全 文 ：生态科学2002年11月第2l卷第4期 ECOLoGICSCⅢNCENov，2002．21f4)：327—329
蜗牛纤维素酶提取工艺的初步研究
孙祖莉 刘玉田(烟台大学化学生物理工学院，山东，烟台264005)
【摘要】 利用白玉蜗牛的内脏废弃物，以蜗牛纤维素酶为主要提取酶类，采用正交实验的方法初步探讨了蜗牛酶的提取
工艺条件。研究结果表明：蜩牛纤维索酶的提取时间约为10h、pH为5．O、提取温度为0℃，盐析饱和度为70％，得到纤
维衰粗品的最高酶活力为1柏2u·Inl～。
关量词白玉蜗牛纤维素酶提取工艺
中圈分类号： Q503 文献标示码：A 文章编号：1008_8873(2002)04-327一03
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蜗牛属于软体动物门，腹足纲，大蜗牛属。它来
源简单，繁殖较快，饲养方便，以摄取富含纤维素的
植物性材料为主，可将纤维素水解产生的葡萄糖作为
生长发育的能源物质。蜗牛肉除以高蛋白、低脂肪、
不含胆固醇、肉质细腻、味道鲜嫩可口外，蜗牛消化
腺中含有二十余种酶，具有应用价值的主要有纤维素
酶、果胶酶、∞淀粉酶、l，4-p-D甘露糖内切酶、p-
D葡萄糖水解酶、*甘露糖苷酶、甘露糖醇氧化酶、
氨基酸转移酶和胆碱脂酶，其中以纤维索酶
(10％)、果胶酶(10％)、∞淀粉酶(8％)最多“’
”。在不影响蜗牛食用的情况下，如何充分利用蜗牛的
内脏废弃物．提取蜗牛酶．既利于蜗牛的综合利用，
增加效益．又利于环保，将成为我们研究的课题。
本文以白玉蜗牛内脏为原料，采用正交实验方法，
以蜗牛中的纤维素酶为主要提取酶类．对蜗牛酶的提取
工艺进行初步的探讨．为研究工作提供相应的思路。
l材料和方法
1．1材料
白玉蜗牛(胁溉卵m砥口)由烟台飞龙蜗牛养殖厂提
供。2001年10月宰杀，内脏放入冰箱冰冻；羧甲基纤维
索钠(o忙小h)由上海青东化工厂生产；sepIl幽【坩50
为Pllmmcia产品；透析袋D8mm为青岛华泰生物产品
公司提供：其余试剂均为国产分析纯试剂。
1．2蜗牛纤维素酶样品制备”’”
1．2．1选择重约20～30g的蜗牛．用清水冲洗干净，轻
轻敲碎蜗牛外壳，并小心剥去，可食用肉送去食品加
工间，内脏废弃物收集后放置．18℃冰箱冷冻作为酶提
取原料。
1．2．2 取出冰箱冷冻蜗牛内脏物，稍微化开，放入组
织捣碎机机中．再加入3倍体积的柠檬酸磷酸盐缓冲
溶液匀浆，保持低温条件下搅拌提取后，3℃离心15
nlill(8000rpm)，收集上清液，进行纤维素酶活力分
析。
1_3纤维素酶活力测定方法”’”
1．3．1 稀释酶液：用pH值5．0的柠檬酸磷酸盐缓冲溶
液配制。
1．3．2底物：将0．6g的羧甲基纤维素钠溶于100lIIl，
pH值5．0的柠檬酸磷酸缓冲溶液中。
1．3．3 酶活力分析：将酶液与底物分别于40℃水浴锅
中预热，然后取0．5Inl酶液加入2．0ml底物溶液中。
混匀．于40℃反应30111in，加2．5111l3．5-二硝基水杨
酸，取出置沸水浴中5min，立即用自来水冷却。另做
一空白管，以O．5tIll水代替酶液，其他操作同样，在
721型分光光度计上测出490nm处的光密度值，对照
葡萄糖标准曲线，求出酶活力。
1．3．4 酶活力单位：在上述条件下，每分钟产生1
啪删葡萄糖的酶量为一个活力单位。
孙祖莉(1铺2_．女，耐教授．主要从事食品科学与生暂技术方面的
爵，‘B_吐m埔州u鲥㈣加咀．09-“收蔫．擀ll—∞娅
万方数据
生态科学 21卷
2 结果与讨论
2．1葡萄糖标准曲线的绘制
取8支2011ll刻度试管，分另iJ力口入o．00，o．10．
0．20．0．30，O．40，0．50，0．60，0．70，0．80m1的l
mg·m1。的标准葡萄糖溶液，用0．2m01．L_1醋酸钠缓
冲溶液定容至5rnl后，各管均加入llTll2m01．L1氢
氧化钠溶液和2删DNs显色剂，摇匀后置于沸水浴中
加热．5rIlin后自来水水冷却，蒸馏水定容至20rnl，
摇匀。以1号管为对照于490nm处测定各管的OD
值。以葡萄糖溶液量为横坐标，OD值为纵坐标，绘制
标准曲线。结果如图l所示。
标准葡萄糖量G1ucⅨ”qu锄n州㈣
圈1葡萄糖标准曲线
ngl Thest卸d丑rdcurve0f—u∞辨
2．2蜗牛纤维素酶提取工艺条件的选择
首先对蜗牛纤维素酶提取工艺过程中的缓冲溶液
pH、室温(约20℃)提取时间和硫酸胺盐析饱和度进
行选择。采用三因素、四水平正交实验安排”1。正交实
验的因素水平如表l所示。根据正交实验设计方案，
蜗牛纤维素酶提取工艺条件的结果如表2所示。
从正交实验的结果得出；Rn>RB>Rc，在此三个
因素中对于纤维素酶提取工艺条件影响的大小依次为
缓冲溶液pH>提取时间>盐析饱和度。对于因素A，
K2>蝎>瞄>K1，以缓冲溶液的pH为5．0较为合适，
其余依次为5．6、6．2、4．4；对于因素B，K4>K3>K1
>K2，室温提取时间为5h较为合适，其余依次为4
h、2h、3h；对于因素c，K3>K2>K4>Kl，硫酸胺
盐的盐析饱和度为70％较为合适，其余依次为60％、
8U％、50％。
2．3蜗牛纤维素酶提取温度的选择
酶是生物活性物质，随着提取温度的变化，酶的
活性会发生相应的变化。在以上初步确定提取工艺条
件的情况下，对蜗牛纤维素酶的提取温度进行了初步
研究。我们选择了四个水平，分别为冰水混合物(o
℃)、冰箱冷藏室(约lo℃)、室温(约20℃)、30
℃的水浴，所得结果如表3所示。
盐析前，提取温度为20℃的纤维素酶活力最高，0
℃时其次、提取温度为lo℃、30℃的纤维素酶活力较
低。盐析后纤维素酶活力变化趋势相同。引起这一结
果的原因，可能是低温下酶没有完全溶出所致。为证
实这一分析，我们设计了以下的实验，在0℃和20℃
条件下适当延长提取时间。结果如图2所示。
由图2可以看出：提取时间延长到10h时，O℃下
提取的纤维素酶活力明显高于20℃条件下，由此证明
我们的分析是正确的，也就是，在0℃下提取时间太短．
裹2蜗牛酶提取工艺的正交实验表
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2．967
2．406
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1．59l
1．969
0．644
1．610
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不能将材料中的纤维素酶完全提取出来，为了增大产
率，应该适当的延长提取时间；虽然较高的提取温度
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蜗牛纤维素酶提取工艺的初步研究
作者： 孙祖莉， 刘玉田
作者单位： 烟台大学化学生物理工学院,山东,烟台,264005
刊名： 生态科学
英文刊名： ECOLOGIC SCIENCE
年，卷(期)： 2002,21(4)
被引用次数： 2次

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2.缪静.张术臻.程显好.冯志彬.王营营 纤维素酶提取工艺及酶学性质的研究[期刊论文]-安徽农业科学 2008(19)


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