 1
mg /L 为虎舌红无
菌苗增殖最佳激素
配比，不仅芽粗壮，
而且伸长生长明
显，基部愈伤少;无
菌苗在该组合培养基上5 d腋芽就开始萌动，每个无菌
苗萌发侧芽 5 ～ 7 个不等，平均增殖系数 7． 5，在该组
合培养基上，接种 30 d 左右，萌发的腋芽长可达 2． 5
cm(图 B)。
2． 4 生根培养
将诱导得到的丛生芽转入生根培养基 1、培养基
2、培养基 3 和培养基 4 号中进行培养。结果(见表 4)
表明，经培养基 1、培养基 2、培养基 3 和培养基 4 号培
养 30 d 后，丛生芽均能够诱导生根，但 4 号培养基能
够在 10 d 时诱导 96． 67%以上丛生芽生根，而 3 号培
养基通常在 20 d以后才诱导丛生芽生根，1 号和 2 号
培养基在 25 d后生根，并且植株长势不如培养基 3 和
培养基 4 中健壮，并且 4 号培养基中须根多，平均 5 根
以上(图 C)。
2． 5 不同基质对虎舌红组培苗移栽的影响
本试验中当试管苗长至 3 ～ 5 cm，3 ～ 4 片叶，
2 ～ 3 条根时将培养瓶置于温室中打开瓶盖炼苗 3 ～ 5
d后，在培养基表面加入少许无菌水，轻轻从培养瓶中
取出生根苗，洗净附着的培养基，分别移栽至已消毒基
质腐殖土、碎树皮、腐殖土 +珍珠岩 = 3 ∶ 1及腐殖土 +
黄心土 = 3 ∶ 1的 4 种栽培基质中，每一种基质栽植 100
株，30 d后统计移栽成活情况(表 5)，结果表明:以碎
树皮为基质的移栽成活率最高，为 91%(图 D)，植株
生长健壮;腐殖土的移栽成活率为 82%;腐殖土 +黄
心土 = 3 ∶ 1的移栽成活率最低为 54%;腐殖土与腐殖
土 +珍珠岩 = 3∶ 1的移栽成活率接近，分别为82%和
·121·
应用技术 侯 娜 等:野生珍稀植物虎舌红组培快繁技术研究
87%，2 种基质可交替使用。康美玲等［7］选择珍珠
岩 ∶蛙石 = 1 ∶ 1作为移栽基质也取得了较好效果。管
护中保持适度温湿度，置于阴凉通风处，进行正常水、
肥管理，有利于新根生长和防止病害发生。花盆中继
续培养，用塑料薄膜覆盖以防止水分蒸发，每天用无菌
水喷洒新苗，待新苗长势稳定后，将花盆搬至室外继续
培养。
表 5 不同基质对虎舌红移栽成活率的影响
编号 基质
栽植株数
(株)
成活株数
(株)
成活率
(%)
1 腐殖土 100 82 82
2 碎树皮 100 91 91
3 腐殖土 +珍珠岩 = 3 ∶ 1 100 87 87
4 腐殖土 +黄心土 = 3 ∶ 1 100 54 54
3 讨 论
虎舌红属于矮生灌木，生长较缓慢，以茎尖、茎段
作为外植体，取材数量有限，但组培繁殖不受季节限
制，速度快、增殖系数高及节约空间，通过组培繁殖可
缩短苗木生产时间及快速扩大苗木数量。
在虎舌红的组培快繁过程中，不同生长调节物质
对腋芽的诱导和增殖均有一定的促进作用，针对不同
的植物其选择性也是有区别的，实践中需要做大量的
实验以取得可靠的数据。就虎舌红而言，细胞分裂素
6-BA和生长素 NAA的组合及配比均可促进虎舌红的
增殖分化，且单独使用 6-BA 对芽的增殖分化也有明
显的促进作用，而单独使用 NAA 则不产生芽增殖，只
是在高生长方面起作用;两者适宜的浓度配比，即:MS
+6-BA 1． 5 mg /L + NAA 0． 5 mg /L + GA30． 1 mg /L 是
虎舌红芽分化与增值的最适培养基;1 /2 MS + IBA 0． 5
mg /L + NAA 0． 5 + 3 g /L AC对虎舌红的生根有明显的
促进作用。
虎舌红植株全身布满茸毛，外生菌大量滋生，隐藏
于茸毛内，在表面消毒时造成一定的困难，污染率极
高，以后还需在此环节上加以试验，改进消毒措施。不
同的取材时间对虎舌红初代培养有一定的影响，春季
取材成活率最高，达到 80%左右，夏季和秋季相差不
多，冬季成活率最低，为 20%左右;这可能与材料本身
有关，春季萌发新叶，细菌污染和携带病原少;随着时
间的推移，夏季和秋季的成活率降低，虎舌红本身被有
绒毛，容易储藏细菌，外界环境污染及病虫害的影响;
冬季植物处于休眠状态，病菌储存在植物体内，降低了
成活率。因此，虎舌红组培取材也很重要，尽量在植物
休眠之前取材，降低污染率。
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