全 文 ：成都中医药大学学报
Journal of Chengdu University of TCM
2014 年 3 月第 37 卷第 1 期
Mar. 2014，Vol. 37，No. 1
藏药大车前草中大车前苷的定性和定量分析
吴恋 王春艳 吕维 叶娜 罗红丽 江道峰 范成杰 万丽
(成都中医药大学 药学院，教育部中药材标准化重点实验室，
中药资源系统研究与开发利用省部共建国家重点实验室培育基地，四川 成都 611137)
摘 要:目的: 建立藏药大车前草药材的定性定量方法。方法: 以大车前苷为指标性成分，以硅胶 G
为吸附剂，乙酸乙酯-甲醇-甲酸-水 ( 18∶ 3∶ 1. 5∶ 1) 为展开剂，紫外光灯 ( 365 nm) 下检测，建立大车前
草药材的薄层色谱鉴别方法。用高效液相色谱法进行含量测定，DIKMA Diamonsil C18色谱柱 ( 250 ×
4. 6 mm 5 μm) ; 流动相为乙腈-0. 1%磷酸 ( 18∶ 82) ，流速: 1 mL /min; 检测波长 330 nm; 柱温: 30℃。
结果: 大车前草药材薄层色谱在紫外光灯 ( 365 nm) 下检识，大车前苷呈亮蓝色荧光斑点，斑点清晰，分
离效果佳; 高效液相色谱法含量测定大车前苷在 0. 09 ～ 11. 22 μg 呈线性 ( r = 0. 999 ) ; 加样回收率为
100. 64% ( ＲSD = 0. 95% ) ; 测得 4 批大车前草中大车前苷的含量在 0. 094% ～ 1. 361%。结论: 通过对 4
批大车前草中的大车前苷进行定性和定量分析，证明所建立的薄层色谱鉴别和高效液相色谱法含量测定方
法简便可靠，准确度高，重复性好，为大车前草的质量标准建立提供了实验依据。
关键词:大车前草; 大车前苷; 薄层色谱; 高效液相色谱; 质量标准
中图分类号:Ｒ291. 408;Ｒ284. 1 文献标识码:A 文章编号:1004-0668 (2014)01-0048-03
DOI编码:10. 13593 / j. cnki. 51-1501 / r. 2014. 01. 048
基金项目:四川省食品药品监督管理局《四川省藏药材标准》 ( 2013 版) 标准研究课题
作者简介:吴恋，女，1989 年生; 硕士研究生在读; 研究方向: 中药质量分析; E-mail: wulian0726@ sina. com。
通讯作者:万丽，女，1965 年生; 理学学士，教授; 研究方向: 中药质量分析; E-mail: wanli8801@ 163. com。
Qualitative and Quantitative Analysis of Plantamajoside
in Plantago major L.
WU Lian，WANG Chun-yan，LV Wei，et al
(School of Pharmacy，Chengdu University of TCM，The Ministry of Education Key Laboratory of Standardization of Chinese Herbal Medicine，
State Key Laboratory Breeding Base of Systematic Ｒesearch，Development and Utilization of Chinese Medicine Ｒesources，Chengdu，611137，China)
［Abstract］ Objective:To establish qualitative and quantitative methods to analysis the Plantago major L. Methods:Using
plantamajoside as the maker compound. A TLC method was developed to identify the plantamajoside in 4 Plantago major
L. sample. Using silica gel G as coating substance and a mixture of ethyl acetate-methanol-formic acid-water (18∶ 3∶ 1. 5∶ 1)as a de-
veloping solvent，examining under the ultraviolet lamp (365 nm);A HPLC method was established to determine the content of plan-
tamajoside in the samples. Plantamajoside was separated at 30℃ on a DIKMA Diamonsil C18 (250 × 4. 6 mm 5 μm)column with ace-
tonitrile － 0. 1% phosphoric acid (18∶ 82)as the mobile phase. The detection wavelength was set at 330 nm and the flow rate was 1
mL /min. Ｒesults:The tested samples and the marker compound plantamajoside showed as a distinct light-blue fluorescence spot ob-
served under UV 365 nm，the separation effect was excellent. In the HPLC determination，good linearity of the calibration curve be-
tween the peak area and the concentration of plantamajoside was obtained in the range of 0. 09 ～ 11. 22 μg (r = 0. 999)，and the aver-
age recovery of plantamajoside was 100. 64% with a ＲSD of 0. 95% . The contents of plantamajoside were in the range of 0. 0935% -
1. 31% in the samples. Conclusions:The established TLC identification and HPLC determination were sensitive，reliable and repeat-
able，which can be applied for the quality evaluation and standard criteria of Plantago major L.
［Key Words］:Plantago major L.;plantamajoside;TLC;HPLC;quality standard
·84·
第 1 期 吴恋 等 藏药大车前草中大车前苷的定性和定量分析
大车前草为传统藏药，为车前科植物大叶车前
(Plantago major L. )的干燥全草，藏药名纳然姆，
具有愈伤消炎，止热泄的功效［1］。其药理作用包
括祛痰、镇咳、利尿、缓泻、抑制血管紧张素转化
酶、帮助伤口愈合［2 － 5］等。
大车前草的化学成分主要可分为黄酮类、苯乙
醇苷类、环烯醚萜、三萜及甾醇类等［6］。据报道，
含苯乙醇苷类的药用植物大多具有清热消毒、保肝
利尿、明目降压、滋阴补肾、补中益气等功效［7］，
这些作用与大车前草的主要功效相吻合。此外，大
车前草中的苯乙醇苷类化合物大车前苷具有抗氧
化、抗炎、解痉［8 － 10］等活性，适于作为指标成分。
目前的各种藏药标准中，均无大车前草的质控标
准。本次研究中，选用大车前草中的活性成分大车
前苷作为指标成分，建立藏药大车前的薄层色谱鉴
别和高效液相色谱定量分析方法，为大车前草质量
标准的建立准提供实验依据，有利于进一步对民族
药进行质量控制。
1 材料
1. 1 仪器
Aglient 1200 型高效液相色谱仪 (G1315D-
DAD 检测器，G1316A 柱温箱，G1311A 四元泵，
Agilent ChemStation 色谱色谱工作站)，安捷伦公
司;KQ-3200E型超声波清洗仪，昆山市超声仪器
公司;BP-211D 电子天平 (十万分之一)，德国
Sartorius公司。
1. 2 药材与试剂
4 批次大车前草药材采集于不同产地，经成都
中医药大学标本中心卢先明教授鉴定为车前科植物
大车前 (Plantago major L. )。
大车前苷 (Plantamajoside)对照品购于中国
生物制品检定所 (批号:111914-201102，含量测
定用);乙腈为色谱纯，Fisher 公司;水为超纯水，
其余试剂均为分析纯;硅胶 G 薄层板，青岛海洋
化工厂分厂。
2 方法与结果
2. 1 薄层色谱鉴别
取本品粉末 1 g，加甲醇 10 mL，超声处理 30
min，滤过，滤液浓缩至 2 mL，作为供试品溶液;
另取大车前苷对照品，加甲醇制成每 1 mL 含 1 mg
的溶液，作为对照品溶液。吸取上述两种溶液各
5 μL，分别点于同一硅胶 G 薄层板上，以乙酸乙
酯-甲醇-甲酸-水 (18∶ 3∶ 1. 5∶ 1)为展开剂，展开，
取出，晾干，置紫外光灯 (365 nm)下检视，供
试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相
同的亮蓝色荧光斑点。对所收集的 4 批来自不同产
地的药材进行了薄层色谱鉴别，在相应位置上均检
出大车前苷，见图 1。
S 大车前苷对照品; 1. 康定县雅拉乡; 2. 康定县姑咱镇;
3. 新津县普兴镇; 4. 汶川县水磨镇
图 1 大车前 TLC图 (365 nm)
2. 2 含量测定
2. 2. 1 色谱条件
DIKMA Diamonsil C18色谱柱 (250 × 4. 6 mm
5 μm);流动相:乙腈-0. 1%磷酸 (18:82)，流
速:1 mL /min;检测波长 330 nm;柱温:30℃;
进样量:10 μL。理论塔板数以大车前苷峰计不低
于 3000，大车前苷与相邻组分色谱峰分离度大于
1. 5，达到完全分离。该色谱条件下的对照品与样
品色谱图见图 2。
t /min
t /min
1. 大车前苷
图 2 大车前苷对照品 (A)和大车前草药材 (B)HPLC图
2. 2. 2 对照品溶液的制备
称取大车前苷对照品适量，加 60%甲醇制成
1. 12 mg /mL的对照品溶液储备液。
2. 2. 3 供试品溶液的制备
·94·
成都中医药大学学报 2014 年第 37 卷
取本品粉末 (过二号筛)约 0. 5 g，精密称
定，置具塞锥形瓶中，精密加入 60%甲醇 25 mL，
密塞，称定重量，超声处理 (功率 150 W，频率
40 kHz)30 min，取出，放冷，再称定重量，用
60%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤
液，即得。
2. 2. 4 线性关系考察
分别量取适量对照品储备液，加 60%甲醇稀
释为浓度为 0. 009，0. 018，0. 056，0. 113，0. 281，
0. 561，1. 122 mg /mL 的对照品溶液，按上述色谱
条件分别测定，以峰面积 (Y)对质量 (X)进行
回归分析，得回归方程 Y = 1636X + 130. 0 (r =
0. 999)，结果表明，在 0. 09 ～ 11. 22 μg 内，有良
好的线性关系。
2. 2. 5 精密度试验
取浓度为 0. 113 mg /mL 的大车前苷对照品溶
液，按上述色谱条件连续进样 6 次，测定峰面积，
计算得大车前苷平均峰面积的 ＲSD 为 0. 65%，表
明该仪器精密度良好。
2. 2. 6 重复性试验
取同一批大车前草粉末 (过 2 号筛)，平行制
备 6 份供试品溶液，进样，测定峰面积，计算大车
前苷含量，平均值为 0. 19%，ＲSD 为 1. 74%，表
明该方法的重复性良好。
2. 2. 7 稳定性试验
取大车前草粉末 (过 2 号筛)，制备供试品溶
液，分别在 0，2，4，8，12，24 h 进样测定，其
峰面积的 ＲSD 为 1. 29%，结果表明，该样品溶液
在 24 h内稳定。
2. 2. 8 加样回收率试验
精密称取已知含量的大车前草药材粗粉约
0. 25 g，共 6 份，按含量的 1∶ 1 加入对照品，照上
述供试品溶液的制备方法制备，测定，计算回收
率，结果见表 1。
表 1 大车前苷加样回收率试验 (n = 6)
序号
样品
重
(g)
样品中的
含有量
(mg)
加大车
前苷
(mg)
测得量
(mg)
回收率
(%)
平均回
收率
(%)
ＲSD
(%)
1 0. 2506 0. 464 0. 452 0. 923 101. 63
2 0. 2511 0. 465 0. 452 0. 917 100. 10
3 0. 2501 0. 463 0. 452 0. 921 101. 40
4 0. 2519 0. 466 0. 452 0. 915 99. 33
5 0. 2514 0. 465 0. 452 0. 917 99. 98
6 0. 2507 0. 464 0. 452 0. 922 101. 37
100. 64 0. 95
结果表明，平均回收率为 100. 64%，ＲSD 为
0. 95%，该方法可靠性良好。
2. 2. 9 样品的测定
取各产地大车前草药材粗粉 0. 5 g，精密称定，
制备供试品溶液，分别精密吸取对照品溶液与供试
品溶液各 10 μL，按照上述色谱条件测定，采用外
标一点法计算样品中大车前苷的含量，见表 2。
表 2 样品中大车前苷含量测定 (n = 3)
编号 样品批号
大车前苷
含量 /%
大车前草中大车
前苷平均含量 /%
1 Dcq － 201207 0. 094
2 Dcq － 201208 0. 188
3 Dcq － 201303 1. 361
4 Dcq － 201304 0. 653
0. 574
3 讨论
3. 1 薄层色谱鉴别条件的选择
在薄层色谱实验中，考察了多个展开系统，最
终选定乙酸乙酯-甲醇-甲酸-水 (18 ∶ 3 ∶ 1. 5 ∶ 1)为
展开剂。该展开系统的 Ｒf 值适宜，斑点清晰，分
离效果好。供试品的制备采用甲醇超声处理的方
法，简便快捷。大车前苷为苯乙醇苷类化合物，在
紫外光灯 (365 nm)下检视呈亮蓝色荧光斑点，
不需显色剂，便捷可靠。考察了不同硅胶 G 薄层
板 (市售薄层板、本实验室自制)、不同温度
(24℃、5℃)、不同湿度 (88% ＲH、60% ＲH、
32%ＲH)对薄层色谱的影响。结果显示，供试品
溶液均能达到很好的分离效果，说明该鉴别方法的
耐用性好。
3. 2 高效液相色谱条件的选择
在高效液相色谱试验中，比较了甲醇-水系统
和乙腈-水系统的分离效果，结果表明乙腈-水系统
的分离效果更优。在水中加入 0. 1%的磷酸，可显
著改善峰形拖尾，对分离度等均有良好效果。通过
对不同色谱柱、不同高效液相色谱仪的考察，确认
了该方法耐用性良好。
3. 3 提取方法的选择
苯乙醇苷类极性较大，一般采用水、甲醇、稀
醇等溶剂提取。本次研究中，考察了不同溶剂
(甲醇、80% 甲醇、60% 甲醇、40% 甲醇、水)、
不同超声提取时间 (15 min、30 min、45 min)对
大车前苷提取效率的影响，最终确定以 60%甲醇
超声提取 30 min为最佳提取条件。
3. 4 大车前草药材中大车前苷的含量比较
实验结果表明，大车前苷在不同批次的大车前
草药材中含量存在差异，与文献报道结果相似［11］。
由于药材的生长环境、采收季节和储存条件的不
同，可能导致药材中大车前苷的含量变化，有待进
一步的研究。
( 下转第 59 页)
·05·
第 1 期 江婷 等 丹蛭降糖胶囊联合生活方式干预 2 型糖尿病患者颈动脉斑块的临床观察
面改善优于对照组 (P ＜ 0. 05)，AST、ALT、
BUN、Cr生化指标前后无差异 (P ＞ 0. 05)。随着
现代人得生活方式和饮食结构的改变，动脉血管粥
样硬化的患者将越来越多，在临床工作中要结合颈
动脉超声检查，及时采取相应的措施来减慢，甚至
逆转动脉粥样硬化的进程。
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(收稿日期:2013-10-28 责任编辑:陈莎莎
檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵
)
( 上接第 50 页)
本文采用大车前草的活性成分大车前苷为对照
品，对大车前草药材进行了定性定量研究，方法简
便，重复性、可靠性好。为建立藏药大车前草的质
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