全 文 ：生态科学2003年11月第22卷第4期 ECOLoolCSCIBNCEou2003．22【4)：349～350
18SrDNA序列分析鉴定棕囊藻香港株P2为球形棕囊藻
陈丽芬1一，章 群卜，骆育敏1，韩博平1(1．逝南人学水生生物司f究所．广州510632：2．国家城市供
水水质监测唰广州监测站，广州510160)
【摘要】 有毒赤潮原捌种镓囊藻(P^口∞t炉m印．)生活史复杂，且形体微小，缺乏l埘确_ⅡJ靠的分类标准。1997、1999
年中国东南沿海发生两次棕囊藻赤潮，但目前种的鉴定仍存曲÷混乱。本文测定了香港海域一株棕囊藻靠涮原l对种P2的
18srDNA部分核苷艘序列，序列鲢度为650bp，并对j￡进行了分子鉴定，结果表叫1#为球形棕囊藻(只gfo幻阳)。
关键词：袜囊藻；分子糖定；18srDNA
中图分类号：0503 文献标识码：A 文章编号；I008．s873(2003)04．349—02
Mokcl-laridentmcatlon0fthe110ⅡgKo唧st憎inP2ofjl，l棚pc倒括硒朋Ⅱ即咖gf。6咖，cHEN“一ren，zHANGQun’．
LuOYu-min．HANBo-ping(1．1nstituceorHydmbiology．Jinanuniversity，Guangzhou510632；2．NationaInetworkfwater
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AbstractThetoxical鐾ae尸^口∞c州括isoneofkey【axajnredtide—c洲sed训ne甜g酡，due【Oitscomplexh teromorphicllfe
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sⅡainis，璩dfDoⅦfb占如6D础
Keywords：P^删D掣5，括；MOlecularident讯c撕on：18SrDNA
棕囊藻(肼ⅪPo删埘s)隶属定鞭金藻纲(尸nMn￡．
j^印妙把或日印鲫，砂娜)，能暴发性增殖形成有害赤
潮，对海洋水产业、海洋生态环境和自然景观的破坏
相当严重。1997年lO月～1998年2月在我国东南沿
海首次暴发大规模棕囊藻赤潮，渔业损火惨重；1999
年7月在饶平、南澳等海域再次暴发棕囊藻赤潮”“。
棕囊藻的种类鉴定目前基本停留在形态分类阶
段，由于具有复杂的异型生活史，且形体微小，缺少
可靠而有效的鉴别特征，在种的分类鉴定方面一直存
在斟扰．如国内已发表的有关棕囊藻的学术论文使tl{j
了4个不同的学名：只巧即M曲P耐、只po“曲e耐、P
F如6D∞、P巧g如施mll。4J。棕囊藻分类的抛乱，影响
了信息和情报交流，制约了相关研究的深入。
分子标记技术的发展，使DNA分子成为区分物
种、变种、地理株的有效手段。目前18SrRNA及其
基因已被广泛用于分子系统学研究，解决了许多疑难
海洋藻类的分类鉴定问题。本文报道了采用J8sd)NA
序列分析对香港海域一株棕囊藻的分子鉴定结果。
1材料与方法
1．1藻种来源
藻种由香港大学生物多样性系藻种室提供，采自
香港将军澳水域．编号为P2。
1．2 DNA的提取及PcR扩增
总DNA的提取采用CTAB法，PCR扩增引物为
18SF：5’CCTGGTTGATCCTGCCAG3’和18SR；5’TT
GATCCTTcTGcAGGTTCA3’。PcR，反应条件为
95℃变性4min；然后95℃45sec50℃45sec70℃
2min4个循环；95℃30sec56℃30sec70℃2IIlin
25个循环后，于72℃延伸10min。
1．3序列测定
以PcR产物直接测序，序列测序引物为18sF。
序列测定在上海}尊亚公司PEABIPRISM377DNA
白动测序仪上进行。
1．4数据分析
表1本文所分析的藻类18srDNA基因序列来源
T叠Me1 Ge曲ank黜oe蟠幻n0，m髓日EFl融alldt Ie删tg阳叩
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1999 P36 2000
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越盎项H：国家闩然科学鲢盘(柏10砷14)，广东省自然科学譬盘(0007∞)
作者简介；陈丽芬(1978一)，盘．碘士研究生。主要研究方向为水域生
击与环境科学
·城讯联系人
2003．09．18收蕊．2003一Il_20接受
万方数据
生态科学 22卷
TAGTCATATGCTTGTCTC．AAAG TTAAGCCATGCATGTCTAAGTATAAGCGACTTGTACTGTGAAACTGC70
GAATGGCTCATTAAATCAGTTATGGTTTCTTTGATGGTACCTTGCTACTTGGATACCCGTAGTAATTCTA140
GAGCTAATACATGCAGGAATGCCCGACTTCGGAAGGGCTGTATTTATTAGATAAGAAACCTTCTCGGGTT210
CGCCCGGTTGTGTGCTGAGTCATAATAACTGCTCGAATCGCACGGCTCTACGCCGGCGATGGTTCATTCA280
AATTTCTGCCCTATCAGCTTTCGATGGTAGGATAGAGGCCTACCATGGCGTTAACGGGTAACGGAGAATT350
AGGGTTCGATTCCGGAGAGGGAGCCTGAGAGATGGCTACCACATCCAAGGAAGGCAGCAGGCGCGTAAAT420
TGCCCGAATCCTGACACAGGGAGGTAGTGACAAGAAATAACAATACAGGGCTACTTCtAGTCTTGTAATT490
GGAATGAGTACAACTTACATCTCTTCACGAGGATCAATTGGAGGGCAAGTCTGGTGCCAGCAGCCGCGGT560
AATTCCAGCTCCAAAAGCGTATATTAAAGTTGTTGCAGTTAAAACGCTCGTAGTCGGGTTTCGGGTCGGG630
CCGAGCGGTCTGCCGATGGG 650
固1棕囊藻株P2的18srDNA5’端部分核苷酸序列
Fizl5’teI删衄lseque眦e0f18SrDNAofstrainn
将P218srDNA序列与GenBank数据库中棕囊藻及
外类群18srDNA序列进行比较，序列来源见表l。
_l千jClustalX软件对DNA序列进行排列．在MEGA2．1
软什包中使_I_|JFimura2参数模型，白展数据集
(b00Istmps)为1000，运川最小进化法构建分子系
统树。
2结果与讨论
2．1 P2藻株的18srDNA序列测定已测定的P218s
rDNA部分序列K度为650bp，序列对准后艮651bp。
本文所测核苛酸序列见圈l。
2．2藻株P2的鉴定并¨分类
最近研究及我竹J的：r作表明，等鞭金藻类
(如。c^，w打)为棕囊藻属的近缘类群，故在本研究中
选作外类群。以最小进化法所做的P2分子系统树结果
见图2。
图2
持率)
CⅣP韶8
C村PT520
ccMP628)处在同一分支上，白展数据支持率为
98％。该结果从分子水平鉴定了香港藻株P2为球形棕
囊藻。
棕囊藻属分类目1前仍以形态分类为主。由于超微
结构平¨生活史的研究尚不深入。不同环境雨I地理分布
的棕囊藻类形态不完全相同，导致棕囊藻分类混乱。
中国东南沿海分布的赤潮棕囊藻在形态上与只
pD“曲P耐sensulato中细分出来的各个种都有一定的
异同性，且不同藻株的生理生化特性有一定变化。且
不同学者在分类鉴定时所使_l_|j的分类标准不同，中国
东南沿海海域的棕囊藻被定名为4个种，已如前述。
近年米，分子标记技术被j’泛应f_}1于赤潮藻类的
分类鉴定，关丁棕囊藻属的分类现状见拙作”I。由于
中国海域不同藻株的生理生化特性不完全相同”l，中
国海域到底有多少种棕囊藻，尚需分别对棕囊藻的不
同藻株进行分子鉴定，详细的棕囊藻属分子系统学研
究将另文发表，这里只报道棕囊藻香港株P2的分子鉴
定结果。
致谢 香港大学生态与生物多样性系Hodgekiss教授提供棕囊
藻香港株P2。
参考文献
藻株P2的分子鉴定(分支上，下的数字表示自展数据支
[1】
Fig2 M0lecldari e删6ca6哪ofn(t啪tstrapvaIu器an
givenad扭c∞tlme神bnode)
拓扑结构显示棕囊藻属分为4个人的分支
(clade)：P如^n“是本研究中其余棕囊藻的姐妹群，
白展数据支持率为97％，是棕囊藻属内分化最早的～
支。P∞，妇m独立为一个分支，P口n埘陀“∞CCMP
1374是只pD“c^P耐P360的姐妹群，白展数据支持率
为91％。P2与2株只异如幻阳藻类(ccMP1528和
卜朝样，吕颂辉，陈菊芳，等，1998．广东沿海几种赤潮生
物的分类研究【J1．武汉植物学研究，16(4)：310-314．
【2】何家苑，施之新，张银牛，等．1999．一种棕囊藻赤潮的形
态特征与毒株分析⋯．海洋与湖沼，30(2)：172．179．
[3】陈菊芳，徐宁，黄长江，等．1999．中国赤潮新记录种一
球蟛棕囊藻(P^删cp出咖6D船)．暨南大学学报，20(3)：
124_12．
【4】黄跃江，带巧香，郑磊．1999．1997年底中国东南沿海大
规模赤潮棘闲生物的形态分类与生态学特征IJ】海洋与湖
刑，∞(6)：58l-590
嘲陈脯棼，章群，许忠能，等2003．棕囊藻属的分类现状
【J】．生态科学，22(1)：93-94．
【6】沈萍萍．三F艳．齐雨藻，等．2000球形棕囊藻的生长特
性及生活史研究【J】．水生生物学报．24(6)：635．“3．
万方数据
18 S rDNA序列分析鉴定棕囊藻香港株P2为球形棕囊藻
作者： 陈丽芬， 章群， 骆育敏， 韩博平
作者单位： 陈丽芬(暨南大学水生生物研究所,广州,510632;国家城市供水水质监测网广州监测站,广州
,510160)， 章群,骆育敏,韩博平(暨南大学水生生物研究所,广州,510632)
刊名： 生态科学
英文刊名： ECOLOGIC SCIENCE
年，卷(期)： 2003,22(4)
被引用次数： 1次

参考文献(6条)
1.黄长江;董巧香;郑磊 1997年底中国东南沿海大规模赤潮原因生物的形态分类与生态学特征[期刊论文]-海洋与湖
沼 1999(06)
2.陈菊芳;徐宁;黄长江 中国赤潮新记录种一球形棕囊藻(Phaeocystis globosa)[期刊论文]-暨南大学学报
1999(03)
3.何家苑;施之新;张银华 一种棕囊藻的形态特征与毒素分析[期刊论文]-海洋与湖沼 1999(02)
4.王朝晖;吕颂辉;陈菊芳 广东沿海几种赤潮生物的分类研究[期刊论文]-武汉植物学研究 1998(04)
5.沈萍萍;王艳;齐雨藻 球形棕囊藻的生长特性及生活史研究[期刊论文]-水生生物学报 2000(06)
6.陈丽芬;章群;许忠能 棕囊藻属的分类现状[期刊论文]-生态科学 2003(01)

引证文献(1条)
1.刘海林.章群.江启明.马奔 赤潮棕囊藻(Phaeocystis globosa)rDNA ITS区序列变异与二级结构分析[期刊论文]-
生态科学 2010(5)


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