全 文 :基金项目:湖南省教育厅重点项目(编号:16A904)
作者简介:邵金华,女,湖南科技学院高级实验师,哈尔滨商业大学在
读博士研究生。
通信作者:马永强(1963—),男,哈尔滨商业大学教授,博士。
E-mail:qyma163@126.com
收稿日期:2016—09—30
第32卷第12期
2 0 1 6年1 2月 食 品 与 机 械
OOD&MACHINERY Vol.32,No.12
Dec.2 0 1 6
DOI:10.13652/j.issn.1003-5788.2016.12.036
虎舌红多糖超声波辅助提取工艺优化
及其抗氧化活性评价
Ultrasonic-assisted extraction of polysaccharide from ardisia mamilata and
the evaluation of its antioxidant activity
邵金华1,2,3
SHAO Jin-hua1,2,3
马永强1
MA Yong-qiang1
何福林2,3
HE Fu-lin2,3
黎 涛2,3
LI Tao2,3
杨宇翔2,3
YANG Yu-xiang2,3
(1.哈尔滨商业大学,黑龙江 哈尔滨 150076;2.湘南优势植物资源综合利用湖南省重点实验室,
湖南 永州 425100;3.湖南科技学院,湖南 永州 425100)
(1.Harbin University of Commerce,Harbin,Heilongjiang150076,China;2.Key Laboratory of Comprehensive
Utilization of Advantage Plants Resources in Hunan South,Yongzhou,Hunan 425100,China;
3.Hunan University of Science and Technology,Yongzhou,Hunan 425100,China)
摘要:以虎舌红为原料,蒸馏水为提取剂,对超声波辅助提取
虎舌红多糖的工艺进行优化,并对虎舌红多糖的抗氧化性进
行评价。结果表明:虎舌红多糖最佳提取工艺为提取温度
65℃,提取时间20min,料液比115(g/mL),提取次数
4次,该条件下虎舌红多糖得率为(3.42±0.28)mg/g。虎舌
红多糖有较好的抗氧化活性,当多糖浓度达到4mg/mL时,
对DPPH清除率强于相同浓度BHT;0.5%多糖对猪油抗氧
化效果与相同浓度BHT相当。
关键词:虎舌红;多糖;超声波辅助提取;抗氧化活性
Abstract:A orthogonal test was utilized to optimize the ultrasonic-as-
sisted extraction process of the polysaccharide in Ardisia mamillata
based on the single-factor experiment,and its antioxidant activity
was evaluated.The results demonstrated that the polysaccharide in
Ardisia mamillatacould be extracted best by using distiled water as
the extracting agent,with the solid-liquid ratio 115(g/mL)was
treated,ultrasonated at 65℃for 20min,for 4times.Thus the ex-
tracting rate of the polysaccharide from Ardisia mamillata was
(3.42±0.28)mg/g.Moreover,it was also found that the polysac-
charide formArdisia mamillata possessed good antioxidant activity.
It was tested that the polysaccharide showed stronger clear ability of
DPPH than that of BHT at concentration 4mg/mL,and 0.5%poly-
saccharide had comparable antioxidant effect on lard with that
of BHT.
Keywords:Ardisia mamillata;polysaccharide,ultrasonic-assisted
extraction,antioxidant activity
虎舌 红 (Ardisia mamillata Hance),是 紫 金 牛 科
(Myrsinaceae)紫金牛属(Ardisia Swartz)植物,又叫天仙红
衣、金丝红珠、红毛毡、毛凉伞、宝鼎红等,原产于中国,分布
于湖南、广西、四川、江西等地[1]。该植物多供药用,具清热
利湿、止咳化痰、抗癌、消肿解毒、活血止血等功效[2]。目前,
对于虎舌红活性成分的研究,主要集中于虎舌红挥发油[3]、
生物碱[4]、黄酮类成分[5-6]的研究。
多糖是一种重要的活性成分,具有抗氧化、抗病毒、抗肿
瘤、降血糖、调节免疫、抗衰老、抗凝血的功能[7]。目前,对虎
舌红多糖的研究较少,仅有一篇[8]关于虎舌红分离纯化与性
质研究,在80℃下加热回流水提取。关于虎舌红多糖超声
波辅助提取工艺及其抗氧化活性的研究,未见有相关报道。
加热回流水提,能量消耗大、提取时间长、得率较低,而且多
糖在提取的过程中容易造成降解,活性降低[9]。超声波辅助
提取法具有效率高、耗能低、溶剂用量少等特点,已应用于多
种植物有效成分提取[10-11],但在虎舌红多糖提取方面未见
应用报道。本研究拟采用超声波辅助水提法提取虎舌红多
糖,考察各个因素对虎舌红多糖得率的影响,在单因素试验
基础上,利用正交试验对试验条件进行优化,并对其抗氧化
活性进行评价,旨在为虎舌红多糖进一步研究提供理论基
础,为新型抗氧化剂开发提供理论依据。
661
1 仪器与试剂
1.1 材料与试剂
虎舌红:采摘自湖南省永州湖南科技学院西山;
猪油:本实验室用市售猪板油制得;
葡萄糖、抗坏血酸、硫酸、苯酚、铁氰化钾、三氯乙酸、磷
酸氢二钠、磷酸二氢钠:分析纯,天津博迪化工股份有限
公司;
1,1-二苯基-2-三硝基苯肼、2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚:
分析纯,国药集团化学试剂有限公司。
1.2 仪器
超声波细胞粉碎机:scient29s-IIIN型,宁波新芝生物科
技股份有限公司;
可见分光光度计:H722B型,上海舜宇恒平科学仪器有
限公司;
电热真空干燥箱:DZF-6020型,北京中科环试仪器有限
公司;
电子天平:JA3003型,上海舜宇恒平科学仪器有限
公司;
旋转蒸发仪:R201D-Ⅱ型,郑州长城科工贸易有限公司;
循环水式真空泵:SHZ型,巩义市予博仪器设备贸易有
限公司。
1.3 试验方法
1.3.1 多糖提取流程
虎舌红全草→切成1cm小段→60℃烘干、粉碎,过60目
筛→乙醚回流脱脂[料液比125(g/mL),回流脱脂3h]→脱
脂后的残渣烘干(真空干燥60℃)、粉碎(40目)→超声波辅
助蒸馏水提取→纱布过滤后抽滤→上清液(粗提取液)→活
性炭脱色(2.5%搅拌40min)→抽滤→上清液真空浓缩
(75℃)为原体积的1/4→加入无水乙醇,至乙醇的终体积分
数为75%→静置36h后取沉淀→65℃真空干燥→虎舌红粗
多糖
1.3.2 虎舌红多糖含量测定 采用苯酚—硫酸法[12]。
(1)葡萄糖标准曲线绘制:精密称取干燥至恒重的葡萄
糖对照品50mg,置于500mL容量瓶中,加水溶解并稀释至
刻度,摇匀,即得葡萄糖对照品贮备液。准确量取上述对照
品贮备液0.0,1.0,2.0,3.0,4.0,5.0mL,分别置于10mL容
量瓶中,再分别各取1mL加浓硫酸7.5mL和5%苯酚
1.5mL,在490nm波长处测定吸光度(A490nm)。
(2)样品多糖的含量测定:将浓缩的虎舌红多糖提取液
置于10mL容量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,取1mL加浓
硫酸7.5mL和5% 苯酚1.5mL,在490nm波长处测定吸光
度(A490nm)。虎舌红多糖得率按式(1)计算:
P =
c×n×v
1 000×m
, (1)
式中:
P———多糖得率,mg/g;
c———样品浓度,μg/mL;
n———稀释倍数;
v———稀释体积,mL;
m———样品质量,g。
1.3.3 虎舌红多糖提取工艺优化
(1)料液比对虎舌红多糖得率的影响:准确称取10.0g
虎舌红脱脂后干燥粉末,料液比分别为115,120,1
25,130,135(g/mL),超声温度为55 ℃,提取时间
20min(提取3s,间隔2s),提取次数1次,考察料液比对多
糖提取得率的影响。
(2)提取时间对虎舌红多糖得率的影响:准确称取
10.0g虎舌红脱脂后干燥粉末,料液比按1.3.3(1)最优值,设
置超声波提取时间分别为10,15,20,25,30min(提取3s,间
隔2s),提取温度55℃,提取1次,考察提取时间对虎舌红
多糖提取得率的影响。
(3)提取温度对虎舌红多糖得率的影响:准确称取
10.0g虎舌红脱脂后干燥粉末,料液比按1.3.3(1)最优值,设
置超声波提取时间为1.3.3(2)最优值,水提,设置提取温度
为50,55,60,65,70℃,提取1次,考察提取温度对虎舌红多
糖提取得率的影响。
(4)提取次数对虎舌红多糖得率的影响:准确称取
10.0g虎舌红脱脂后干燥粉末,料液比按1.3.3(1)最优值,设
置超声波提取时间为1.3.3(2)最优值,提取温度为1.3.3(3)
最优值,分别提取1,2,3,4,5次,考察超声温度对虎舌红多
糖提取得率的影响。
(5)正交优化设计:在单因素试验的基础上,以多糖提
取得率为检测指标,采用L9(34)进行4因素3水平正交试
验,综合考察多因素对多糖提取得率的影响。
1.3.4 多糖抗氧化活性检测
(1)DPPH 自由基清除能力测定:向试管中依次加入
6.5×10-5 mol/L DPPH·溶液2.5mL,分别加入5,10,15,
20,25mg/mL虎舌红多糖提取液1mL、相同浓度BHT(阳
性对照),蒸馏水补足到4mL,蒸馏水做对照,各管混合均
匀,避光保存20min后,在517nm 处测定吸光度值[13]。样
品对 DPPH自由基的清除率按式(2)计算:
K =
A0-A
A0
×100% , (2)
式中:
K———DPPH自由基清除率,%;
A0———对照吸光度;
A———样品吸光度。
(2)虎舌红多糖对猪油抗氧化能力测定:将猪油试样
100g,按照质量百分比0.1%,0.3%,0.5%,0.7%,0.9%加入
虎舌红多糖,以0.5% BHT为对照,搅拌均匀,然后置于
(60±2)℃的烘箱自氧化,每48h取样测定猪油的过氧化
值[14]。按GB/T 5538—2005测定油脂的过氧化值。
2 结果与分析
2.1 葡萄糖标准曲线绘制
由图1可知,在10~50μg/mL的浓度范围内,葡萄糖标
准溶液浓度与吸光度有良好的线性关系。
761
提取与活性 2016年第12期
图1 葡萄糖标准曲线
Figure 1 Standard curve of glucose
2.2 虎舌红多糖提取工艺优化
2.2.1 料液比对虎舌红多糖得率的影响 由图2可知,随着
溶剂量的增加,虎舌红多糖得率逐渐增大,当料液比为120
(g/mL)时,多糖得率最大,之后多糖得率反而降低。在相同
条件下,随着溶剂量的增加,多糖溶出量增加,溶剂量达到一
定值后,多糖完全溶出,再增加溶剂的量,多糖得率不再增加,
反而下降,可能是随着溶剂增加,促进了其它物质溶出,抑制
多糖溶出;再者,溶剂量的增加,为后续浓缩操作带来困难,影
响脱色剂用量。综合考虑,确定最佳料液比为120(g/mL)。
不同字母表示存在显著性差异(P<0.05)
图2 料液比对虎舌红多糖得率影响
Figure 2 Effect of material-liquid ratio on yield of polysac-
charides from Ardisia mamillata Hance
2.2.2 提取时间对虎舌红多糖得率的影响 由图3可知,随
着提取时间的增加,虎舌红多糖的得率也随之增大,在
25min时达到一个最大值,之后虎舌红多糖的得率下降,可能
是提取时间过长,虎舌红多糖分解产生单糖,从而导致虎舌红
多糖得率下降。综合考虑,确定最佳提取时间为25min。
2.2.3 提取温度对虎舌红多糖得率的影响 由图4可知,随
着提 取温度提高,虎舌红多糖得率增大,达到60℃时,得率
不同字母表示存在显著性差异(P<0.05)
图3 提取时间对虎舌红多糖得率影响
Figure 3 Effect of ultrasonic time on yield of polysaccharides
fromArdisia mamillata Hance
不同字母表示存在显著性差异(P<0.05)
图4 提取温度对虎舌红多糖得率影响
Figure 4 Effect of ultrasonic temperature on yield of poly-
saccharides from Ardisia mamillata Hance
最高,之后虎舌红多糖得率下降。可能是随着提取温度升
高,液体介质黏度以及表面张力降低,但液体蒸气压增大,因
而在液体介质中间容易拉开进而形成空化作用,使细胞破碎
度增加,促使细胞多糖向外扩散,促使多糖得率增大,但当温
度再增加,使细胞破碎度过大,促使多糖外的其它杂质被溶
出,多糖得率下降。因此,确定60℃为最佳提取温度。
2.2.4 提取次数对虎舌红多糖得率的影响 由图5可知,随
着提取次数增加,多糖得率逐渐增加,提取次数达到3次后
再增加提取次数时,多糖得率变化不大。可能是提取3次
后,多糖已经完全浸出,固液相达到了平衡,再者,提取次数
增加,能量消耗增大。综合考虑,虎舌红多糖提取次数选择
3次。
不同字母表示存在显著性差异(P<0.05)
图5 提取次数对虎舌红多糖得率影响
Figure 5 Effect of extraction times on yield of polysaccha-
rides from Ardisia mamillata Hance
2.2.5 正交试验 正交试验因素水平见表1,结果见表2,
方差分析见表3。
由表2可知,影响虎舌红多糖得率因素的次序为:C>A>
B>D,最佳工艺参数为:A3B1C1D3,即超声温度为65℃,
超声时间为20min,料液比为115(g/mL),提取次数为4
表1 正交试验因素水平表
Table 1 Factors and levels of orthogonal test table
水平
A超声温
度/℃
B超声时
间/min
C料液比
(g/mL)
D提取
次数
1 55 20 115 2
2 60 25 120 3
3 65 30 125 4
861
第32卷第12期 邵金华等:虎舌红多糖超声波辅助提取工艺优化及其抗氧化活性评价
表2 正交试验结果表
Table 2 Orthogonal test results and analysis table
试验号 A B C D
多糖得率/
(mg·g-1)
1 1 1 1 1 2.75
2 1 2 2 2 1.86
3 1 3 3 3 1.06
4 2 1 2 3 3.36
5 2 2 3 1 1.65
6 2 3 1 2 2.65
7 3 1 3 2 2.56
8 3 2 1 3 2.96
9 3 3 2 1 2.93
k1 1.890 2.890 2.787 2.443
k2 2.553 2.157 2.717 2.357
k3 2.817 2.213 1.757 2.460
R 0.927 0.733 1.030 0.103
表3 方差分析表
Table 3 Variance analysis of orthogonal experiments
方差来源 偏差平方和 自由度 F 比 显著性
A 1.368 2 76.000 *
B 0.999 2 55.500 *
C 1.987 2 110.389 *
D 0.018 2 1.000
误差(D) 0.018 2
F 临界值19.000;*表示差异显著,P<0.05。
次。由表3方差分析可知,超声温度、超声时间、料液比对虎
舌红多糖得率都有显著影响。由于正交表中无A3B1C1D3试
验组,对此试验组进行了3次验证实验,此条件下,虎舌红多
糖得率为(3.42±0.28)mg/g,得率高于其它试验组。
2.3 虎舌红多糖抗氧化活性研究
2.3.1 DPPH自由基清除能力测定 由图6可知,随着虎舌
红多糖、BHT浓度增大,对DPPH 清除率逐渐增大,呈现一
定的量效关系,当虎舌红多糖浓度达到4mg/mL时,其对
DPPH清除率效果强于BHT。
2.3.2 虎舌红多糖对猪油抗氧化能力测定 由表4可知,随
着多糖含量增加,对猪油的抗氧化效果增强,0.05% 多糖与
0.05%BHT抗氧化效果较接近,此时,BHT抗氧化效果好于
多糖;当多糖浓度达到0.07%,多糖的抗氧化效果好于BHT。
由此可见,虎舌红多糖抗氧化效果较好,但是因为其是粗多
糖,需要进一步纯化,纯化后的抗氧化效果可能好于BHT。
不同字母表示存在显著性差异(P<0.05)
图6 虎舌红多糖、BHT对DPPH清除作用
Figure 6 Inhibitory effects of polysaccharides from Ardisia
mamillata Hance and BHT on DPPH
表4 虎舌红多糖、BHT对猪油抗氧化作用
Table 4 Antioxidation effect(POV)of polysaccharides from Ardisia mamillata Hance and BHT on lard
meq/kg
多糖浓
度/%
天数/d
2 4 6 8 10 12 14
0.00 14.35±0.17 16.54±0.26 19.26±0.21 23.45±0.23 41.32±0.18 54.63±0.23 68.41±0.29
0.01 2.31±0.22 5.26±0.19 8.79±0.22 10.86±0.26 12.69±0.21 17.88±0.19 22.41±0.31
0.03 2.12±0.19 4.85±0.23 6.24±0.24 9.36±0.21 11.54±0.27 15.86±0.29 20.65±0.26
0.05 1.96±0.25 3.85±0.15 5.68±0.17 7.63±0.17 10.49±0.33 14.75±0.22 18.54±0.22
0.07 1.85±0.21 2.24±0.26 5.15±0.18 7.06±0.24 9.21±0.28 13.06±0.27 17.98±0.27
0.09 1.26±0.30 1.98±0.24 4.79±0.26 6.75±0.19 8.41±0.25 11.54±0.31 13.05±0.25
BHT0.05% 1.95±0.26 3.24±0.21 5.87±0.27 7.77±0.18 10.26±0.24 14.26±0.28 18.13±0.24
3 结论
本试验结果表明,虎舌红多糖超声辅助提取工艺的最佳条
件为提取温度65℃,提取时间20min,料液比115(g/mL),提
取4次,该条件下虎舌红多糖得率为(3.42±0.28)mg/g。
通过本试验证明虎舌红多糖具有较好的抗氧化活性,粗
多糖浓度达到5mg/mL时,对DPPH清除率强于相同浓度
BHT,在对猪油抗氧化试验过程中发现,粗多糖浓度达到
0.7%时,对猪油的抗氧化效果强于对照0.5%BHT。虎舌红
粗多糖的后续纯化、结构分析以及其结构与抗氧化性构效关
系研究还有待进一步研究。
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(下转第195页)
961
提取与活性 2016年第12期
3 结论
采用干热后处理技术,通过正交试验优化干热后处理工
艺,研究干热后处理改善夏季成品绿茶风味品质的工艺参数
和实际效果。结果表明,干热后处理改善夏季成品绿茶风味
品质的最佳工艺参数为处理温度55℃、处理前茶叶水分
9%、处理时间6.0h,经处理后的夏季绿茶陈气味褪去、苦涩
味减弱,呈现出“栗香高浓、醇厚较爽”的风味特征,表明干热
后处理能有效地改善夏季绿茶的风味品质,对去除陈气味、
提高香气、降低苦涩味具有显著效果。但在处理过程中,干
茶色泽和汤色得分逐渐减少,绿度不断下降而黄度不断显
露,这对茶叶的外形品质有一定影响。因此,在提高香气、滋
味品质的前提下,如何实现“保色”或减缓色泽变化有待进一
步研究。
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