全 文 ：小叶女贞对免疫功能损伤小鼠 T淋巴细胞
免疫功能的调节作用
韩兆东　阮月芹　宋月雁　侯佃臻　孙丰润　孔祥华
滨州医学院附属医院中心实验室　滨州市　256603
【摘要】　目的　研究小叶女贞对免疫功能损伤小鼠 T淋巴细胞免疫功能的调节作用。方法　以免疫功能损伤小鼠为研究对
象 , 将实验鼠随机分为 5组 ,每组 12只 ,分别为生理盐水(NS)对照组 、环磷酰胺(Cy)对照组 、Cy+小叶女贞水煎液(小剂量)
组 、Cy+小叶女贞水煎液(大剂量)组 、Cy+女贞子水煎液组。利用流式细胞仪检测实验鼠外周血 T淋巴细胞(CD4+、CD8+)
的百分率 , 计算 CD4+/ CD8+比值 ,用全自动酶标仪检测外周血IL-2的含量。结果　小叶女贞小剂量组和大剂量组 CD4+T细
胞 、CD4+/ CD8+、IL-2的含量分别与环磷酰胺组比较均明显增高 ,有显著性差异(P<0.01);与生理盐水对照组比较 , 小剂量
组无显著性差异(P>0.05)、大剂量组明显增高 ,有显著性差异(P<0.01);与女贞子对照组比较 , 小剂量组结果低 , 有显著性
差异(P<0.01)、大剂量组无显著性差异(P>0.05)。结论　小叶女贞能使小鼠受损伤的免疫功能得到改善 , 能提高 CD4+T
细胞的数量和 IL-2含量 , 对免疫功能的调节作用与剂量成正相关。小叶女贞对 T淋巴细胞免疫功能的调节机制是促进 T淋
巴细胞分化 、发育为成熟的 CD4+T细胞 ,达到调节机体细胞免疫功能的作用。
【关键词】　小叶女贞;小鼠;免疫功能损伤;T淋巴细胞免疫功能;调节作用
【中图分类号】　R392　【文献标识码】　A　【文章编号】　 1001-9510(2008)04-0258-04
AModulationeffectofligustrumquihouicarr(LQC)ontheimmune
functionofTlymphocytesinmousewithimpairedimmunefunction
HANZhaodong　RUANYueqin　SONGYueyan　etal
AffiliatedHospitalofBinzhouMedicalUniversity, Binzhou256603
【Abstract】　Objective　Toexplorethemodulationefectandmechanismofligustrumquihouicarr(LQC)ontheimmunefunctionof
Tlymphocytesinmousewhoseimmunefunctionwasdamaged.Methods　Micewithimpairedimmunefunctionwereexperimentalani-
mal, anddividedintofivegroupsrandomly, twelvemiceineverygroup, thedecoctionofLQCactedasexperimentalsample, usingthe
Cyclophosphamideand0.9% NaClasthepositivecomparisonsampleandnegativecomparisonsamplerespectively, LQCminordose,
majordose, andfructusligustrilucidi, addingCyclophosphamiderespectively, ThepercentageofTlymphocytes(CD4+、CD8+)inthe
peripheralbloodoftheexperimentalmicewasdetectedbyflowcytometer, thencalculatedtheratioofCD4 +toCD8 +, thecontentof
IL-2 intheperipheralbloodisexaminedbyDenley.Results　ContrastminordosegroupandmajordosegroupwithCyclophosphamide
grouprespectively, theresultwasthatthecontentofCD4+TcellCD4+/CD8+IL-2 allimproveddramatically, withsignificantdiffer-
ence(P<0.01).Whendrawingaparalelbetween0.9% NaClandminordosegroup, therewasnosignificantdifference(P>
0.05).Butwhencomparedwiththemajordosegroup, therewassignificantdifferencebetweenthem(P<0.01).Comparedwithfructus
ligustrilucidi, intheminordosegroup, thecurativeeffectwasworse, therewassignificantdifference(P<0.01).Butinmajordose
group, therewasnosignificantdifferencebetweenthem(P>0.05).Conclusion　Theimmunefunctionofthedamagedmicewere
improvedbyLQC, whichalsocouldincreasethequantityofCD4 +TcelandthecontentofIL-2.ThedoseofLQCwaspositivelycorre-
latedwiththemodulationeffectofLQContheimmunefunction.ThemechanismofregulationofLQContheimmunefunctionofTlym-
phocytescouldberealizedbypromotingthedifferentiationofTlymphocytesanddevelopingtobematureCD4+Tcels, sothatitcan
regulatethecelimmunefunctionofbody.
【Keywords】　ligustrumquihouicarr(LQC), mouse, impairedimmunefunction, immunefunctionofTlymphocytes, modulation
effect
　　小叶女贞又叫小白蜡 ,为木犀科女贞属植物小
叶女贞(ligustrumquihouicarr, LQC)的果实[ 1] ,性
凉 、味苦 , 和女贞子属于同科同属植物。初步研
究 [ 2, 3]表明 ,小叶女贞可使 ConA激发的 T淋巴细胞
增殖反应明显增强 ,对细胞因子 IL-2有促进作用 ,
能促进 IL-1的分泌 ,调节骨髓造血功能 。但小叶女
贞对免疫功能损伤动物的免疫调节作用未见报道。
我们以免疫功能损伤小鼠为研究对象 ,以小叶女贞
的水煎液为实验样品 ,以女贞子的水煎液和生理盐
水为阳性对照品和阴性对照品 ,利用流式细胞仪检
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测实验小鼠外周血 T淋巴细胞(CD4+、CD8+)的百
分率 ,计算 CD4+ /CD8+比值 ,用全自动酶标仪检测
IL-2的含量。研究在病理状态下 ,小叶女贞对小鼠
T淋巴细胞免疫功能的调节作用及机制 ,为进一步
开发 、利用小叶女贞提供理论依据。
1　材料与方法
1.1　材料
1.1.1　药品和试剂:小叶女贞和女贞子(由滨州医
学院附属医院中药房提供),环磷酰胺(购于滨州医
学院附属医院西药房)。Rat荧光单克隆抗体 CD3-
PC5, CD4-PE, CD8-FITC;同型对照 IgG2a-PE、IgG2a-
FITC购于美国 CALTAGLaboratories公司。全血溶
血试剂购自美国 Coulter公司 。 IL-2试剂盒购于深
圳晶美生物工程有限公司 。
1.1.2　动物:健康 BALB/C小鼠 60只 ,体重 18 ～
22 g,雌雄不限 ,购于北京医科大学实验动物中心。
1.1.3　仪器:FC-500大型流式细胞仪 、Q-PREP溶
血制备仪均为美国贝克曼库尔特公司生产 , Denley
全自动酶标仪。
1.2　方法
1.2.1　样品制备:取小叶女贞或女贞子 400 g,加蒸
馏水 2 500ml浸泡 2 h,水煎 ,煮沸 30min,过滤 ,药
渣加水 1 000 ml,二次水煎 ,取滤液(压渣),合并水
煎液 ,浓缩成 400ml,即为样品水煎液 。
1.2.2　动物分组:将小鼠随机分为 5组 ,每组 12
只 。 Ⅰ组为生理盐水(NS)对照组 , NS0.2 ml/d, 皮
下注射 ,共 10 d,第 8日起用 NS灌胃 , 0.2 ml/(d·
只),共 7d。Ⅱ组环磷酰胺(Cy)对照组 , Cy0.8ml/
d,皮下注射 [ 20 mg/(kg· d)] ,共 10 d,第 8日起用
NS灌胃同 Ⅰ组。 Ⅲ组为 Cy+小叶女贞水煎液组
(小剂量),注射 Cy同 Ⅱ组 ,第 8日起胃饲小叶女贞
水煎液 0.2 ml/(d·只),共 7 d。 Ⅳ组为 Cy+小叶
女贞水煎液(大剂量)组 ,注射 Cy同 Ⅱ组 ,第 8日起
胃饲小叶女贞水煎液 0.4 ml/(d·只),共 7 d。 Ⅴ
组为 Cy+女贞子水煎液组 ,注射 Cy同 Ⅱ组 ,第 8日
起胃饲女贞子水煎液 0.2 ml/(d·只),共 7d。
1.2.3　标本采集及处理:所有受试小鼠均摘取眼球
取外周血 ,分别置于含 EDTA-K2防凝管和小塑料管
中 ,室温保存 ,在 12 h内检测分析。
1.2.4　流式细胞仪分析:①首先用 Flow-check进行
光路和流路校准 ,使所有荧光信号 CV﹤ 2%。 ②在
标有同型对照的试管中分别加入 CD3-PC5单克隆
抗体和 IgG2a-FITC和 IgG2a-PE同型对照试剂各 5
μl,再加入正常小鼠 K2 -EDTA防凝血 100 μl(5 ×
10
5 cels)混匀 ,室温避光 15 min后 ,在标本制备仪
上溶血 、固定上机。以前向散射光(FSC)及侧向散
射光(SSC)设门(A)于淋巴细胞群(图 1),以 CD3-
PC5及 SSC设门(H)于 CD3+细胞(图 2),调节电压
使同型对照细胞位于阴性区(图 3、4)。 ③在标有
CD4、CD8的试管中分别加入 CD3-PC5和 CD4-PE
及 CD8-FITC单克隆抗体各 5μl,分别加入各实验小
鼠 K2 -EDTA防凝血 100 μl(5×105 cels)混匀 ,室温
避光 15min后 ,在标本制备仪上溶血 、固定上机 ,调
节颜色补偿 ,分析各组每一实验小鼠 CD4+、CD8+
细胞的百分率 。计算 CD4+ /CD8+比值。
1.2.5　IL-2的测定:严格按试剂盒说明书进行操
作 ,全自动酶标仪定量测定小鼠外周血 IL-2含量 。
2　结果
2.1　实验各组 CD4+、CD8+、CD4+ /CD8+、IL-2测
定结果见表 1。
图 1　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　图 2
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图 3　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　图 4
表 1　小叶女贞对免疫功能损伤小鼠 T淋巴细胞和 IL-2的作用 (x±s)
组　别 小鼠(只) CD4+(%) CD8+(%) CD4+/CD8+ IL-2(pg/ml)
〗盐水对照组 (Ⅰ) 12 52.84 ±2.99 43.90 ±3.28 1.21 ±0.13 31.80 ±3.70
环磷酰胺组 (Ⅱ) 12 40.53 ±6.70 57.03 ±5.22 0.72 ±0.16 15.26 ±2.51
小叶女贞低剂量组 (Ⅲ) 12 52.54 ±2.98＊ 44.46 ±3.08＊ 1.18 ±0.14＊ 28.67±1.91＊
小叶女贞高剂量组(Ⅳ) 12 61.44 ±3.78# 36.12 ±3.70# 1.72 ±0.29# 32.80±2.25#
女贞子对照组(Ⅴ) 12 60.90 ±7.42 34.17 ±8.66 1.93 ±0.75 34.00 ±1.32
　　注:＊示分别与环磷酰胺组 、高剂量组 、女贞子组比较 , P<0.01;与盐水对照组比较 , P>0.05。
　　#示分别与环磷酰胺组 、低剂量组 、盐水对照组比较 , P<0.01;与女贞子组比较 , P>0.05。
　　各组指标检测结果经统计学处理 , CD4+T细胞
数 、CD4+ /CD8+比值 、IL-2的五组均数方差分析分
别为 F=23.6、F=19.8、F=40.6 , P均 <0.01,有统
计学意义 。
2.2　流式细胞仪检测实验鼠 CD4+、CD8+结果　小
叶女贞小剂量组(图 5),小叶女贞大剂量组(图 6)。
图 5
图 6
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3　讨论
本实验以免疫功能损伤小鼠为研究对象 ,以小
叶女贞的水煎液为实验样品 ,以女贞子的水煎液和
生理盐水为阳性对照品和阴性对照品 ,研究了小叶
女贞对免疫功能损伤小鼠 T淋巴细胞的调节作用
和机制 。研究结果显示 ,小叶女贞水煎液能提高免
疫功能损伤小鼠 CD4+T细胞的数量和 IL-2含量 ,
说明小叶女贞能使受损伤动物的免疫功能得到改
善 ,并提高机体的细胞免疫功能。小叶女贞低剂量
组能将受损伤小鼠的免疫功能调节至与盐水对照组
相近的水平 ,对免疫功能的调节作用与剂量成正相
关 。小叶女贞与女贞子对照组比较 ,有相同的免疫
调节作用。由于 CD4+或 CD8+T细胞是在胸腺内
发育 、分化形成的成熟 T淋巴细胞 , T细胞的发育过
程更倾向于形成 CD4+T细胞 ,在胸腺中以及在外周
血的 CD4+是 CD8+T细胞的 1 ～ 2倍 ,是 T淋巴细
胞免疫功能的重要标志。 IL-2是 T淋巴细胞从细胞
周期 G1期到 S期生长有关的主要细胞因子 ,是 T细
胞主要的自分泌生长因子[ 4, 5] 。因此 ,小叶女贞对 T
淋巴细胞的调节机制可能是促进 CD4+T淋巴细胞
的分化 、发育 、成熟 。达到调节提高机体细胞免疫功
能的作用 ,这在治疗动物免疫性疾病方面有广泛的
应用前景 ,并为进一步研究 、开发 、利用小叶女贞提
供了理论依据 。
参　考　文　献
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生出版社 , 1983:75.
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[ 5]龚非力.医学免疫学 [ M] .北京:科学出版社 , 2004:144.
(收稿日期:2007-12-17)　　
(上接第 257页)
IL-6等 ,导致肝脏的慢性炎性损伤即酒精性肝病
(ALD)[ 4] 。另外乙醇可代替食物提供热量 ,致使长
期饮酒者往往不能保持正常饮食 ,导致糖 、蛋白质 、
脂肪的代谢紊乱 。有研究资料证实 ,戒酒 4 ～ 6周后
脂肪肝可恢复正常 ,彻底戒酒可使轻度至中度的酒
精性肝炎临床症状 、酶学改变乃至病理改变逐渐减
轻 。戒酒是社会应该密切关注的问题 ,相关研究表
明 ,积极 、成功地戒酒是防治 ALD最有效的措施 ,仅
此一项即可改变 ALD的进程 [ 5, 6] 。
本组资料观察发现 ,糖尿病易感患者由于存在
遗传易感性 ,酗酒时 ,乙醇及其代谢产物不仅诱发
和 /或加重胰岛素抵抗 ,同时导致胰岛 β细胞的损
伤 ,从而引起糖代谢紊乱的发生和发展。彻底戒酒
可以减轻肝脏的炎性损伤 ,降低血清炎性因子的水
平 。本组观察病例相对较少 ,随访时间较短 ,有待扩
大病例数进一步追踪观察。
参　考　文　献
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(收稿日期:2008-04-11)
·261·滨州医学院学报 2008年 8月第 31卷第 4期　BMUJournal, Aug.2008, Vol.31, No.4