全 文 ：狼爪瓦松粗提物抑菌效果研究
丁 芬
1，王亚茹
2
1. 哈尔滨圣泰生物制药有限公司( 黑龙江 哈尔滨 150025) ; 2. 黑龙江省新利医药有限公司
摘 要 狼爪瓦松( Orostachys cartilagineus) 为景天科( Crassulaceae) 瓦松属( Orostachys) 的一种药用植物。研究
表明瓦松属植物中含有黄酮类、有机酸类、甾醇类、强心苷、景天庚酮糖酐和异丙叉景天庚酮糖酐等化学成分，药理作
用为抗病毒、抗菌、抗癌、强心、抗炎等，临床应用广泛。本实验主要对牡丹江镜泊湖火山熔岩地区的狼爪瓦松的 95%
乙醇提取物中三氯甲烷相通过纸片琼脂扩散法和MIC法进行了抑菌实验。研究结果表明:狼爪瓦松对革兰氏阳性菌
如:金黄色葡萄球菌、枯草杆菌抑菌活性较强;对革兰氏阴性菌如:大肠杆菌、变形杆菌的抑菌活性也较强，但前者比
后者抑菌效果明显。
关键词:狼爪瓦松;抑菌;纸片琼脂扩散法; MIC法
中图分类号:Ｒ285. 5 文献标识码:A 文章编号:1006 － 2882(2013)02 － 227 － 02
Study on Wolf Paw Fimbriata Extracts Antibacterial Effect
Ding Fen
Harbin Shengtai Biological Pharmaceuti cal Co.，Ltd(Hei longj iang Harbin 150025)
Abstract:Orostachys cartilaginous is the plants of Orostachys in Crassulaceae family. Orostachys are important and valua-
ble medicinal plants. The study showed that these plants contain flavonoids，organic acids，glycoside，sedoheptulosan，ispropyli-
dene sedoheptulosan and other chemical constituents. Pharmacological effect:anti － virus，anti － bacterial，anti － censer，cardi-
ac，anti － inflammatory etc. And they had extensive clinical application. The Anti － bacteria Effects of Orostachys cartilagineus
in chloroform fragment in 95% Ethanol extracts were studied by MIC and Agar diffusion method. The results showed that the
ingredient has biological activity which can prevent from growing of bacteria，especially it is obverious for Gram － Positive Bac-
teria.
Key words:Orostachys cartilagineus;Inhibiting bacteria experiment;Agar diffusion method;MIC
1 实验过程
1. 1 狼爪瓦松有机相的制备
将狼爪瓦松全草晒干，除去杂质、泥土后进行粉碎。获
得粗样 462. 5g。将粗样倒入烧杯中，体积约为 1. 7L，用 2 倍
于样本体积(3. 4L)的 95%乙醇浸泡 24h，浸泡过程中不断
搅拌。为了使药渣中成分尽量分配在水和 95%乙醇中，重
复浸提步骤 3 次，将的到的浸提液蒸馏致无乙醇味，体积为
550ml。用石油醚对浓缩液进行萃取，按石油醚:浓缩液 = 1:
1的比例混合，将石油醚相浓缩蒸干。蒸干的石油醚相用丙
酮洗脱转入小烧杯中，待丙酮挥干，获得石油醚相 2. 98g 。
将石油醚的萃余液继续用三氯甲烷萃取，方法同石油醚的
萃取。用三氯甲烷萃取 2 次，蒸干的三氯甲烷相用丙酮洗
脱转入小烧杯中，待丙酮挥干，获得三氯甲烷相 1. 36g。
取 0. 8g三氯甲烷相溶于 5ml DMSO 中，用无菌水定容
至 25ml，配制成抑菌液，抑菌液的浓度为 32mg /ml。取 5ml
DMSO，加 20ml 无菌水配制成对照液。
1. 2 狼爪瓦松三氯甲烷相的抑菌实验
1. 2. 1 培养基的制备
固体培养基:45g营养琼脂加 1000ml蒸馏水。
液体培养基:牛肉膏 3g、蛋白胨 10g、氯化钠 5g、蒸馏水
1000ml、最后调 pH到 7. 4。
1. 2. 2 菌种活化
将供试菌种分别接种于试管斜面培养基上，细菌置于
37℃恒温培养箱中培养，反复三次，使菌种性能逐渐恢复。
1. 2. 3 细菌菌悬液的制备
取培养好的试管斜面，无菌操作加入 10ml无菌水，用灼
烧灭菌的接种环将菌轻轻刮下，反复摇匀，制成菌悬液。将
菌悬液稀释 10 倍后备用。
1. 2. 4 三氯甲烷相抑菌圈法抑菌效果测定
将培养基熔化(细菌用营养琼脂培养基) ，在无菌操作
条件下，每个培养皿移入 20ml，待培养基凝固。吸取制备好
的菌悬液 0. 1ml，接种到培养基表面，快速用灭菌涂布棒均
匀涂布。待菌悬液完全渗入后，用均匀沾有抑菌液的直径
10mm无菌滤纸片放在每个平板上 3 个，对照组的放一个。
将培养皿放入 37℃恒温培养箱中，24h 后取出观察实验结
果［1 － 2］，用十字交叉法测量抑菌圈直径，每孔测量三次，取
·722·黑龙江医药 Heilongjiang Medicine Journal Vol. 26 No. 2 2013
DOI:10.14035/j.cnki.hljyy.2013.02.034
平均值。
1. 2. 5 三氯甲烷相 MIC法抑菌效果测定
取灭菌试管若干支，按每组 7 支进行分组。每支试管
中加入灭菌的营养琼脂培养基 2ml，向第 1 支试管中加入
2ml药液，混匀后吸出 2ml加至 2 号试管中，如此稀释至第 6
管，此管弃去 2ml。则各管药物稀释倍数依次为 2、4、8、16、
32、64，药液浓度分别为 16、8、4、2、1、0. 5mg /ml。然后向各
管中加入 0. 1ml的菌悬液液。第七管放入两毫升的对照组，
摇匀取出两毫升，再加 0. 1ml 的菌悬液液。将培养物置于
37℃培养 24h后观察。
营养肉汤培养基透明为无菌生长，混浊为有菌生长。
以无菌生长的最低药物浓度作为最低抑菌浓度(MIC)。对
药液颜色较深、肉眼不宜判定有无细菌生长者，在营养琼脂
平板上划线接种，37℃恒温培养 24h 后取出，以无细菌生长
平板内药物的最小浓度为此药物对该菌株的最低抑菌浓
度。
1. 3 三氯甲烷相抑菌圈法抑菌效果分析
在抑菌液浓度为 32mg /ml 的情况下，各菌种的抑菌圈
直径如表 1:
表 1 狼爪瓦松氯仿相提液对供试细菌的抑菌效果
菌种
抑菌圈直径
1 2 3 平均抑菌直径
大肠杆菌 13. 5mm 12mm 12mm 12. 5mm
枯草杆菌 14mm 12. 5mm 13. 5mm 13. 3mm
变形杆菌 12mm 11mm 12. 5mm 11. 8mm
金黄色葡萄球菌 13. 5mm 13mm 14. 5mm 13. 7mm
对照 － － － －
注:－代表没有抑菌圈。
图 1 狼爪瓦松氯仿相对变形杆菌的抑菌效果
图 2 狼爪瓦松氯仿相对枯草杆菌的抑菌效果
图 3 狼爪瓦松氯仿相对金葡菌的抑菌效果
图 2 狼爪瓦松氯仿相对大肠杆菌的抑菌效果
从以上数据可以得出:抑菌圈直径金葡菌 ＞枯草杆菌
＞大肠杆菌 ＞变形杆菌，狼爪瓦松的三氯甲烷相对菌株的
抑制效果:金葡菌 ＞枯草杆菌 ＞大肠杆菌 ＞变形杆菌，其中
金黄色葡萄球菌、枯草杆菌为革兰氏阳性菌，大肠杆菌、变
形杆菌为革兰氏阴性菌。
1. 4 三氯甲烷相 MIC法抑菌效果分析
抑菌液的原浓度为 32mg /ml，经过系列 2 倍稀释后计算
得出各菌株的 MIC值。
表 2 最低抑菌浓度的测定
菌种
药夜浓度 mg / ml
16 8 4 2 1 0. 5
大肠 － － － + + +
枯草 － － － － + +
变形 － － + + + +
金黄 － － － － + +
对照 + + + + + +
注:+代表有菌落出现，－代表无菌落。
从以上数据可以得出:狼爪瓦松氯仿相对大肠杆菌的
最低抑菌浓度为 4mg /ml，对枯草杆菌的最低抑菌浓度为
2mg /ml，对变形杆菌的最低抑菌浓度为 8mg /ml，对金黄色
葡萄球菌的最低抑菌浓度为 2mg /ml。枯草杆菌和金黄色葡
萄球菌的最低抑菌浓度最小，大肠杆菌次之，变形杆菌最
大。狼爪瓦松的三氯甲烷相对菌株的抑制效果为:金葡菌、
枯草杆菌 ＞大肠杆菌 ＞变形杆菌。其中金黄色葡萄球菌、
枯草杆菌为革兰氏阳性菌，大肠杆菌、变形杆菌为革兰氏阴
性菌。
两种抑菌实验所得出的数据相一致，狼爪瓦松的三氯
甲烷相对革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌均有抑制作用，且
对革兰氏阳性菌的抑制作用强于革兰氏阴性菌。
2 研究结论
本课题主要对狼爪瓦松的氯仿相提取物做了抑菌实
验，得出氯仿相对四种菌都具有较好的抑菌效果，但抑菌效
果不同，其中对大肠杆菌的最低抑菌浓度为 4mg /ml，对枯草
杆菌的最低抑菌浓度为 2mg /ml，对变形杆菌的最低抑菌浓
度为 8mg /ml，对金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度为 2mg /
ml。结果证明本实验方法是可以实施，希望能为我国景天
科植物的抑菌药理活性提供科学依据。
参考文献
［1］ 周皴，刘属燕，邹丽芳，等 . 几种野生植物提取物抑菌作用研
究［J］. 中国野生植物作物资源，20042，3(2) :30 ～ 38.
［2］ 蔡玉英，张伟韦，兴光，等 . 中药瓦松粗提物抗菌效应［J］. 时
珍国医国药，1999，12(12) :885 ～ 886.
收稿日期:2012 － 03 － 01
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