全 文 ：HPLC法测定虎舌红药物中的去氢飞廉碱
凌育赵 1 , 曾满枝2
(1.仲恺农业技术学院化学化工系 , 广州 510225;2.华南农业大学理学院应用化学系 , 广州 510642)
摘　要:建立了测定虎舌红药物中喹唑酮类生物碱的 HPLC 方法。色谱柱为
Diamonsil C18柱(250 mm×4.6 mm i.d., 5 μm), 流动相为 V(0.2%三乙胺溶液)∶
V(乙腈)=35∶65;检测波长:345 nm;流速:1.0 mL min。结果表明 , 喹唑酮类
生物碱可以得到有效的分离 , 去氢飞廉碱在 0.02 ～ 0.15 μg 间呈线性关系(r=
0.9995)。
关键词:虎舌红;去氢飞廉碱;HPLC
中图分类号:O657.7　　文献标识码:A　　　文章编号:1000-0720(2008)05-095-03
　　虎舌红(Ardisia mamillata), 又名红毛毡 、宝鼎
红 、天仙红衣 、毛凉伞 、金丝红珠等 , 为紫金牛科
紫金牛属。原产我国 , 分布于福建 、广西 、广东 、
云南 、四川 、贵州 、江西等地[ 1] 。《云南中草药选》
中记载虎舌红全草可入药 , 有清热利湿 、活血止
血 、去腐去肌等功效 , 对跌打损伤 、风湿骨痛 、肺
痨咳嗽 、疳积肝炎均有疗效[ 2] , 生物碱是其主要活
性成分[ 3] 。目前对于虎舌红中生物碱类成分的研
究未见有报道 。本文以虎舌红药物所含的去氢飞
廉碱为指标[ 4] , 建立了虎舌红中喹唑酮类生物碱
的HPLC 测定方法 , 平均回收率为 99.84%, RSD
为0.05%。本法简便快捷 、定量准确 , 为进一步开
发利用虎舌红药用资源 , 全面控制虎舌红药物的
内在质量提供科学依据。
1　实验部分
1.1　仪器与试剂
BEIFENSY5000型高效液相色谱仪(北京分析
仪器厂), 包括四元泵 、在线脱气机 、柱温箱 、DAD
检测器 、 chimstation system工作站。SHB-III 型循环
水式真空泵(巩义市英峪予华仪器厂);CS501超级
恒温器(重庆试验设备厂);FA-1004电子天平(上
海精密科学仪器有限公司)。
对照品去氢飞廉碱购自中国药品生物制品检
定所;乙腈 、甲醇为 GR;乙酸 、CHCl3 等其它试剂
均为 AR。虎舌红全草由本省农科院芳村花卉基地
提供 , 经本校植物研究室鉴定为紫金牛科(Myrsi-
nacese)、紫金牛属(Ardisia)虎舌红(A.mamillata)。
1.2　色谱条件
Diamonsil C18柱(250mm×4.6mm i.d., 5μm);
流动相:V(0.2%三乙胺溶液)∶V(乙腈)=35∶65;
载气流量:1.0 mL min。流速:1.0 mL min;检测波
长:345 nm;柱温 35 ℃;进样量 10μL。在此条件
下 , 供试品溶液 、对照品溶液的 HPLC 图见图 1 、
图 2。
图 1　虎舌红供试品溶液的HPLC 图
Fig.1　HPLC chromatogram of provided testing samples
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第 27 卷第 5期
2008 年 5月 　　　　　　　　　　　　 分析试验室Chinese Journal of Analy sis Laboratory　　　　　　　　　　　　Vol.27.No.52008-5
收稿日期:2007-01-30;修订日期:2007-04-10
基金项目:仲恺农业技术学院科研基金(G3052727)项目资助
作者简介:凌育赵(1967-), 男 , 高级实验师;E-mail:lyz1999@21cn.com
DOI :10.13595/j.cnki.issn1000-0720.2008.0154
图 2　去氢飞廉碱对照品溶液的 HPLC 图
Fig.2　HPLC chromatogram of contrast samples
1.3　供试品溶液的制备
称取虎舌红粉末 200 g , 用 500 mL pH ≈3 、体
积分数75%乙醇分 3次加热回流提取 , 每次 3 h ,
得提取液 , 60 ℃下减压浓缩得浸膏;用体积分数
2%HCl溶解 , 过滤除去不溶性非碱性脂溶性杂
质 , 用乙醚 、CHCl3 洗涤3次除去亲脂性非生物碱
类成分 , 然后加浓氨水调 pH为 6 ～ 7 , 过滤除去鞣
质类杂质沉淀 , 再用氨水调 pH 10 ～ 11 后 , 用
CHCl3 萃取 , 萃取液置 50 mL容量瓶中 , 稀释至刻
度 , 即得供试品溶液。
1.4　对照品溶液的制备
准确称取对照品去氢飞廉碱 1 mg , 置于 100
mL 容量瓶中 , 加 V(HCl)∶V(甲醇)=1∶100混合液
溶解 , 稀释至刻度 , 摇匀即得 0.01 mg mL去氢飞
廉碱溶液 。
2　结果与讨论
2.1　线性关系
吸取 0.01 mg mL 去氢飞廉碱对照品溶液 2 、
4 、6 、 8 、 10 μL , 按上述色谱条件测定峰面积 , 以
峰面积 Y 为纵坐标 , 以进样量 m(μg)为横坐标 ,
进行回归分析 , 得回归方程 Y =19.254m -
1.6247 , r=0.9995(n =5)。结果表明 , 去氢飞廉
碱在 0.02 ～ 0.15μg 范围内呈良好的线性关系。
2.2　重现性试验
吸取同一样品 5份 , 每份 10 μL , 在上述色谱
条件下进样 , 进行 HPLC分析 , 测得去氢飞廉碱质
量浓度分别为 0.241 、 0.238 、 0.233 、 0.242 、 0.235
(mg mL), 计算 RSD为 1.3%。
2.3　精密度
吸取同一对照品溶液 10 μL , 在上述色谱条件
下连续进样 5 次 , 测得去氢飞廉碱峰面积积分值
分别为 603.21 、 600.02 、 596.19 、 604.48 、 601.32 ,
计算 RSD为 0.39%。
2.4　稳定性
准确称取虎舌红样品 1.0206 g , 按“1.3”项下
方法制备供试品溶液 , 吸取 10 μL , 分别在 1 、 2 、
4 、8 、 16 、24 h测定 , 峰面积 RSD为 0.17%。结果
表明 , 供试品溶液在 24 h内稳定性良好 。
2.5　加标回收率
吸取已知量(0.0485 mg mL)的同一批样品 5
份 , 每份 10 μL , 分别加入去氢飞廉碱对照品 0.1
mg , 按上述提取方法测定 , 计算回收率 , 结果见
表 1。平均回收率为 99.84%, RSD为 0.05%。
表 1　去氢飞廉碱回收率实验结果(n =5)
Tab.1　The test results of recovery experiment
样品号 已知量 m mg 加入量 m mg 测得总量 m mg 回收率 % 平均回收率 % RSD %
1 0.485 0.100 0.587 100.3
2 0.485 0.100 0.582 99.5
3 0.485 0.100 0.585 100.0 99.84 0.05
4 0.485 0.100 0.583 99.6
5 0.485 0.100 0.584 99.8
2.6　样品测定
按上述色谱条件 , 分别吸取去氢飞廉碱对照
品溶液与供试品溶液 10 μL进样 , 记录色谱图 , 以
峰面积按外标法定量 , 结果见表 2。
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表2　样品测定结果(n=3)
Tab.2　Determination results of sample contents
批号 测定值 w (mg g) 平均值 w (mg g)
050021 0.481
050022 0.476 0.490
050023 0.512
3　结论
(1)考察了水 、酸水 、氨性氯仿 、酸性乙醇几
种提取剂对提取率的影响。结果表明 , 酸性乙醇
的提取率最高 , 其次是酸水和氨性氯仿 , 水提取
率最低 , 采用酸性乙醇明显优于其它提取剂 。
(2)浸提液中含有鞣质或酚类 、糖苷类等成
分 , 对有效成分的测定干扰很大 , 且会污染色谱
柱 , 必须进行纯化 , 除去杂质。试验经中性氧化铝
柱吸附 、甲醇洗脱 , 除杂质效果较好 。
(3)在试验中 , 对照品溶液在 200 ～ 400 nm 分
别进行光谱扫描 , 结果在 345 nm 处吸收值最大 ,
灵敏度最高。
(4)试验了甲醇水 、乙腈水流动相系统 , 分别
加入酒石酸 、H3PO4 、乙酸 、三乙胺试剂的分离效
果;试验了不同流动相比例的乙腈-水 、乙腈-
0.2%三乙胺溶液。结果显示 , 乙腈-0.2%三乙胺
的流动相系统分离效果最好 。
参考文献
[ 1] 　卢其能.江西林业科技 , 2002 , (1):5
[ 2] 　赵　亚 , 刘合刚.中草药 , 1999 , 30(3):228
[ 3] 　凌育赵 , 曾满枝 , 严志云.精细化工 , 2005 , 22(10):
766
[ 4] 　国家药典委员会编.中华人民共和国药典一部.北
京:化学工业出版社 , 2000
HPLC determination of acanthoine ruscope-ine from Ardisia mamillata
LINGYu-zhao＊1 and ZENG Man-zhi 2(1.Department of Chemistry and Chemical engineeting ,Zhongkai Agrotechnical
Collage , Guangzhou 510225;2.Department of Applied Chemistry , South China Agricultural University , Guangzhou
510642), Fenxi Shiyanshi , 2008 , 27(5):95 ～ 97
Abstract:To develop a method for quinnazolidone alkaloid from ardisia mamillata.Diamonsil C18(250 mm×4.6mm ,
5 μm)column was used , andmobile phase was V(0.2%of triethylamine)∶V(acetonitrile)=35∶65.The UV detec-
tion wavelength was 345 nm , the flow rate was 1.0 mL min.The results shows the selected components were success-
fully separated under this chromatographic system , and the linear range was 0.02 ～ 0.15 μg (r=0.9995)for acan-
thoine ruscope-ine.The method is reliable , sensitive and accurate for improveing the quantification.
Keywords:Ardisia mamillata;Acanthoine ruscope-ine;HPLC
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