全 文 ：大 叶 蒟 药 材 质 量 标 准 研 究
慕丽群　雷飞凤　李修善
(广西万寿堂药业有限公司 ,南宁市　530219)
　　【摘要】　目的　建立大叶蒟药材质量标准 。方法　用薄层色谱法对大叶蒟进行鉴别 ,并用高效液相色谱
法测定大叶蒟中有效成分 5-甲氧基-3, 4-次甲二氧苯基桂皮酸异丁基酰胺的含量 。结果　薄层鉴别色谱斑点
清晰;5-甲氧基 -3, 4-次甲二氧苯基桂皮酸异丁基酰胺在 10 ～ 164 μg/ml范围内呈良好线性关系(r=0.99995,
n=6),平均回收率为 97.03%, RSD为 1.09%,稳定性试验结果显示溶液在棕色容量瓶中比较稳定。结论　本方
法简单 、易行 、重现性好 ,可用于大叶蒟的质量控制。
　　【关键词】　大叶蒟;5-甲氧基-3, 4-次甲二氧苯基桂皮酸异丁基酰胺;薄层色谱法;高效液相色谱法
　　【中图分类号】　R282.5　　【文献标识码】　A　　【文章编号】　0253-4304(2010)12-1559-03
　　大叶蒟 PiperlaetispicumC.DC.为胡椒科胡椒属植
物 ,主要分布于我国的广东 、广西 、云南和海南省 ,民间
异名小肠风 、山胡椒 、野胡椒 ,主要功能为活血 、消肿 、
止痛 [ 1, 3] ,其同属植物胡椒 PipernigrumLinn.的成熟果
实 -黑胡椒作为胡椒属经典药用植物始载于 《唐本
草》。 Stohr等 [ 2]通过对中国 19种胡椒属植物体外抗
前列腺素和白三烯合成的抑制作用的研究 ,发现 19种
胡椒属植物中大叶蒟抗 cyclooxygenase-1的作用最强 。
从大叶蒟的根和茎中分离得到一些新的酰胺类化合
物:N-isobutyl-(3, 4-methy-lendioxyphenyl)-2E, 4E,
9E-undecatrien-oamide(Ⅰ ), N-isobutyl-9-phenyl-2E,
4E-nonadienamide(Ⅱ), N-isobutyl-7-phenyl-2E, 4E-hep-
tadienamide(Ⅲ),其中大叶蒟素(Ⅰ)有明显的抗抑郁活
性 ,其强度为氟西汀(prozac)的 5倍。 5-甲氧基-3,
4-次甲二氧苯基桂皮酸异丁基酰胺(以 K6表示),为首
次获得的天然产物 ,经方法学研究 ,以 K6作为大叶蒟
质量考察指标 ,方法简单 、易行 ,可用于大叶蒟的质量
控制 。
1　仪器 、试药
1.1　仪器　Agilent1100高效液相色谱仪 , DAD检测
器 , Prontosil120-5-C18-SH色谱柱(4.6cm×25.0 cm,
5 μm), SartoriusBS124S分析天平 , SK3300LH超声波
清洗器。
1.2　试药　对照品为自制 ,经光谱解析确定其结构为
化合物:K6纯度≥98%。配制溶液的试剂为分析纯 ,
流动相为色谱纯 。
1.3　对照品的化学结构确定　5-Methoxy-3, 4-methyl-
enedioxycinnamic- acidisob- utylamide(5-甲氧基-3,
4-次甲二氧苯基桂皮酸异丁基酰胺)。
　　结构解析:白色针晶 ,熔点(mp)91 ～ 93℃,质谱测
得分子量为 277。 1HNMRδ0.97,二重峰 , 6H,为两个
末端甲基;δ1.84,多重峰 , 1H,说明有一个偕二甲基的
次甲基;δ3.22,三重峰 , 2H,为一个亚甲基 ,与亚氨基 、
次甲基相连。δ3.91,单峰 , 3H,为芳香甲氧基。δ5.61,
宽峰 , 1H,为亚氨基氢 。δ6.00,单峰 , 2H,为二氧次甲
基 。δ6.67、δ6.72均为单峰 ,各 1H,为苯环上的两个
氢 ,处于间位。 δ6.24、δ7.51,各 1H, 均为二重峰 ,
J=15.3 Hz,为反式烯键。质谱裂解的主要碎片峰证实
了如上推断:m/z277为分子离子峰 , m/z220为 M+-CH
(CH3)2CH3 , m/z205为 M+-NHCH2CH(CH3)2 , m/x177
为 M+-CONHCH2CH(CH3)2。
　　根据以上推导 ,其结构为 5-甲氧基-3, 4-次甲二
氧苯基桂皮酸异丁基酰胺 。
2　方法及结果
2.1　鉴别　取本品粉末 2g,加无水乙醇 50 ml,加热
回流 1 h,滤过 ,滤液蒸干 ,残渣加无水乙醇 3 ml使其
溶解 ,作为供试品溶液。另取 K6对照品 ,加甲醇制
成每 1 ml含 1mg的溶液 ,作为对照品溶液。照薄层
色谱法(中国药典附录 Ⅵ B)试验 ,吸取上述两种溶液
各 5 μl,分别点于同一硅胶 GF254薄层板上 ,以石油
醚 -丙酮(2 ∶1)为展开剂 ,展开 ,取出 ,晾干 ,置紫外灯
1559广西医学　2010年 12月第 32卷第 12期
(254nm)下检视 。供试品色谱中 ,在与对照品色谱
相应的位置上 ,显相同颜色的斑点。如图 1。
图 1　大叶蒟薄层色谱图
S:对照品 K6;1:供试品溶液点样量 2 μl;
2:供试品溶液点样量 4 μl;3:供试品溶液点样量 6 μl
2.2　含量测定
2.2.1　色谱条件:CromasilC18柱(5μm, 250.0mm×
4.6mm);流动相:水 -甲醇-乙腈(40 ∶40 ∶20);流速:
1.0ml/min;柱温:25℃;检测波长 240 nm。
2.2.2　供试品溶液的制备:取本品粗粉 2 g,精密称
定 ,置具塞锥形瓶中 ,加甲醇约 50 ml,室温超声处理
30 min,取出振摇 ,滤过 , 溶液转移至 100 ml容量瓶
中 ,药渣加甲醇 20 ml同上 ,重复超声处理 2次 ,合并
溶液 ,转移至同一容量瓶中 ,加甲醇至刻度 ,摇匀 ,滤
过 ,即得。
2.2.3　对照品溶液制备:取 K6对照品适量 ,精密称
定 ,加甲醇溶解于棕色容量瓶 ,配制成 0.5124 mg/ml
溶液 ,作为储备液;精密吸取储备液 2 ml置于 25 ml
容量瓶中 ,加甲醇稀释至刻度 ,摇匀 ,作为对照品溶液
(40.992 μg/ml)。
2.2.4　标准曲线及线性关系考察:取 K6对照品适量 ,
精密称定 ,加甲醇溶解于棕色容量瓶 ,定容后分别配制
成浓度为 10.248μg/ml、20.496μg/ml、40.992μg/ml、
81.984 μg/ml、122.976 μg/ml、163.968 μg/ml的标
准品溶液进样 ,按供试品测定条件测定 ,以 K6峰面
积 Y对进样浓度 X(μg/ml)进行直线回归 ,得回归方
程:Y=110.03X-123.33, r=0.99995。结果显示 ,
K6在 10 ～ 164 μg/ml(进样量 0.2 ～ 3.3 μg)范围内
具有良好的线性关系 。
2.2.5　稳定性试验:(1)对照品 K6的稳定性试验:
取对照品 K6适量 ,精密称定 ,分别装入棕色和无色
容量瓶中 ,配制成供试溶液 ,每 2 h测定 1次 ,结果显
示溶液在棕色容量瓶中 , 24 h内稳定性良好 , K6峰面
积的 RSD为 1.24%。 (2)供试品溶液的稳定性试
验:将供试品溶液按照甲醇超声法制备后分成 2份 ,
分别置于棕色(样品 1)和无色容量瓶(样品 2)中 ,按
照测定条件 ,每隔一定时间进行测定 ,结果显示 ,在出
峰时间 9.2 ～ 9.5min处(对照品 K6),样品 1的峰面
积比较稳定;样品 2的相应峰面积在制备 2 ～ 3 h后
即下降 50%以上。所以供试品也必须放入棕色容量
瓶中。
2.2.6　精密度试验:精密吸取 81.984 μg/ml的对照
品溶液 20 μl,在上述色谱条件下重复进样 6次 ,测定
峰面积 ,计算得其 RSD为 1.001%,表明精密度良好。
2.2.7　重现性试验:取同一批大叶蒟药材 ,平行取 6
份 ,按 “2.2.2”项下方法制备成供试品溶液 ,精密吸
取 20μl,注入高效液相 ,测定峰面积 ,计算的 RSD为
1.45%,表明重现性好 。
2.2.8　加样回收试验:取大叶蒟药材(批号:080901,
含量:0.09%)1.0 g,平行称取 6份 ,精密称定 ,分别
加入对照品溶液(0.5124 mg/ml)2.00 ml,按 2.2.2
项下方法制备成供试品溶液 ,在上述色谱条件下测
定 ,测得 K6平均回收率为 97.03%, RSD为 1.09%。
2.2.9　样品含量测定:分别吸取对照品溶液和供试
品溶液各 20 μl,注入液相色谱仪 ,测定 ,结果 3批海
南产药材的 K6含量分别为 0.12%、0.06%、0.11%。
综上所述 ,供试品溶液的制备拟采用甲醇超声法
提取 ,后加入棕色容量瓶中定容即得 ,并在 2 h内完成
测定;该法测定 K6占药材的含量为 0.06% ～ 0.12%,
含量测定标准拟按干燥品计算 ,含 K6≥0.05%。
3　讨　论
3.1　K6的贮存　由于在溶液状态下 K6会随时间而
转化成同分异构体 ,含量下降 ,见光转化速度更快 ,所
以要求对照品装入棕色容量瓶中。
3.2　性味与归经 、功能与主治　本品根及根茎味辛
而麻 ,属温热性药材 ,民间用于治风湿 、类风湿关节
炎 、跌打损伤 、虫蛇咬伤 、牙痛 、痛经 、胃痛 、流行性感
冒等。在西双版纳民间用于治心胃气痛 、腹痛 、腹泻 、
呕吐 、消化不良等 [ 4 ～ 6] ;根和根茎在广东 、海南及东南
亚民间用本品与猪手炖煲治风湿 、类风湿关节炎等 。
3.3　测定波长的选择　对 K6及本药材提取物进行
紫外分光光度计扫描和 HPLC紫外检测 ,二者在波长
240nm附近均有最大吸收 ,故选择 240 nm作为检测
波长。
3.4　流动相选择[ 7～ 11]　以水 -甲醇 -乙腈(35∶35∶30)、
水 -甲醇(50∶50)、水 -甲醇 -乙腈(50 ∶40 ∶10)等
作流动相进行考查 , 发现三者在水 -甲醇 -乙腈
(40∶40∶20)时 K6具有良好的分离度 ,出峰时间
9 ～ 10 min,峰形较好而干扰较少 ,综合考虑确定流动
相以水 -甲醇 -乙腈(40∶40 ∶20)。
1560 GuangxiMedicalJournal, Dec.2010, Vol.32, No.12
参　考　文　献
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(收稿日期:2010-07-15　修回日期:2010-08-17)
HPLC法测定万通炎康片中异嗪皮啶的含量
雷飞凤　李修善
(广西万寿堂药业有限公司 ,南宁市　530219)
　　【摘要】　目的　建立高效液相色谱法测定万通炎康片中异嗪皮啶含量的方法 。方法　色谱柱 Hypersil
C18柱(5μm, 250 mm×4.0mm),以乙腈 -0.1%磷酸(20 ∶80)为流动相 ,检测波长为 342 nm。结果　异嗪皮
啶在 0.062 ～ 0.558μg范围内具有良好的线性关系 ,回归方程为:Y=2774.2X-15.91(r=0.99992),平均回收
率为 97.35%(RSD=1.42%)。结论　本法操作简单 、快速 ,且准确 、重现性好 ,可用于万通炎康片中异嗪皮啶
的含量测定 。
　　【关键词】　高效液相色谱法;万通炎康片;异嗪皮啶
　　【中图分类号】　R284.1　　【文献标识码】　A　　【文章编号】　0253-4304(2010)12-1561-03
　　万通炎康片是由苦玄参 、肿节风两味药材组成的
纯中药制剂 ,具有清热解毒 、消肿止痛的功效 ,对咽喉
肿痛 、咽喉炎 、扁桃体炎 、牙龈炎 、疮疖等有明显疗效。
但部颁标准收载的万通炎康片的质量标准只对苦玄
参 、肿节风进行了薄层色谱鉴别 ,没有含量测定项 ,不
能很好地控制本品内在质量。本次试验是摸索高效
液相色谱法(highperformanceliquidchromatography,
HPLC)测定肿节风的有效成分异嗪皮啶的含量 ,以便
提高质量标准 , 更好地控制本品质量。经方法学考
察 ,表明用 HPLC法测定肿节风中异嗪皮啶的含量 ,
具有专属性强 ,分离效果好 ,灵敏度高等优点 ,能有效
控制本品质量。
1　仪器与试药
1.1　仪器　高效液相色谱仪:Agilent1100 ;Agilent
VWD紫外可见光检测器;HP二维化学工作站;电子
天平:德国赛多利斯 BP211D(感量:0.01 mg);超声
振荡仪:SK3300LH(上海科导超声仪器有限公司);
Agilent8453紫外可见分光光度计 。
1.2　试药　异嗪皮啶对照品(批号:0837-200203,
供含量测定用 ,中国药品生物制品检定所提供);万
通炎康片(批号:040306,广西万通制药有限公司);
缺肿节风阴性样品 (广西万寿堂药业有限公司提
供)。
1.3　试剂　乙腈为色谱纯 ,水为二重蒸馏水 ,其他试
剂均为分析纯。
2　方法与结果
2.1　色谱条件　色谱柱:用十八烷基硅烷键合硅胶
为填充剂 HypersilC18柱(5 μm, 250 mm×4.0 mm);
流动相:乙腈 -0.1%磷酸溶液 (20 ∶80);流速:
1.0ml/min;柱温:室温;检测波长:342 nm;灵敏度:
0.05AUFS;进样体积:5 μl;理论塔板数(n)按异嗪皮
啶峰计算不低于 4 000。
2.2　对照品溶液的制备　精密称取异嗪皮啶对照品
18.05mg,置于 50ml量瓶中 ,用甲醇溶液稀释至刻度 ,摇
匀 ,作为异嗪皮啶对照品储备液(浓度为 0.361mg/ml)。
2.3　供试品溶液制备　取本品装量差异项下粉末约
1 g,精密称定 ,置于锥形瓶中 ,加水 20 ml,超声处理
10min,取出 ,放冷 ,转移至分液漏斗中 ,用氯仿提取 5
次 ,每次 20ml,合并氯仿液 ,蒸干 ,残渣加甲醇溶解 ,
并定容至 25 ml容量瓶中 ,摇匀 ,作为供试品溶液。
2.4　阴性对照溶液的制备　按本品的处方 、制法制
备缺肿节风的阴性样品 ,按供试品溶液制备方法制成
1561广西医学　2010年 12月第 32卷第 12期