全 文 ：［文章编号］ 1000 － 4718(2010)05 － 0952 － 04
［收稿日期］2009 － 09 － 27 ［修回日期］2010 － 01 － 20
* ［基金项目］国家自然科学基金资助项目(No. 30860393)
△通讯作者 Tel:0773 － 2895291;E － mail:kent@ glmc. edu. cn
狗肝菜多糖减轻 D －氨基半乳糖与脂多糖诱导的
大鼠急性肝损伤*
张小玲1，2， 肖胜军3， 容明智1，2， 沈 洁2， 张可锋4， 高 雅5， 朱 华5△
(桂林医学院 1机能学实验室，2 病理生理学教研室，3 病理学教研室，4 生药学实验室，广西 桂林 541001;
5广西中医学院中药鉴定学教研室，广西 南宁 530001)
［摘 要］ 目的:观察壮药狗肝菜多糖对 D －氨基半乳糖(D － GalN)及脂多糖(LPS)所致大鼠急性重症肝炎
的影响。方法:将 48 只雄性 Wistar大鼠随机分成模型、狗肝菜多糖高、低剂量和对照组;狗肝菜多糖高剂量组(300
mg·kg －1)、低剂量组(150 mg·kg －1)在造模前灌胃给药 6 d，其它各组用生理盐水对照;末次给药后 1h 除对照组
外均在腹腔内注射 D － GalN(500 mg· kg －1)和 LPS(20 μg /kg)建立大鼠急性重症肝炎模型，对照组用生理盐水对
照。于 6 h、12 h分别观察并计算各组动物死亡率;存活动物于 6 h行眶后静脉窦采血用于检测血清丙氨酸转氨酶
(ALT)、天冬氨酸转氨酶 (AST)、肿瘤坏死因子 α(TNF － α)、白介素 1β(IL － 1β);12 h 摘除眼球采血用于检测血
清 ALT、AST、TNF － α、IL － 1β和一氧化氮 (NO);分光光度法检测血清 ALT、AST、NO含量，ELISA法检测血清 TNF
－ α、IL － 1β水平。12 h后全部处死存活动物，肝组织切片观察肝脏病理形态学变化。结果:6 h各组动物均存活;
与模型组相比，狗肝菜处理组 12 h死亡率明显低于模型组。模型组血清 ALT、AST 活力和 TNF － α、IL － 1β、NO 水
平均升高，狗肝菜多糖高、低剂量组血清指标均明显低于模型组。模型肝组织大片坏死、淤血，狗肝菜多糖高、低剂
量组组织损伤程度明显降低，以高剂量组效果最佳。结论:狗肝菜多糖能减轻 D － GalN / LPS 诱导的肝损伤，可能
通过降低炎性介质 TNF － α、IL － 1β和 NO的水平发挥作用。
［关键词］ D －氨基半乳糖;脂多糖类;狗肝菜多糖;肝炎
［中图分类号］ R392. 32;R575. 1;R965. 1 ［文献标识码］ A doi:10. 3969 / j. issn. 1000 － 4718. 2010. 05. 024
Polysaccharides of Dicliptera chinensis (L.)Nees. alleviates liver injury
of GalN /LPS － induced fulminant hepatitis in rats
ZHANG Xiao － ling1，2，XIAO Sheng － jun3，RONG Ming － zhi1，2，SHEN Jie2，ZHANG Ke
－ feng4，GAO Ya5，ZHU Hua5
(1Department of Medical Function，2Department of Pathophysiology，3Department of Pathology，4Laboratory of Pharmacolo-
gy，Guilin Medical College，Guilin 541001，China;5Department of Authentication of Chinese Medicine，Guangxi Tradition-
al Chinese Medical University，Nanning 530001，China. E － mail:kent@ glmc. edu. cn)
［ABSTRACT］ AIM:To investigate the liver protective effects of polysaccharides of Dicliptera chinensis (L.)
Nees. on fulminant hepatitis caused by D － galactosamine (D － GalN)/ lipopolysaccharide (LPS)in rats. METHODS:
Male Wistar rats were divided into 4 groups (12 rats in each group)，including normal control group，GalN /LPS － treated
group，and two Dicliptera chinensis (L.)Nees. polysaccharides － treated groups (150 mg /kg，300 mg /kg，ig，respective-
ly). The Dicliptera chinensis (L.)Nees. polysaccharides and controlled normal saline (NS)were administered once 1 d
for 6 d. One hour after the latest administration，all animals except for the animals in control group were administered with
D － GalN (500 mg /kg，ip)，then treated with LPS 1 h later. The mortality was observed at 6 h and 12 h after modeling.
The serum samples were collected at 6 h and 12 h in the survival rats by retro － orbital sampling. All samples were meas-
ured for ALT，AST，TNF － α and IL － 1β. The samples collected at 12 h were also detected for NO. At 12 h，all survival
rats were sacrificed and liver section was prepared for histological evaluation. RESULTS:Pretreatment with polysaccha-
rides of Dicliptera chinensis (L.)Nees. significantly improved the histopathological changes and attenuated GalN /LPS － in-
·259· 中国病理生理杂志 Chinese Journal of Pathophysiology 2010，26(5):952 － 955
duced severe hepatotoxicity as evidenced by decrease in the levels of ALT and AST. The polysaccharides of Dicliptera
chinensis (L.)Nees. inhibited the elevated levels of TNF － α，IL － 1β and NO. CONCLUSION:Using Dicliptera
chinensis (L.)Nees. polysaccharides as anti － inflammatory reagent provides a definite protective way against fulminant
hepatitis caused by GalN /LPS in rat.
［KEY WORDS］ D － galactosamine;Lipopolysaccharides;Dicliptera chinensis (L.)Nees. Polysaccharides;Hep-
atitis
狗肝菜［Dicliptera chinensis (L.)Nees.］是爵床
科 (Acanthaceae)华九头狮子草属(Dicliptera)，全草
味甘、微苦、性寒，归心、肝、肺经。具有清热、凉血、
利湿、解毒、生津、利尿等功效［1］。狗肝菜为广西民
间药食两用的中草药，也是壮族地区常用壮药，主要
含有多糖、有机酸、氨基酸等物质［2］。多糖类中药具
有抗氧化及免疫调节作用［3］，有抗肝炎及肝损伤作
用［4］。为探讨狗肝菜多糖对急性重症肝炎的作用，
本研究采用了 D － 氨基半乳糖(D － galactosamine，
D － GalN)/脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)建立大鼠
急性重症肝炎模型，初步探讨狗肝菜多糖对急性重
症肝炎的药理作用。
材 料 和 方 法
1 材料
1. 1 主要试剂 狗肝菜多糖为本实验室提取，提取
方法见参考文献［5］。天冬氨酸氨基转移酶(aspartate
aminotransferase，AST)试剂盒(批号为 20080818)、
丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase，ALT)
试剂盒(批号为 20080808)、一氧化氮(nitric oxide，
NO)试剂盒(批号为 20090826)购自南京建成科技有
限公司;肿瘤坏死因子 α(tumor necrosis factor alpha，
TNF － α)ELISA 检测试剂盒(批号为 EIA05896)、白
细胞介素 1β(interleukin 1β，IL － 1β)ELISA 检测试
剂盒(批号为 EIA05833)购自 R＆D。
1. 2 实验动物及处理 SPF 级 Wistar 大鼠，体重
(200 ± 20)g，雄性，由桂林医学院实验动物中心提
供。实验大鼠适应性喂养 1 周(自由饮食、昼夜均
衡、温度 20 － 25 ℃、湿度 45% － 55%)后，随机分为
对照组、模型组、狗肝菜多糖高剂量组、狗肝菜多糖
低剂量组，每组 12 只大鼠。狗肝菜多糖高、低剂量
组大鼠分别以 300 mg·kg －1和 150 mg·kg －1灌胃给
药 6 d，对照组给予等容积生理盐水灌胃。末次给药
1 h后，模型组、狗肝菜多糖高剂量组、低剂量组大鼠
均同时给予 GalN (500 mg·kg －1，ip)，GalN 给药后
1 h 同时给予 LPS(20 μg·kg －1，ip);对照组大鼠经
腹腔注射给予等容积生理盐水 (NS)。经 LPS 处理
后 6 h、12 h，分别计算动物死亡率，6 h对存活大鼠行
眶后静脉窦采血，12 h摘除眼球采血、处死、取肝脏;
检测血清 ALT、AST 活力、TNF － α、IL － 1β 的水平;
检测 12 h血清的 NO 水平，并对大鼠肝脏左叶相同
部位进行病理组织学检查。
2 方法
2. 1 血清 ALT、AST 活力检测 通过检测血清
ALT、AST活力以评价大鼠肝脏损伤程度。具体操作
遵照南京建成科技公司提供的试剂盒说明。
2. 2 血清 NO含量测定 用硝酸还原酶法测定血清
中硝酸盐与亚硝酸盐含量，以反映血清 NO 水平。
操作按南京建成科技有限公司试剂盒说明书进行。
2. 3 血清 TNF － α、IL － 1β 含量测定 采用双抗体
夹心 ABC ELISA 法测定血清 TNF － α 含量，其操作
方法按照 R＆D提供的试剂盒说明进行。
2. 4 病理形态学改变观察 摘取小鼠肝脏后，立即
固定于 10%中性缓冲甲醛溶液中，对肝左叶相同位
置取材，流水冲洗，梯度乙醇脱水，二甲苯透明，石蜡
包埋切片，3 μm厚连续切片并进行 HE染色，光学树
脂胶封片，光镜下观察。
3 统计学处理
数据经统计软件 SPSS 11. 5 处理:计量资料采用
均数 ±标准差(珋x ± s)表示，组间比较采用独立样本 t
检验，计数资料组间比较采用卡方检验。
结 果
1 狗肝菜多糖对急性重症肝炎大鼠死亡率的影响
6 h 各组动物死亡率为 0%。与模型组相比，狗
肝菜处理组 12 h死亡率明显低于模型组，但只有高
剂量组有显著差异(P < 0. 05);狗肝菜多糖高剂量处
理组效果优于低剂量组，但没有显著差异，见表 1。
2 狗肝菜多糖对急性重症肝炎大鼠肝损伤的影响
经 D － GalN /LPS处理后，大鼠血清 AST、ALT活
力明显升高(与对照组比较，P < 0. 05);与模型组比
较，狗肝菜多糖处理组 AST、ALT 活力明显降低;其
中高剂量组具有显著差异(P < 0. 05)，见表 2。进一
步研究结果显示，经 GalN /LPS 处理后的小鼠肝脏出
现严重充血和坏死等病理改变，而狗肝菜多糖处理组
小鼠肝脏充血、坏死等病理改变明显减轻，见图 1。
·359·
表 1 狗肝菜多糖对 D －GalN /LPS处理大鼠死亡率的影响
Table 1. Effects of polysaccharides of Dicliptera chinensis (L.)Nees. on the mortality in D － GalN /LPS － treated rats(n = 12)
Group
Survival(n) Death(n) Motality(%)
6 h 12 h 6 h 12 h 6 h 12 h
Control 12 12 0 0 0. 00 0. 00
High dose polysaccharides + D － GalN / LPS 12 10* 0 2* 0. 00 16. 67*
Low dose polysaccharides + D － GalN / LPS 12 6 0 6 0. 00 50. 00
D － GalN / LPS 12 2 0 10 0. 00 83. 33
* P < 0. 05 vs D － GalN / LPS group.
表 2 狗肝菜多糖对 D －GalN /LPS处理大鼠血清谷丙转氨酶及谷草转氨酶活力的影响
Table 2. Effects of polysaccharides of Dicliptera chinensis (L.)Nees. on serum ALT and AST activity in D － GalN /LPS － treated rats
(珋x ± s. n = 12)
Group
Number of survival(n) ALT activity(U·L －1) AST activity(U·L －1)
6 h 12 h 6 h 12 h 6 h 12 h
Control 12 12 23. 97 ± 4. 60* 24. 02 ± 4. 53* 24. 28 ± 4. 83* 25. 79 ± 6. 45*
High dose polysaccharides + D － GalN / LPS 12 10 83. 38 ± 18. 53* 100. 90 ± 17. 14* 81. 85 ± 18. 94* 106. 86 ± 21. 49*
Low dose polysaccharides + D － GalN / LPS 12 6 122. 96 ± 26. 30 173. 71 ± 27. 59 151. 19 ± 27. 95 182. 56 ± 25. 51
D － GalN / LPS 12 2 160. 92 ± 27. 50 204. 50 ± 5. 90 158. 46 ± 25. 65 189. 58 ± 12. 44
* P < 0. 05 vs D － GalN / LPS group.
Figure 1. Effects of polysaccharides of Dicliptera chinensis (L.)Nees. on liver histopathological change in D － GalN /LPS － treated
rats (HE staining，× 400). A:the control liver tissue;B:the liver tissue of rats treated with high dose (n = 12)polysac-
charides of Dicliptera chinensis (L.)Nees，and then with D － GalN / LPS;C:the liver tissue of rats treated with low dose
polysaccharides of Dicliptera chinensis (L.)Nees.，and then with D － GalN / LPS;D:the liver tissue of rats administered
with D － GalN /LPS. P:portal area of hepatic lobules;CV:central vein of hepatic lobules.
图 1 狗肝菜多糖对 D －GalN /LPS处理大鼠肝脏组织病理学改变的影响
3 狗肝菜多糖对急性重症肝炎大鼠血清炎症介质
TNF －α、IL －1β、NO水平的影响
D －GalN/LPS处理后，大鼠血清 TNF － α、IL －1β、
NO水平明显升高(与对照组比较，P < 0. 05);狗肝菜
多糖处理组 TNF － α、IL － 1β、NO 水平明显低于模型
组;其中高剂量组具有显著差异(P <0. 05)，见表 3。
表 3 狗肝菜多糖对 D －GalN /LPS处理大鼠血清 TNF － α、IL －1β和 NO水平的影响
Table 3. Effects of polysaccharides of Dicliptera chinensis (L.)Nees. on serum TNF － α，IL － 1β and NO levels in D － GalN /LPS －
treated rats(珋x ± s. n = 12)
Group
Number of
survival(n)
Serum TNF － α
level (ng /L)
Serum IL － 1β
level (ng /L)
Serum NO
level (mmol /L)
6 h 12 h 6 h 12 h 6 h 12 h 12 h
Control 12 12 20. 57 ± 4. 76* 23. 17 ± 5. 43* 23. 24 ± 5. 76* 22. 16 ± 5. 08* 36. 12 ± 4. 79*
High dose polysaccharides + D － GalN / LPS 12 10 42. 30 ± 6. 70* 108. 75 ± 8. 82* 56. 24 ± 7. 67* 121. 24 ± 12. 45* 80. 17 ± 17. 80*
Low dose polysaccharides + D － GalN / LPS 12 6 74. 45 ± 10. 42 142. 45 ± 15. 32 98. 45 ± 14. 32 198. 47 ± 23. 14 127. 33 ± 15. 73
D － GalN /LPS 12 2 105. 15 ± 14. 65 197. 21 ± 18. 42 160. 28 ± 22. 63 262. 42 ± 31. 23 147. 25 ± 11. 62
* P < 0. 05 vs D － GalN / LPS group.
·459·
讨 论
D － GalN /LPS诱导的肝损伤与人类病毒性肝炎
在形态学和功能特征上非常相似，因此广泛用于实
验性肝损伤模型，用于评价护肝药物的保肝作用。
最近研究表明，GalN导致尿嘧啶核苷耗竭，这样导致
RNA和蛋白质合成障碍并最终导致肝细胞损伤;LPS
是一种内毒素，可活化单核巨噬细胞，使其合成和分
泌肿瘤坏死因子及其它炎性细胞因子，导致肝细胞
凋亡和坏死［6 － 9］。此外，氧自由基产生氧化应激也
是一个重要的损伤因素。多糖具有调节免疫和保肝
作用，在肝炎动物模型研究和肝炎的临床治疗中得
到广泛应用。研究表明狗肝菜多糖对 CCl4 所致急
性肝损伤具有保护作用［10］。本研究在建立 D － Gal
和 LPS诱导的大鼠急性重症肝炎的基础上，观察狗
肝菜多糖对肝损伤的保护作用;发现狗肝菜多糖可
以明显减轻肝组织坏死的范围和程度，降低增高的
血清转氨酶水平，减少炎症介质 TNF － α、IL － 1β 和
NO的分泌。
研究表明，TNF － α直接参与炎症反应的启动和
进展，并诱导肝细胞大量凋亡［11］，抑制其合成和活性
能减轻各种毒物导致的肝损伤，因此显示 TNF － α
是肝损伤的关键因子［6］。此外，TNF － α 能诱导其它
促炎因子包括 IFN － γ，IL － 1β，IL － 6 等而形成炎
症的级联放大效应，最终导炎症进展和肝损伤［9］。
NO也是一个具有多种功能的重要介质，与肝细胞的
保护和损伤相关［12］。NO 由肝脏实质和间质细胞通
过诱导型 NO合酶(iNOS)催化生成，能抑制线粒体
呼吸和 DNA 合成［13］，GalN /LPS 能增加 iNOS 的表
达，从而使大鼠肝脏产生大量的 NO，从而介导肝细
胞的损伤［14］。
本研究发现狗肝菜多糖可以减少炎症介质 TNF
－ α、IL － 1β和 NO 的分泌，可以明显减轻肝组织坏
死的范围和程度，降低增高的血清转氨酶水平，减少
肝损伤大鼠的死亡率。结果表明狗肝菜多糖对急性
肝损伤有保护作用，其机制可能通过抑炎介质效应，
减少炎症介质的生成与释放。避免炎症的级联放大
效应，从而在急性重症肝炎中起保护作用。
［参 考 文 献］
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